姚克喜，张一君，许 栋，马海明

(湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙 410128)

宁乡猪肉质性状相关氟烷基因Hal多态性研究

姚克喜，张一君，许 栋，马海明

(湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙 410128)

为探讨宁乡猪肉质相关氟烷基因(Halothane gene，Hal)遗传多态性，利用PCR-RFLP检测该基因Hha I位点的多态性；结果表明，在宁乡猪中均只检测到了显性纯合子HalNHalN。与之比较，在781个大白猪的样本中检测到杂合子HalNHaln，基因型频率是0.003 8，但未发现隐性纯合子HalnHaln。本研究为宁乡猪肉质性状深入的研究打下基础。

猪；Hal基因；肉质性状

宁乡猪原产于湖南省宁乡县的流沙河及草冲一带，原名为流沙河猪或草冲猪。宁乡猪形成历史悠久，宁乡猪的特征是“丝颈葫芦肚，耳薄嘴筒齐，稀毛现薄皮，鱼尾后脚直，奶子一斩齐，四脚要撒蹄”，“乌云盖雪银颈圈”。宁乡猪体型中等，体质疏松细致，体躯呈圆筒状，毛色为黑白花，基本色调是四肢、肋腹及颈下部为白色，头和臀部呈黑色。

氟烷基因(Halothane gene，Hal)是肉质性状的

主效基因[1]。该基因被定位于猪的6号染色体上。氟烷基因有显性纯合子(HalNHalN)、(杂合子HalNHaln)和隐性纯合子(HalnHaln)。显性纯合子和杂合子表现为氟烷阴性，隐性纯合子表现为氟烷阳性，易产生应激综合征。本研究采用PCR-RFLP检测了宁乡猪Hal基因的基因频率和基因型频率，旨在筛选可应用于宁乡猪肉质性状遗传标记，为其保种和开发利用打下良好的基础。

1 材料与方法

1.1 样本采集

68头宁乡猪耳样采自宁乡大龙畜牧科技有限公司，781头大白猪耳样采自正虹科技股份有限公司原种猪场。耳组织-20 ℃保存。

1.2 猪的基因组DNA提取

按常规酚-氯仿法提取基因组DNA[2]。

1.3 引物合成与聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增

Hal基因引物Hha I位点PCR-RFLP的左引物为5'-TCC AGT TTG CCA CAG GTC CTA CCA-3'，右引物为5'-ATT CAC CGG AGT GGA GTC TCT GAG-3'。扩增片段大小为659 bp，由上海生工生物工程公司合成。PCR扩增的Hal基因片段长度为659 bp。PCR扩增反应体系为25 μL，包括模板Premix Taq 12.5 μL，上下游引物各5 pmol，DNA 1 μL，ddH2O补至25 μL。PCR扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35个循环；72 ℃后延伸10 min，最后4 ℃保存。

1.4 PCR-RFLP检测

利用Hha I酶切Hal基因659 bp。酶切反应体系为20 μL，其中PCR扩增产物10 μL，限制性内切酶4 U，10×Buffer 2 μL，37 ℃(Hha I酶)酶切8 h，酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测并确定基因型。

2 结果与分析

2.1 Hal基因PCR扩增产物的酶切

Hal基因659 bp的扩增产物被Hha I酶切为493 bp和166 bp 2条带，基因型为HalNHalN，若不被内切酶识别，扩增产物不能被酶切，只有一条659 bp的带，即HalnHaln基因型，杂合子HalNHaln被内切酶不完全酶切，显示659 bp、493 bp和166 bp 3条带。扩增产物经Hha I酶切的部分电泳结果见图1。

2.2 基因和基因型频率

在宁乡猪中只检测到了氟烷基因的显性纯合子HalNHalN。Hal基因的Hha I的酶切位点上。与之比较，在781个大白猪的样本中检测到了氟烷基因的杂合子HalNHaln，基因型频率是0.003 8，并未检测到隐性纯合子HalnHaln，经Hardy-Weinberg平衡适合性检测表明，均处于不平衡状态。

3 讨论

猪对氟烷敏感是由基因HalN和Haln控制，氟烷隐性纯合子猪虽然容易发生应激综合症，但氟烷基因杂合子猪的瘦肉率和饲料转化率较高，生长速度较快[3,4]。我国地方猪种不含隐性氟烷基因或频率极低[5]，宁乡猪只检测到了氟烷基因的显性纯合子HalNHalN，与此相符。在大白猪中并未发现隐性纯合子HalnHaln基因型，出现了极少量的杂合子HalNHaln。只含有少量杂合子，通过结合分子生物学的方法，能够剔除掉易发生应激综合症的HalnHaln基因个体，合理利用氟烷基因可提高猪种瘦肉率、饲料转化率，提高养猪业的效益。□□

（5篇，略）

S813.1

A

1001-0769(2016)11-0024-02