佘德勇 ， 董玉兰 ， 秦卓明 ， 李 晶 ， 黄迪海 ， 杨昆鹏 ， 徐怀英 ， 陈耀星

(1.中国农业大学动物医学院， 北京海淀100193； 2.山东省农业科学院家禽研究所， 山东济南250100；3.山东省健牧生物药业有限公司， 山东济南250100)

鸡脾转移因子对鸡肠道抗炎因子和致炎因子分泌的影响

佘德勇1， 董玉兰1， 秦卓明2,3， 李 晶1， 黄迪海3， 杨昆鹏1， 徐怀英2,3， 陈耀星1

(1.中国农业大学动物医学院， 北京海淀100193； 2.山东省农业科学院家禽研究所， 山东济南250100；3.山东省健牧生物药业有限公司， 山东济南250100)

为研究鸡脾转移因子对蛋雏鸡肠道细胞因子分泌的影响，试验选取200只SPF白来航蛋鸡，随机均分成4组。各组从5日龄开始分别灌服0.1 mg/只·d、0.25 mg/只·d及1 mg/只·d剂量的鸡脾转移因子(灌服1周，停喂1周)；对照组灌服生理盐水。40日龄屠宰称重，取十二指肠、空肠、回肠及直肠组织，ELISA方法检测TNF-α、IL-10的表达水平。结果表明，1 mg剂量组鸡的体重显著高于对照组(P<0.05)。0.25 mg和1.0 mg剂量组十二指肠内TNF-α水平显著降低(P<0.05)；0.25 mg/d剂量组十二指肠、直肠的IL-10含量显著提高(P<0.05)；1 mg剂量鸡脾转移因子显著提高十二指肠IL-10含量(P<0.05)，极显著提高空肠、回肠和直肠的IL-10含量(P<0.01)。综上结果表明，鸡脾转移因子可提高鸡肠道抗炎因子表达，抑制促炎因子分泌，改善肠道黏膜免疫屏障功能。

鸡脾转移因子； 肠道黏膜免疫； TNF-α； IL-10

鸡脾转移因子(Chicken Spleen Transfer Factor,CSTF)，是一组由鸡脾脏淋巴细胞释放，无抗原性小分子多肽、核苷酸、氨基酸类物质组成的物质，具有调节受体细胞介导免疫的能力，在国内外已成为一种应用广泛的增强免疫制剂，其进入机体后可活化淋巴细胞，促进T淋巴细胞分化，增强机体免疫功能[1]。研究表明，转移因子可以通过体液免疫及细胞免疫反应途径对机体的免疫状态进行调节[2-3]。肠黏膜组织中淋巴细胞因子分泌平衡对肠道免疫功能至关重要，但是长期CSTF调节肠黏膜局部细胞因子分泌平衡的相关报道相对较少，因此，本研究对蛋雏鸡长期应用CSTF对肠道局部免疫细胞因子分泌的影响进行探究，以丰富转移因子调节肠道免疫机能的作用机制。

1 材料与方法

选取1日龄SPF白来航蛋鸡200只，自由采食与饮水。试验鸡随机均分为4组，其中3组为试验组，5日龄始灌服CSTF，有效剂量分别为：0.10 mg/只·d、0.25 mg/只·d、1.0 mg/只·d。CSTF饲喂1周，停喂1周。对照组灌服生理盐水。至40日龄各组随机挑选8羽进行称重后屠宰，迅速截取十二指肠、空肠、回肠以及直肠全层组织，置-80 ℃冰箱冷冻保存。组织匀浆，应用ELISA定量检测试剂盒(购自北京莱博泰瑞科技发展有限公司)检测TNF-α、IL-10水平。试验用CSTF由山东省健牧生物药业有限公司制备，其有效浓度为1.0 mg/mL。

2 数据统计与分析

试验数据使用SPSS17.0软件进行统计分析，用One-way ANOVA 来比较不同试验组差异。所有数据均使用平均数±标准差表示。P<0.05时表示差异显著，用“*”表示，P<0.01时表示差异极显著，使用“**”表示，P<0.001时表示差异极显著，使用“***”表示。

3 试验结果

3.1 CSTF对鸡体重的影响 如图1所示，1 mg剂量组试验鸡的体重显著高于对照组(P=0.0363)。0.1 mg和0.25 mg两种剂量CSTF对40日龄鸡体重的影响差异未达到显著水平。因此高浓度CSTF能够促进鸡只增重。

图1 CSTF对鸡体重的影响

3.2 CSTF对40日龄鸡肠道TNF-α水平的影响 TNF-α是肿瘤坏死因子，它可以促进T细胞产生各种炎症因子，进而促进炎症反应的发生。表1结果表明，灌服0.25 mg/d和1 mg/d CSTF在40日龄鸡的十二指肠中可显著下调TNF-α的水平58%(P=0.0446)、37.51%(P=0.0450)，差异显著。但是3种剂量CSTF对空肠、回肠及直肠中的TNF-α表达含量没有显著影响。因此，CSFP仅对肠道前段致炎因子下调作用显著。

3.3 CSTF对40日龄鸡肠道IL-10水平的影响 IL-10主要由Th2细胞，是一种抗炎性因子，发挥下调炎症反应、拮抗炎性介质的作用。对IL-10含量统计结果如表2所示，灌服0.1 mg/d剂量的CSTF试验鸡四个肠段IL-10表达水平变化与对照组相比没有达到显著水平。灌服0.25 mg/d CSTF能够显著升高十二指肠及直肠内IL-10水平(P=0.0160，P=0.0110)，但空肠、回肠内IL-10水平与对照组无显著性差异。灌服1 mg/d的CSTF可以显著提高十二指肠、空肠、回肠及直肠内IL-10水平(P=0.0495，P=0.0099；P=0.0023，P=0.0019)。因此，高浓度的CSTF才能增强肠黏膜抗炎因子的分泌。

表1 CSTF对鸡肠道TNF-α含量的影响 (pg/mg)

表2 CSTF对40日龄鸡肠道IL-10水平的影响 (pg/mg)

4 讨论

20世纪50年代Lawrence等人[4]首先提出转移因子的概念，经过几十年的研究与临床应用，表明TF具有调节受体细胞介导免疫的能力。临床利用转移因子治疗先天性的小儿反复呼吸道感染，处理新城疫发病鸡群都有显著效果[5-6]。

各种致炎因子与抗炎因子之间的协作是调控机体内炎性发展的关键。在肠道免疫应答反应中 TNF-α 起到促炎性因子的角色[7]，而且对几个由基因突变导致且伴有炎症性肠炎的疾病研究表明，TNF和这种并发症存在密切联系[8]。TNF-α还可以调节细胞因子和趋化因子(例如CXCL1，CXCL5和IL-8)的产生，并由此调节趋化性和免疫效应机制[9]。本试验表明，CSTF的作用下，十二指肠促炎因子TNF-α水平显著降低，说明在该段肠道中CSTF有效降低了体内的应激水平，促进了机体肠道的健康。

IL-10作为肠道炎性疾病中重要的抑炎性细胞因子，能够抑制活化的T细胞产生IL-2、IFN-γ等致炎性细胞因子，从而防止过度免疫应答所造成的损害[10]。IL-10为Th2特异性分泌，Th1/Th2细胞的平衡紊乱是肠道炎性疾病的重要发病机制之一[11-12]。有研究表明，IL-10可以显著下调肠道炎性疾病患者固有层单核细胞分泌TNF-α[13]，TNF-α水平的降低意味着体内炎性反应将受到抑制。本研究结果表明，在CSTF作用下，试验组各段肠道中IL-10含量发生显著性增加，说明CSTF对于保障Th1/Th2细胞的平衡有着直接的影响。由此可以推测，CSTF通过对Th1/Th2细胞相互间转化的影响，来增强肠道体液免疫功能，维护肠道黏膜健康。

综上，蛋雏鸡长期应用CSTF，促进肠道局部黏膜组织抗炎因子分泌，在一定肠段抑制致炎因子分泌，调节Th1/Th2免疫平衡，调控肠道黏膜免疫应答，并促进鸡只增重。

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Effect of chicken spleen transfer factor on secretion of chicken’sintestinal anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines

SHE De-yong1, DONG Yu-lan1, QIN Zhuo-ming2,3, LI Jing1, HUANG Di-hai3,YANG Kun-peng1, XU Huai-ying2, CHEN Yao-xing1

(1.China Agricultural University, College of veterinary medicine, Beijing 100193，China； 2.Poultry Institute, Shandong Academy of Agricultural Science, Jinan 250100，China； 3.Shandong Jianmu Biological Pharmaceutical Co., Ltd.Jinan 250100， China)

In order to study the effect of chicken spleen transfer factor on the expression of intestinal cytokines in laying hens and the regulation of intestinal mucosal immune function,200 SPF white leghorns were selected and evenly divided into 4 groups randomly.The groups were fed with 0.1mg/d,0.25mg/d and 1mg/d doses of chicken spleen transfer factor from 5 days old(fed a week and stop for a week).The control group was administered with physiological saline.When chicken grew to the 40 days old,duodenum,jejunum,ileum and rectum were collected and TNF-α(Tumor necrosis factor-α),and IL-10(Interleukin-10)were analyzed.The results showed that the weight of 1mg-TF-fed chicken was significantly higher than that of control group(P<0.05).Treatment with 0.25 mg/d and 1.0 mg/d TF significantly decreased TNF-α in duodenum compared to control group(P<0.05).IL-10 level was significantly enhanced in duodenum and rectum of chicken with 0.25 mg-TF-fed(P<0.05),and in duodenum(P<0.05),jejunum,ileum and rectum(P<0.01)of chicken with 1.0 mg-TF-fed.Data showed that chicken spleen transfer factors could improve the expression of anti-inflammatory factors,inhibit pro-inflammatory cytokine secretion,and improve intestinal mucosal immune barrier function.

Chicken spleen transfer factor ； Intestinal mucosal immunity ； TNF-α ； IL-10

CHEN Yao-xing

2017-01-06

国家高技术研究发展计划(863计划)(2013AA102306)；国家自然科学基金(31372332；31272483；31572476)

佘德勇(1977- )，男，讲师，博士，研究方向为动物肠黏膜免疫学，E-mail：15855281060@139.com

陈耀星，E-mail：yxchen@cau.edu.cn

S858.31

A

0529-6005(2017)02-0003-03