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猪圆环病毒3型在韩国猪群中的流行状况调查

2017-01-17梁海英等译

中国畜牧兽医文摘 2017年11期
关键词:圆环相似性毒株

咸 文 梁海英等译

猪圆环病毒3型在韩国猪群中的流行状况调查

咸 文 梁海英等译

猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)是环状病毒科圆环病毒属的无囊膜病毒,基因组为单股环状DNA。众所周知,猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)均对猪具有感染性。但是,最早被鉴定为PK-15细胞污染物的PCV1已知对猪是无致病性的,而PCV2感染则可导致诸如断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS),猪皮炎与肾病综合征(PDNS)及种猪繁殖障碍等多种与猪圆环病毒2型相关疾病(PCVAD),使养猪业遭受巨大的经济损失。在韩国,PCV2于1999年从具有PMWS的样品中被首次鉴定报道,现已成为韩国猪群中普遍存在的病原之一。

最近,利用宏基因组学方法,在具有PDNS和繁殖障碍的临床病例中,鉴定出一种被称为猪圆环病毒3型(PCV3)的新型猪圆环病毒。此外,PCV3在患心脏和多系统炎症的病猪中也可被检测到。尽管对PCV3的关注越来越多,但目前在韩国对这种病毒的分布情况知之甚少。本研究拟对收集的口腔液样品进行PCR检测,以确定PCV3在韩国的流行现状和遗传特征。

2016年,实验共随机收集了源自6个地理省份的73个不同养殖规模(200~500头母猪)的自繁自养猪场的共360管口腔液样本(1管样本约来自20头猪),每个采样猪场的临床病史和疾病状况未做调查。样本被分为4组,即断奶组(67/360),生长组(136/360),成年组(124/360)和病猪组(33/360)。所有样品分别以3 000r/min离心10min处理后,取上清液分装保存于-80℃备用。使用DNA提取试剂盒,分别提取-80℃保存备用的口腔液样品中的病毒DNA。

利用针对PCV3 ORF2的特异性引物,对提取的DNA进行PCR检测,预扩增大小为330bp(Palinski et al., 2017)。检测结果显示,在360管口腔液样本中,159个样本呈现PCV3病毒DNA阳性(44.2%),72.6%(53/73)的猪场中存在PCV3病毒DNA,广泛分布于韩国各省。四组中患病率最高的为病猪组,比例为51.5%;生长组(42.6%)和成年组(41.1%)明显低于断奶组(49.3%)。

从9个不同猪场中选出PCV3强阳性样本,分别使用两对PCV3特异性引物进行扩增,共获得了9个毒株(KU毒株)的全长基因组(GenBank登录号KY996337~KY996345),大小与其他PCV3毒株相同均为2 000bp,推导的ORF2大小均为645bp。序列分析结果表明,PCV3韩国毒株与美国毒株全基因序列相似性为98.9%~99.8%,推导的ORF2的序列相似性为97.9%~99.8%;PCV3韩国毒株之间的全基因序列相似性为99.0%~99.9%,ORF2的序列相似性为98.1%~100%;PCV3韩国毒株与美国毒株的Cap蛋白氨基酸序列相似性均为97.6%~100%。

系统发育分析显示,韩国PCV3病毒与美国和中国PCV3病毒株密切相关。在这两个系统发育中,韩国PCV3毒株是分散的,没有任何基于国家的地理关联。

PCV3是最近在猪场中出现的一种猪的新型病毒,其感染的猪表现出PDNS和繁殖障碍等临床症状;尤其是经过宏基因组测序显示,只有PCV3能从流产胎儿中被检测出来(Phan et al.,2016;Palinski et al.,2017)。 在韩国也出现了类似情况,即从发生繁殖障碍的猪场中获得的流产胎儿,经检测仅从样本中发现有PCV3,却未检测到任何与流产相关的其他病原体。

据报道,在中国PCV3也是在繁殖障碍猪群及新生仔猪急性死亡中唯一能检测到的病原体(Ku et al,2017)。这些报道表明,PCV3与繁殖障碍之间可能存在关系。虽然尚未在猪细胞系中分离获得PCV3(Palinski et al,2017),但通过建立一个能在体外分离获得病毒的体系来研究PCV3的发病机理,不失为一个新的研究方向。

本研究扩大了对PCV3分布和遗传特征的认识,PCV3在韩国猪群中广泛分布,病猪群样本检出率最高。在韩国,PCV3在猪群和猪场的阳性检出率,明显高于此前中国猪群(34.7%,77/222)和猪场(68.6%,24/35)的流行病学调查结果(Ku et al,2017),这可能与口腔液样品采集方法更具广泛性有关,其是评估猪群健康状况的有效方法。

遗传进化分析表明,PCV3毒株间的基因组成高度相似,然而也发现了较小的遗传多样性。由于PCV2疫苗效果在一定程度上体现了PCV2的临床意义,虽然PCV3的临床意义尚未明确,但还需通过各种方法进行临床观察及实验研究,以确定PCV3与临床表现之间的关联。

摘自《猪业科学》2017年第10期

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