王士荣 汪洋 党安坤 陆峰 兰邹然 张月（山东省动物疫病预防与控制中心 250022）

新城疫研究进展

王士荣 汪洋 党安坤 陆峰 兰邹然 张月*（山东省动物疫病预防与控制中心 250022）

新城疫由新城疫病毒的强毒株引起多种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，人类偶尔亦可感染，给世界禽业养殖带来了毁灭性打击。本文就新城疫病毒分子特性、流行病学调查、诊断技术和疫苗免疫等方面进行了综合性分析，希望对疫病防控提供理论支持。

新城疫病毒；分子特性；流行病学调查；诊断技术；疫苗免疫

新城疫 (Newcastle Disease，ND）俗称 “鸡瘟”，由新城疫病毒 (Newcastle Disease Virus，NDV）的强毒株引起多种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，人类偶尔亦可感染，给世界禽业养殖带来了毁灭性打击，造成极为严重的影响[1]。ND传播快、死亡率高，被国际兽疫局 (OIE）列为A类传染病，农业部也将其列为动物的一类疫病和优先防控的动物重大疫病之一。典型的新城疫发病急促、伴有呼吸困难、神经机能错乱、排黄绿色稀便、黏膜出血、鸡嗉囊积液、扁桃体坏死和腺胃乳头出血。而非典型症状主要表现为呼吸系统与神经系统症状。在公共卫生方面，如果工作人员接触大量病毒会导致结膜炎[2]。

1 新城疫病毒分子特性

1.1 形态结构和理化特性

新城疫病毒 (NDV），有些地方称之为禽副黏病毒I型(Avian Paramyxovirus 1，APMV-1），根据国际病毒分类学委员会 (ICTV）发布于2002年的报告，将NDV归为副黏病毒科的腮腺炎病毒属。病毒颗粒呈多形性，如圆形、椭圆形和杆状，具有双层包膜结构，该包膜由受感染机体细胞外膜的脂类与病毒的糖蛋白结合而衍生得到。病毒粒子内含一多盘绕的竹状衣壳，囊膜表面覆盖有长度不一的糖蛋白 (HN和F蛋白），具有血凝素 (HA）和神经氨酸酶 (NA）活性[3]。一般情况下NDV病毒对外界环境抵抗力较强，在55℃条件下经45min或阳光直射30min才可被灭活，对化学消毒防腐药较敏感。

1.2 分子生物学特性

NDV的基因组是一条全长15156 kb的单链负股RNA，分子量在 5.2×106～5.6×106之间， 顺序为： 3'-NP-P-M-FHN-L-5'。NDV的基因组编码6种特异性结构蛋白，其中3'端核衣壳蛋白 (NP）含量最高，分子量约55 kDa。磷蛋白 (P）与病毒的复制和转录有关。非糖基化内膜蛋白 (M）分子量约为40 kDa，是一种能够支配NDV RNA合成和参与病毒颗粒装配的基础蛋白，同时与病毒进出宿主细胞有密切关系。融合糖蛋白 (F）位于病毒囊膜表面，决定NDV毒力。血凝素神经氨酸酶 (HN）是一种分子量约为74 kDa的表面纤突状蛋白，参与病毒对宿主细胞的识别，决定病毒毒力的强弱。蛋白 (L）分子量250 kDa，在病毒中的含量不高，参与RNA的复制和转录。此外，NDV通过RNA编辑还产生两种非结构蛋白V蛋白和W蛋白，也参与了NDV致病过程。病毒具有血凝特性、神经氨酸酶活性、细胞融合性与溶血活性等生物学活性。

2 新城疫病毒流行病学调查

ND最早于1926年发现于印尼的爪哇岛和英国的滨海小镇新城[4，5]，全球大流行的开始。从1926年开始，全球范围共出现过4次新城疫的大流行。首次大规模流行源于印尼的爪哇，第二次大流行爆发于上世纪60年代末期的亚洲，特别是中东地区，1973年的时候ND已经传播扩散到全球范围，主要包括V和VI基因。之后国际间的交往日益频繁，加速了大流行的传播速度，20世纪70年代末在亚洲由鸽子先引发了第三次大流行。第四次大流行也源于中东地区，主要基因型VII。马闻天等在1946年首次分离得到NDV，从而证实我国ND的存在和流行。NDV可以感染一般的禽类，比如鸡、火鸡、野鸡等，特别最容易感染鸡，其次是野鸡，水禽也可带毒，但水禽几乎不会将病毒传播给家禽[6]。新城疫常年可发病，以春、秋两季为主，发病鸡和鸟类是重要的传染源，感染NDV后各个部位均能携带并排出NDV。

3 新城疫诊断技术

3.1 血清学诊断技术

目前最为流行的是血凝抑制试验，NDV的囊膜外有血凝素，可以凝集宿主的红细胞。该方法做起来很简便、不需要特别的器皿工具[7]。琼脂扩散试验具有很好的特异性，应用于一些病毒的抗原和毒力的测定，以及抗体的检测。免疫荧光技术和酶联免疫吸附试验都是利用了带有荧光标记物的抗原抗体反应，两者具有很高的特异性和灵敏性，但是后者对包被的抗原纯度有较高要求，操作起来麻烦[8]。

3.2 分子生物学诊断技术

在NDV诊断中常用的技术就是反转录-聚合酶链反应(RT-PCR），是一种选择性体外扩增RNA片段特异性和灵敏性较好的方法，可以直接检测到组织或粪便中的病毒，快速而简便。基因芯片技术可用于基因表达分析、基因突变研究和病原检测等，是一种新型的具有突破性的分子诊断技术。另一种具有高度灵敏度和特异性的诊断方法是核酸探针分子杂交法，可以合成特异性的核酸探针来检测NDV。单克隆抗体技术被广泛应用于临床上大量样品的筛查，可以对病毒抗原进行差异性分析。目前，荧光实时定量检测技术是NDV定量检测中使用最多的分子诊断方法，该方法经过PCR产物累积，荧光信号强度逐渐增强，然后通过高度自动化分析仪进行分析，做到了真正意义上的DNA定量检测，并且可以同时检测很多数量的样品[9]。

4 新城疫疫苗免疫

4.1 活苗

活苗是将诱导获得的弱毒株、筛查得到的天然弱毒株或失去了毒力的无毒株制备为疫苗，不需要佐剂。研究者将鸡新城疫疫苗的毒株接种到1日龄SPF鸡胚进行孵化，大量增殖病毒，最后收集含有疫苗毒的尿囊液进行冻干，这样就得到了活苗。该疫苗生产起来方便且便宜，但也存在毒力返强，对储藏和运输保存条件要求高等不利因素[10]。一般该疫苗大多免疫60～120日龄左右的青年鸡，不能用于4周龄以下的幼鸡。

4.2 灭活疫苗

目前使用较多的新城疫灭活疫苗是油乳剂灭活苗。灭活苗主要通过SPF鸡胚增殖病毒并使用40%甲醛进行灭活，然后再加入相应的弗氏完全佐剂。其优点是没有散播疾病的危险，可生成较高水平且持续时间长的抗体，而且对储存和输送条件都要求较低。不过油乳剂灭活苗的生产成本比较高，而且免疫方式需要单个注射，费时耗力，所以现在灭活苗主要和其它疫苗制成多联苗，一次接种可同时预防多种疫病。

4.3 基因工程疫苗

基因工程苗是用分子生物学方法改造病原基因，降低其致病性并提高其免疫原性，或者将病毒的抗性基因克隆到无毒的表达载体上制备而成。NDV囊膜表面的HN和F蛋白是研究人员研制NDV基因工程苗的首选基因，目前已经研究出亚单位疫苗、重组活载体疫苗、DNA疫苗、合成肽疫苗等多类疫苗。目的基因通常含有多个抗原表位，可以同时诱导多种保护性抗体。基因苗的优点是能够长期有效刺激机体的免疫系统，诱导的免疫效应可持续一年以上，有些甚至是终生免疫，而且储存起来很方便、不散毒。

[1]王志亮,刘华雷.新城疫的流行历史与现状[M].北京:中国农业出版社,2012.

[2]崔治中.我国家禽新城疫流行现状[J].中国家禽,2002,24(4):4-6.

[3]鲁建刚.信阳地区鸡新城疫的流行病学调查[D].河南郑州:河南农业大学,2009.

[4]马闻天.鸡新城疫[J].中国兽医杂志,1982(6):2-6.

[5]曹殿军,郭鑫,梁荣,等.第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C].2001.

[6]赵娟,石宝兰,张伟,等.鸡新城疫疫苗及其研究进展[J].中国畜牧兽医文摘,2015,31(6):16-22.

[7]刘万华,王晶钰,武宁,等.鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验[J].动物医学院进展,2013,34(3):62-67.

[8]牛玉娟,马海营,张振东,等.新城疫疫苗毒和低致病性禽流感病毒感染SPF鸡炎症因子的变化[J].畜牧兽医学报,2015,46(4):644-649.

[9]尹训刚,管同恒,常莹莹.鸡新城疫综合防制措施研究[J].山东畜牧兽医,2008,29(11):6-7.

[10]Brett Stuart.全球家禽业动向[J].兽医导刊,2016(11).

鸽新城疫流行病学调查及综合防制技术研究，2015GNC110027。

王士荣 （1970-），女，汉族，山东省济南市人，助理兽医师，主要从事实验室设备管理工作。

*通讯作者:张月 （1982-），女，汉族，山东省济南市人，博士研究生，兽医师，主要从事分子病原学研究。