李惠，王卫杰，何栋

（开封医学科学研究所，河南开封 475000）

地骨皮蒽醌对高脂血症大鼠胆汁酸代谢机理研究

李惠，王卫杰，何栋

（开封医学科学研究所，河南开封 475000）

试验采用SD大鼠作为试验动物，通过以高脂饲料诱导其高脂血症地鼠作为动物模型，研究单方中药地骨皮中蒽醌成分对高脂血症SD大鼠胆汁酸代谢的调节作用，阐明地骨皮对调节高脂血症大鼠胆汁酸的有效成分的影响及其机理。雄性SD大鼠适应性喂养1周后，随机分为正常对照组（10只，喂饲普通饲料）和模型组（50只，喂饲高脂饲料）。将造模成功大鼠40只随机分为辛伐他汀组、地骨皮蒽醌低、高剂量组，每组10只。大鼠单笼单只养殖，在0、1、2月，各收集4 d粪便标本，以乙醇-KOH抽提，以酶法测定胆汁酸及胆固醇浓度。试验前大鼠粪便胆汁酸各组之间无显著差异（P＞0.05）；药物干预后，蒽醌高、低剂量组与模型组差异极显著（P＜0.01），辛伐他汀组与模型组比无显著性差异（P＞0.05）。试验结果表明，和模型组比较，地骨皮总蒽醌显著升高高脂大鼠粪便中的胆汁酸水平，并且胆汁酸升高水平与地骨皮总蒽醌的给药剂量呈正相关。表明地骨皮总蒽醌的降脂机理可能与增加胆汁酸的外排有关。

地骨皮；蒽醌；大鼠；高脂血症；胆汁酸代谢

高脂血症（HLP）是代谢性疾病中一种常见而多发的重要病症，与心脑血管疾病、糖尿病等关系密切。临床常用西药降血脂药如辛伐他汀、普伐他汀等降脂作用疗效肯定，但有横纹肌溶解、肝功能损伤等副作用，并且疗效的持续性、长期服用的安全性一直是治疗的难题。近年来有大量研究表明，中草药可从不同环节干预高脂血症，且效果明显，因此，中草药复方制剂和中草药单味药及其提取物的降脂作用将越来越受到重视。

地骨皮（Cortex Lycii）为茄科植物枸杞或宁夏枸杞的干燥根皮。味甘、性寒，具有凉血除蒸、清肺降火之功效。现代药物化学研究发现，地骨皮主要化学成分为生物碱类、蒽醌类、有机酸类、肽类、苷类及其他化合物，并具有多种药理活性[1-3]。地骨皮具有降血压、降血糖等多种作用，近年来的研究表明，地骨皮还具有降脂的功效，并且在临床治疗中得到了广泛的证实[4-7]。蒽醌类成分是中草药降脂的主要活性成分之一，蒽醌类成分大多具有导泻功能，能减少肠道对胆固醇等的吸收及增加其排泄。通过减少外源脂质的吸收及增加排泄而达到降低血脂的目的。

本试验采用SD大鼠作为试验动物，通过以高脂饲料诱导的高脂血症地鼠作为动物模型，研究地骨皮中蒽醌成分对高脂血症SD大鼠胆汁酸代谢的调节作用，阐明地骨皮对调节高脂血症大鼠胆汁酸的代谢及其机理。

1 试验材料

1.1 试验动物

雄性SD大鼠购于河南省实验动物中心，SD雄性大鼠60只，体重为185.05±4.48 g。动物到达后单只单笼饲养，饲喂基础饲料（试验动物全价营养饲料，购于河南省实验动物中心），自由饮水，实验室温度为22～24℃，空气相对湿度控制在50%～65%，室内照明，12 h灯照、12 h黑暗。

1.2 饲料添加剂

胆盐、胆固醇、蛋黄粉购自北京华迈科生物技术有限责任公司，伊利全脂奶粉，市售猪油。

1.3 主要试剂

高密度脂蛋白测定试剂盒、低密度脂蛋白测定试剂盒、总甘油三酯测定试剂盒、总胆固醇测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；胆汁酸及检测试剂盒购自威特曼生物科技有限公司。

1.4 饲料制备

全价饲料营养水平见表1。

表1 全价饲料营养水平

以试验动物全价饲料为基础饲料，配成含基础饲料88.9%、胆固醇1%、胆盐0.1%、蛋黄粉5%、全脂奶粉5%、猪油10%的高脂饲料。

2 试验方法

2.1 高脂大鼠模型构建

雄性SD大鼠适应性喂养1周。随机分为对照组（10只，饲喂普通饲料）和模型组（50只，饲喂高脂饲料）。每两周断尾采血1次，分离血清并检测总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平（按试剂盒说明书检测）。4周后按照林征等造模标准，取成功高脂模型进行试验[8-9]。

2.2 分组及药品干预

将造模成功大鼠50只随机分为辛伐他汀组、地骨皮蒽醌低、高剂量组，每组10只。正常对照组和阴性对照组灌喂相应体积蒸馏水；辛伐他汀组（SIM）给药剂量为4 mg·kg-1·d-1；地骨皮蒽醌低、高剂量组给药剂量分别为40、20 mg·kg-1·d-1，用生理盐水2 mL溶解，各组每日灌胃1次。

等效剂量计算：根据徐叔云教授《药理试验方法学》，人与大鼠等效剂量系数为6.3。辛伐他汀人体最大用量40 mg·d-1，则大鼠用量为40÷60×6.3= 4 mg·kg-1，地骨皮人体最大用量为30 g，总蒽醌含量约为1%，则大鼠总蒽醌用量为30÷60×1%×6.3= 30 mg·kg-1

2.3 胆汁酸检测

大鼠单笼单只养殖，在0、1、2月，各收集4d粪便标本，干燥、粉碎，以乙醇-KOH抽提予酶法测定胆汁酸及胆固醇浓度，观察地骨皮蒽醌对高脂血地鼠粪便胆汁酸排泄的影响。

每天观察动物的活动、饮食情况，及时发现有无异常生病、受伤或死亡等情况，同时注意大鼠皮肤、被毛、黏膜、眼睛与呼吸、神经、运动系统功能及行为方面的改变。称量体重每月称取体重一次，并作记录。

在0、1、2月，各收集3 d粪便标本，保存于-20℃。真空冷冻干燥24 h取出后粉碎，混匀，准确称取0.5 g干粪，用10 mL 95%乙醇醇-KOH抽提2次，取上清液5 mL，用威特曼总胆汁酸检测试剂盒（速率法）进行检测。

2.4 统计分析

试验结果用SPSS 20.0软件采用One Way ANOVA进行统计，并进行Duncan's多重比较，结果以“平均值±标准误”表示。

3 试验结果

3.1 大鼠体重变化

试验各组大鼠体重变化情况见表2。

在整个试验过程中未见动物异常生病、受伤或死亡，各组大鼠活动、饮食、饮水情况良好，无明显变化。低、高剂量组大鼠粪便颗粒有变软，但无稀溏情况。由表2可知，本试验中，试验前各组大鼠体重之间无显著差异（P＞0.05）；试验中期，模型组大鼠体重组间无显著性差异（P＞0.05），与对照组相比均明显升高，差异极显著（P＜0.01）；试验末（药物干预后），各剂量组与模型组比差异显著（P＜0.05），蒽醌高剂量组与模型组差异极显著（P＜0.01）。

3.2 大鼠粪便胆汁酸的变化

试验各组大鼠粪便胆汁酸变化情况见表3。

表2 试验各组大鼠体重变化情况g

表3 试验各组大鼠粪便胆汁酸变化情况μmol·L-1

由表3可知，试验前大鼠粪便胆汁酸各组之间无显著差异（P＞0.05）；试验中期（建模成功），模型组大鼠组间无显著性差异（P＞0.05），与对照组相比均有升高，且差异极显著（P＜0.01）；试验末（药物干预后），蒽醌高、低剂量组与模型组差异极显著（P＜0.01），辛伐他汀组与模型组比无显著性差异（P＞0.05）。

4 讨论

高脂饮食可增加粪便中胆汁酸含量，本试验中，对照组大鼠粪便中胆汁酸的排量一直无明显变化。模型组大鼠在高脂饲养以后，粪便中胆汁酸呈上升趋势。与0月时比较，地骨皮蒽醌高低剂量组2月时粪便胆汁酸含量分别增加250%和238%，显著高于高脂模型，和模型组比较，地骨皮总蒽醌显著升高高脂大鼠粪便中的胆汁酸水平，并且胆汁酸升高水平与地骨皮总蒽醌的给药剂量呈正相关。表明地骨皮总蒽醌的降脂机理可能与增加胆汁酸的外排有关。

正常人胆汁中的胆汁酸按结构可分为两大类，一类为游离型胆汁酸，包括胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸和少量的石胆酸；另一类是上述游离胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合的产物称结合型胆汁酸，主要包括甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸，牛磺胆酸及牛磺鹅脱氧胆酸等。一般结合型胆汁酸水溶性比游离型大，PK降低，这种结合使胆汁酸盐更稳定，在酸或Ca2+存在时不易沉淀出来。随胆汁流入肠腔，初级胆汁酸在协助脂类物质消化吸收的同时，在小肠下段及大肠受肠道细菌作用，一部分被水解、脱去7α羟基，转变为次级胆汁酸。

肠道中的各种胆汁酸平均有95%被肠壁重吸收，其余的随粪便排出。胆汁酸的重吸收主要有两种方式：结合型胆汁酸在回肠部位主动重吸收；游离型胆汁酸在小肠各部及大肠被动重吸收。胆汁酸的重吸收主要依靠主动重吸收方式。石胆酸主要以游离型存在，故大部分不被吸收而排出。正常人每日从粪便排出的胆汁酸约0.4～0.6 g。

胆汁酸肠肝循环的生理意义在于使有限的胆汁酸重复利用，促进脂类的消化与吸收。正常人体肝脏内胆汁酸≤3～5 g，而维持脂类物质消化吸收，需要肝脏每天合成16～32 g，依靠胆汁酸的肠肝循环可弥补胆汁酸的合成不足。每次饭后可以进行2～4次肠肝循环，使有限的胆汁酸能够发挥最大限度的乳化作用，以维持脂类食物消化吸收的正常进行。而地骨皮总蒽醌通过增加胆汁酸的外排，影响胆汁酸的肝肠循环，影响脂类物质的消化和吸收，从而达到降脂的作用。唐大轩等研究表明，大黄蒽醌可以增加小鼠胃内容物以及小肠和结肠内容物；并可通过刺激胃肠道黏膜而增加蛋白质的分泌[6]。魏凤铃等研究表明，大黄总蒽醌有促进肠蠕动和致泻作用。地骨皮总蒽醌增加胆汁酸外排的机理可能与以上两点有关[10-11]。

5 结论

本试验通过以高脂饲料诱导的高脂血症地鼠作为动物模型，研究单方中药地骨皮中蒽醌成分对高脂血症SD大鼠胆汁酸代谢的调节作用，阐明地骨皮总蒽醌显著升高高脂大鼠粪便中的胆汁酸水平，并且胆汁酸升高水平与地骨皮总蒽醌的给药剂量呈正相关。表明地骨皮总蒽醌的降脂机理可能与增加胆汁酸的外排有关。

[1]宁娜,韩建军.地骨皮的化学成分与药理作用[J].现代药物与临床,2010,25（3）:172-176.

[2]魏秀丽,梁敬钰.地骨皮化学成分的研究[J].中国药科大学学报,2003,33（7）:580-581.

[3]张秀云,周凤琴.地骨皮药理及临床应用研究进展[J].广州化工,2012,40（7）:48-49,59.

[4]孟令杰,刘百联,张英,等.地骨皮化学成分研究[J].中草药, 2014,45（15）:2 139-2 142.

[5]李行诺,楚楚,毛慧琼,等.地骨皮化学成分研究[J].中国现代应用药学,2012（9）:805-808.

[6]周洁,朱伟.地骨皮的化学成分及药理研究进展[J].山西中医, 2008,24（2）:47-48.

[7]郑海群.地骨皮降血糖药理作用的研究进展[J].中国处方药, 2016,14（3）:13-14.

[8]陈美娟,邱服斌,张海杰,等.建立雄性SD大鼠高脂血症模型研究[J].中国预防医学杂志,2010,11（11）:1 113-1 115.

[9]林征,吴小南,汪家梨.雄性SD大鼠高脂血症模型饲料配方的实验研究[J].海峡预防医学杂志,2007,13（6）:56-57.

[10]唐大轩,谭正怀,梁媛媛,等.大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究[J].时珍国医国药,2007,18（6）:1 312-1 314.

[11]魏凤玲,常明.大黄中结合蒽醌的致泻作用及药动学研究[J].中国实验方剂学杂志,1999,5（6）:53-55.

Study on the Bile Acid Metabolism Mechanism of Anthraquinone Cortex Lycii in Hyperlipidemia Rats

LI Hui,WANG Weijie,HE Dong

（Institute of Medical Sciences in Kaifeng,Kaifeng 475000,Henan China）

This experiment used SD rats as experimental animal to clarify the mechanism of regulation of effective components in Cortex Lycii on bile acid mechanism with hyperlipidemia rat.The hyperlipidemia hamster induced by high fat diet as an animal model to study the effect of anthraquinone component of Cortex Lycii on hyperlipidemia SD rats in terms of bile acid metabolism.Adaptive feeding of male SD rats after 1 weeks,the rats were randomly divided into normal control group(10 rats,fed normal diet)and model group(50 rats fed with high fat diet).40 rats were randomly divided into simvastatin group,Cortex Lycii anthraquinone in low and high dose groups,10 rats in each group. Rats with single cage were fed only,in the 4 days of 0,January,February to collect fecal samples,determining the bile acids and cholesterol concentration in ethanol-KOH extract by enzyme method.Before the experiment the rats were no significant difference of fecal bile acids(P＞0.05);after drug intervention,anthraquinone high,low dose groups and model group were significant differences(P＜0.01),simvastatin group compared with the model group had no signifi-cant difference(P＞0.05).Compared with the model group,the total anthraquinone of Cortex Lycii significantly increased bile acid levels in the feces of hyperlipidemic rats and the bile acid level and total anthraquinone of Cortex Lycii dosage was positively correlated.It was described the possible lipid-lowering mechanismof totalanthraquinone of Cortex Lyciiandincreasedthe effluxof bileacid.

Cortex Lycii;anthraquinone;rat;hyperlipidemia;bile acid metabolism

R282；S865.1+2

A

1001-0084（2016）11-0040-04

2016-10-25

河南省科技攻关计划项目（122102310008）

李惠（1985-），女，河南开封人，实验师，主要从事动物实验相关科研研究。