杨志勇，赵 赫，郝建国，王穆峰

(天津市奶牛发展中心，天津 300381)



口蹄疫二价苗对荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响

杨志勇，赵 赫，郝建国，王穆峰

(天津市奶牛发展中心，天津 300381)

[目的]研究口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛冷冻精液生产的影响。[方法]2～9岁荷斯坦种公牛肌肉注射口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗后，统计分析注射前半个月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力、冻精精子畸形率和冻精产量的差异性。[结果](1)2～9岁种公牛各时间段的射精量、鲜精密度、冻精活力、冻精产量无显著差异(P>0.05)；注射后第一周的鲜精活力显著低于注射前半个月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率显著高于其他时间段(P<0.05)，其他各时间段之间无显著差异(P>0.05)。(2)2岁种公牛，在各时间段之间无显著差异(P>0.05)；(3)5～6岁种公牛，注射后第一周的鲜精活力显著低于注射前半个月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率显著高于其他各时间段(P<0.05)，其他各时间段差异不显著(P>0.05)。(4)7～9岁种公牛，注射后第二周的鲜精密度显著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各时间段差异不显著(P>0.05)。[结论]口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛射精量、冻精活力和冻精产量无显著影响，对鲜精活力、鲜精密度和冻精精子畸形率有一定影响，并对不同年龄段种公牛的影响有差异性。

口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗；种公牛；精液

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，主要感染对象为牛、羊、猪等偶蹄类家畜及野生偶蹄动物，发病率极高，传播速度极快，往往会造成严重的经济损失，被国际兽疫局和联合国粮农组织列为A 类传染病之首，我国将其列为一类传染病第一位[1]。根据我国《口蹄疫防治技术规范》的相关规定[2]，国家对口蹄疫实行强制免疫，免疫方法为口蹄疫疫苗注射。本文统计分析了口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗注射前后2～9岁荷斯坦种公牛射精量、精液品质和冻精产量的变化，从而探究口蹄疫二价苗注射对种公牛冷冻精液生产的影响。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

数显水浴锅(TL402～420B，江苏姜堰市医疗器械公司)，彩色摄像机(TK～C1481BEC，JVC JAPAN)，镜检加热器(NFV52，富士平工业株式会社)，相差显微镜(BX41，OLYMPUS JAPAN)，密度仪(ACCUCELL，IMV FRANCE)分析天平(ER～108A，AND JAPAN)，精液二次稀释装置(FA～435，FHK JAPAN)，全自动细管精液冷冻仪(EUROTHERM 2704，IMV FRANCE)，超净工作台(DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京东联哈尔仪器制造有限公司)，高压灭菌器(SS～325，TOMY JAPAN)，恒温培养箱(MIR～260，三洋电机株式会社)。

1.2 试验动物

15头体格健壮、性欲旺盛、正常进行冷冻精液生产的荷斯坦种公牛，年龄2～9岁，统一进行饲养、采精，自由饮水和运动。饲养管理参照《种公牛饲养管理技术规程》(NY/T1446-2007)[3]进行。

1.3 实验材料及处置方法

秋季，口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗(以下称口蹄疫二价苗)，种公牛颈部肌肉注射，成年牛2mL/头。

1.4 精液采集、质量检测和冷冻精液制作

口蹄疫二价苗注射前后，严格按照《牛冷冻精液生产技术规范》(NY/T1234-2006)[4]对种公牛进行精液采集，并对采取的精液进行质量检测、稀释、冷冻和储存。成年种公牛采精频率为2次/周，青年种公牛1次/周。

由采精人员进行精液采集，室内技术人员利用相差显微镜及相应的显像系统进行鲜精活力检查，并通过密度仪来检测鲜精密度，再利用分析天平称量精液采集管和精液的重量来计算射精量。将鲜精活力达到国家标准的精液用我站配置的专用稀释液进行稀释，放置4℃冷柜中平衡，并通过精液二次稀释装置对其进行二次稀释。然后，进行分装、打印、冷冻，并将冻精产品暂时储存起来。待经过型式检验合格后，方可储存于相应的液氮罐中，并放置于冷冻精液储存库中长期贮存。

1.5 冻精产品型式检验

严格按照中华人民共和国国家标准《牛冷冻精液》(GB 4143-2008)[5]进行，包括鲜精活力、冻精活力、冻精精子畸形率(简称“畸形率”，下同)等。

1.6 统计分析

采用统计软件SPSS 19.0 One～Way ANOVA进行方差分析，并进行Duncan检验，各时间段数据均以“Mean±SD”表示。

2 结果与分析

2.1 口蹄疫二价苗对2～9岁种公牛冷冻精液生产的影响

试验结果见表1。从表1中我们可以看出，注射前半个月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鲜精密度、冻精活力、冻精产量(简称“产量”，下同)差异不显著(P>0.05)。而注射后第一周的鲜精活力显著低于注射前半个月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率显著高于其他各时间段(P<0.05)，其他各时间段差异不显著(P>0.05)。

表1 口蹄疫二价苗对2～9岁种公牛冷冻精液生产的影响

注：表中同行数据肩注字母相同差异不显著 (P>0.05) ， 同行数据肩注字母不同差异显著 (P<0.05)。

2.2 口蹄疫二价苗对2岁种公牛冷冻精液生产的影响

试验结果见表2。从表2中我们可以看出，注射前半个月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鲜精活力、鲜精密度、冻精活力、产量和畸形率差异不显著(P>0.05)。

表2 口蹄疫二价苗对2岁种公牛冷冻精液生产的影响

注：表中同行数据肩注字母相同差异不显著 (P>0.05) ； 同行数据肩注字母不同差异显著 (P<0.05)

2.3 口蹄疫二价苗对5～6岁种公牛冷冻精液生产的影响

试验结果见表3。从表3中我们可以看出，注射前半个月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鲜精密度、冻精活力和产量差异不显著(P>0.05)。而注射后第一周的鲜精活力显著低于注射前半个月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率显著高于其他各时间段(P<0.05)，其他各时间段差异不显著(P>0.05)。

表3 口蹄疫二价苗对5～6岁种公牛冷冻精液生产的影响

注：表中同行数据肩注字母相同差异不显著 (P>0.05) ； 同行数据肩注字母不同差异显著 (P<0.05)

2.4 口蹄疫二价苗对7～9岁种公牛冷冻精液生产的影响

试验结果见表4。从表4中我们可以看出，注射前半个月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鲜精活力、冻精活力、产量和畸形率差异不显著(P>0.05)。而注射后第二周的鲜精密度显著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各时间段差异不显著(P>0.05)。

表4 口蹄疫二价苗对7～9岁种公牛冷冻精液生产的影响

注：表中同行数据肩注字母相同差异不显著 (P>0.05) ； 同行数据肩注字母不同差异显著 (P<0.05)

3 讨论

国家对口蹄疫实行强制免疫，主要措施是口蹄疫疫苗注射，而这也是种公牛站防疫工作的重中之重。种公牛24～36月龄达到体成熟，3～6岁时是利用的最佳年龄，随着年龄的增长，公牛的性欲与精液品质开始下降[6]。所以，本试验选取2～9岁荷斯坦种公牛来研究口蹄疫二价苗注射对其冷冻精液生产的影响，并分析了其对不同年龄段种公牛影响的差异性。

对所有试验公牛来说，在射精量、鲜精密度、冻精活力、冻精产量方面差异不显著，而注射后第一周的鲜精活力显著降低，注射后第二周的畸形率显著升高。这表明，口蹄疫二价苗注射后，首先导致鲜精活力下降，然后是畸形率升高，这种影响有先后顺序，影响时间均为一周，而在其他方面无显著影响。但对不同年龄段的试验公牛影响又不尽相同。相同之处是对射精量、冻精活力、冻精产量均无显著影响。不同之处是，2岁种公牛的其他方面也无显著影响；5～6岁种公牛注射后第一周的鲜精活力显著低于注射前半个月，第二周的畸形率显著高于其他时间段，鲜精密度无显著差异； 而7～9岁种公牛注射后第二周的鲜精密度显著低于第三周，鲜精活力、畸形率无显著差异。这表明，口蹄疫二价苗免疫注射对2岁种公牛精液生产无显著影响。而对于7～9岁种公牛，注射后第二周鲜精密度到第三周有一个上升；虽然注射后第一周与第二周之间无统计学上的差异，但试验数据平均值有下降的趋势，也就是说鲜精密度有下降再上升的趋势。并且，对5～6岁种公牛影响最大，首先是鲜精活力下降，然后是畸形率升高，这种影响有先后顺序，但影响时间均为一周，而在其他方面无显著影响。

综上所述，口蹄疫O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗注射对荷斯坦种公牛射精量、冻精活力和冻精产量无显著影响，对鲜精活力、鲜精密度和冻精精子畸形率有一定影响，并对不同年龄段种公牛的影响有差异性。而这种影响可能与疫苗中氢氧化铝或双相矿物油等佐剂对动物细胞具有毒性作用有关[7]，也可能与口蹄疫疫苗免疫应激反应有关。对不同年龄段种公牛产生不同的影响，这可能与不同生理阶段的生殖机能特点有关，其影响机理有待进一步研究。

荷斯坦牛是世界上主要的奶用牛品种，荷斯坦种公牛的后裔女儿具有优良的产奶性能。由于人工授精和冷冻精液技术的普及，一头种公牛一年可以在全国各地产生上万的后代。而口蹄疫传播速度快、发病率高，对奶牛生产性能危害严重；并且，口蹄疫病毒感染动物呼出物、唾液、粪便、尿液、乳、精液及肉和副产品均可带毒，康复期动物可带毒[2]，这导致种公牛口蹄疫疫病的影响范围将更广、危害更加严重。所以，种公牛口蹄疫疫苗注射等口蹄疫防疫工作也更加重要！

[1] 朱二勇，口蹄疫的研究进展[J].中国奶牛,2009,25(10)：40-41.

[2] 《口蹄疫防治技术规范》农医发[2007]12号

[3] 《种公牛饲养管理技术规程》(NY/T1446-2007)[4] 《牛冷冻精液生产技术规范》(NY/T1234-2006)

[5] 《牛冷冻精液》(GB 4143-2008)

[6] 翁春玲,佟国军,隋明. 影响种公牛精液品质的因素[J].黑龙江动物繁殖,2009,17(2)：42-44.

[7] 蒋文俊,李华春,李乐等.口蹄疫疫苗研究进展[J].畜牧与兽医,2004,36 (5)：42-43.

The Effect of Foot-and-Mouth Disease Bivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

Yang Zhi-yong,Zhao He,Hao Jian-guo,Wang Mu-feng

(TheDiaryCattleDevelopmentCenterinTianjin,Tianjin, 300381,China)

【Objective】 The aims of this paper was to study the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bull.【Method】 After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine into Holstein bull of 2～9 years old, the data were collected at two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection, then it was analyzed about the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility, the concentration of fresh semen, the frozon sperm motility, the abnormal frozon sperm percentage and the production of frozen semen.【Result】In Holstein bull of 2～9 years old, it had no significant difference for the volume per ejaculate, the concentration, the sperm motility and the production of frozen semen (P>0.05); the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of the second week and two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 2 years old, it had no significant difference in each period (P>0.05). In bull of 5～6 years old, the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 7～9 years old, the concentration of fresh semen of the second week after injection was significantly lower than that of the third week (P<0.05), and it had no significant difference in the other periods (P>0.05).【Conclusion】 It had no significantly differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the production of frozen semen of Holstein bull when injecting the Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine, but it had significantly differences in the abnormal sperm percentage of frozen semen, the sperm motility and the concentration of fresh semen in different ages.

Foot-and-Mouth Disease (type O); Inactivated Bivalent Vaccine (Asia 1); bull; semen

2016-02-10

2016-03-09

杨志勇(1980-)，男，硕士毕业，兽医师，主要从事种公牛冻精生产和牛疫病防控工作

S852.5

A

1001-9111(2016)03-0030-04