赵莉

TWEAK及其受体与冠心病的相关性分析

赵莉1

目的探讨冠心病（CHD）患者外周血中肿瘤坏死因子样弱凋亡因子（TWEAK）及其受体可溶性CD163的表达水平及其临床意义。方法选取2015年1月～2016年1月于延安大学附属医院东关心血管分院收治的154例经冠状动脉造影确诊的CHD患者（病例组）、男性98例，女性56例，平均年龄64.8 ±10.2岁；另选取50例为正常研究对象（正常组），男性33例，女性17例，平均年龄62.3±11.0岁；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163的水平。结果急性心肌梗死（AMI）、不稳定性心绞痛（UAP）、稳定性心绞痛（SAP）患者和正常组外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平差异具有统计学意义（P<0.05）；AMI患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163显著的高于UAP、SAP患者和正常组（P<0.05），UAP、SAP患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163显著的高于正常组（P<0.05）；AMI、UAP、SAP患者的Gensini评分呈逐渐降低趋势且差异具有统计学意义（P<0.05）。CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平与Gensini评分均呈显著的正相关关系（P<0.05）。结论CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平显著的升高，并且与患者病情严重程度相关。

冠心病；肿瘤坏死因子样弱凋亡因子；可溶性CD163

冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）是临床常见的心血管疾病，研究表明CHD的发病率可达1.6%以上，近年呈现明显上升趋势［1］。其发病机制为：动脉粥样硬化及继发性血栓的形成是促进CHD发生发展的重要因素，在此过程中泡沫细胞及低密度脂蛋白对于动脉管壁内皮细胞的侵袭能力增强，内皮下脂质沉积严重，粥样硬化性改变更明显。近年来相关细胞生物学分子机制的研究认为，相关信号通路的激活可通过趋化因子、细胞炎症因子的激活，参与到脂质沉积及粥样斑块的形成过程中［2，3］。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子（TWEAK）是肿瘤坏死家族成员，通过结合配体CD163，激活下游信号通路，进而调控内皮细胞凋亡、炎症反应及细胞因子的趋化效应［4，5］，本文探讨TWEAK及CD163在CHD患者中的异常表达，评估其与CHD病情的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2015年1月～2016年1月于延安大学附属医院东关心血管分院心内二病区收治的154例经冠状动脉造影确诊的CHD患者（病例组）和50例正常研究对象（正常组）进行研究。病例组154例患者，男性98例，女性56例，年龄48～79岁，平均64.8±10.2岁，体质指数（BMI）24.1±2.0 kg/m2，根据CHD临床分型：急性心肌梗死（AMI）49例、不稳定性心绞痛（UAP）62例、稳定性心绞痛（SAP）53例。正常组50例，均来源于本院体检中心，其中男性33例，女性17例，年龄45～79岁，平均62.3±11.0岁， BMI 23.7±2.3 kg/m2。两组研究对象的年龄、性别、吸烟、BMI比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2纳入排除标准

1.2.1纳入标准冠心病的诊断及分型标准依据欧洲心脏病协会（ESC）和美国心脏病学会（ACC）的诊断标准［6］，主要依据冠状动脉（冠脉）造影检查至少有一支冠状动脉血管腔直径减少超过50%，同时结合心电图及患者临床表现证实；年龄范围40～80岁；各项检查资料完整。

1.2.2排除标准近期合并严重感染、肿瘤、免疫性疾病、类风湿性疾病者；伴先心病、心脏瓣膜病、慢阻肺疾病的患者；患恶性血液病者；近半年内服用抗炎药物、HMG-CoM药物者。

1.3冠状动脉病变程度评分标准冠脉评分采用Gensini法进行评分，冠状动脉分为左主干、左前降支、左回旋支或右冠状动脉，对每一支血管的病变都予以记分，如果一支血管存在多个部位病变，按照狭窄程度最严重的部位记分为准，狭窄程度＜25%记为0分，25%～49%为1分，50%～74%为2分，75%～90%为3分，＞90%为4分，一个患者多支血管病变则将积分进行累计相加。

1.4生化指标及检测方法检测各组研究对象的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、胱抑素C（Cys-C）、肌酐（Cr）、空腹血糖（FBG）、外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163的水平。

采取两组患者静脉血用E L I S A法检测TWEAK、CD163水平，采用低温高速离心机进行离心，1000 r/min（离心半径为15 cm），获得血清后抽取50 ul样品加入96孔板内，采用去离子水作为阴性对照，采用50 ul cryab作为阳性对照，平衡摇晃20 s混匀，室温下孵育2 h，采用TBSP缓冲液清洗3次，每次5 min，加入100 ul底物，平衡摇晃30～45 s，25℃下孵育40 min，加入250 ul终止物，直到96孔板中每孔的颜色变黄，最后以空白对照为基准，采用分光光度计进行读数。TWEAK、CD163抗体购自罗氏检测公司，相关配套试剂购自南京凯基生物科技有限公司，严格按照说明书的要求进行操作。清晨采集空腹静脉血，分离血清后，-20℃保存待测，采集标本后1周内检测TG、TC、HDL-C、LDL-C、CysC，相关指标测定采用电化学发光全自动免疫分析仪（美国雅培i2000），检测试剂盒购自福建新大陆生物技术有限公司。具体检测方法参照试剂盒说明书，试剂盒内配有质控血清或质控标准品，所有操作严格按照操作说明完成。

1.5统计学方法数据分析及统计在专业软件SAS9.0软件包中处理，计量指标采用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；相关性分析采用Pearson线性相关分析法；P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1各组CHD患者与正常组的血生化指标比较AMI、UAP、SAP患者和正常组的TC、HDL-C、LDL-C、CysC水平差异具有统计学意义（P＜0.05）；AMI、UAP、SAP患者的TC、LDL-C、CysC水平显著的高于正常组（P＜0.05），AMI、UAP、SAP患者的HDL-C水平显著的高于正常组（P＜0.05）（表1）。

2.2外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini评分比较AMI、UAP、SAP患者和正常组外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平差异具有统计学意义（P＜0.05）；AMI患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163显著高于UAP、SAP患者和正常组（P＜0.05），UAP、SAP患者的外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163显著高于正常组（P＜0.05）；AMI、UAP、SAP患者的Gensini评分呈逐渐降低趋势且差异具有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表1　各组血生化指标比较（±s）

表1　各组血生化指标比较（±s）

注：BMI：体质指数；SBP：收缩压；DBP：舒张压；TC：总胆固醇；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇；Cys-C：胱抑素C；Cr：肌酐；FBG：空腹血糖；与正常组比较，aP＜0.05

项目　AMI（n=49）　UAP（n=62）　SAP（n=53）　正常组（n=50）　F值　P值BMI（kg/m2）　24.0±2.2　24.3±2.4　24.0±2.4　23.7±2.3　0.927　0.417 SBP（mmHg）　131.7±9.6　129.5±8.3　130.4±11.0　128.5±10.4　1.338　0.332 DBP（mmHg）　75.1±8.3　73.0±9.2　73.8±8.5　72.7±8.1　1.529　0.321 TC（mmol/L）　4.51±0.84　4.62±0.90　4.67±0.89　3.56±0.85a　17.983　<0.001 TG（mmol/L）　1.82±0.63　1.94±1.00　1.89±0.90　2.00±0.94　2.041　0.226 HDL-C（mmol/L）　0.94±0.12　1.04±0.09　1.06±0.14　1.17±0.15a　22.853　<0.001 LDL-C（mmol/L）　3.10±0.62　2.95±0.66　2.87±0.73　2.21±0.59a　16.594　<0.001 Cys-C（mg/L）　1.14±0.14　1.11±0.08　1.12±0.09　0.93±0.11a　13.387　0.001 Cr（umol/L）　83.51±15.92　81.62±17.39　82.25±16.15　78.32±18.00　1.963　0.241 FBG（mmol/L）　4.83±0.49　4.75±0.55　4.81±0.66　4.59±0.54　1.550　0.319

2.3外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平与Gensini评分相关性分析CHD患者外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平与Gensini评分均呈显著的正相关关系（P＜0.05）。

表2　外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini评分（±s）

表2　外周血中可溶性TWEAK、可溶性CD163水平、Gensini评分（±s）

注：与正常组比较，aP＜0.05，与UAP患者比较，bP＜0.05，与SAP患者比较，cP＜0.05

Gensini评分（分）AMI　49　1330.95±417.39abc1841.66±419.75abc91.30±28.75bcUAP　62　916.53±390.84　1333.28±371.84ab　64.43±22.06cSAP　53　862.86±381.70　1296.30±398.51c　22.52±14.63正常组 50　801.47±332.95　857.05±318.42　-F值　-　19.617　26.842　37.539 P值　- <0.001　<0.001　<0.001组别　n　可溶性TWEAK（pg/ml）可溶性CD163（ng/ml）

3　讨论

CHD是病死率较高的疾病，远期不良心血管事件的发生率较高［7］。对于CHD发病过程中相关机制特别是分子生物学机制的研究，能够为CHD的整体性防控提供临床决策依据和决策思路。TWEAK属于肿瘤坏死因子家族成员，在炎症、过氧化损伤以及血栓形成等病理过程中可急剧上升。TWEAK与配体结合后可促进LDL-C、TC、TG对动脉管壁的损伤，加剧粥样斑块形成［8，9］。相关研究已证实TWEAK/CD163信号通路在CHD患者中的异常表达［10］，但其与CHD患者冠状动脉病变程度的分析研究尚不足。

AMI、UAP、SAP三组患者的收缩压以及舒张压均无统计学差异，排除血压对于最终统计结果的影响。TC、HDL-C、LDL-C、CysC等的代谢紊乱，可以促进冠状动脉粥样硬化的发展［11，12］，AMI、UAP、SAP三组患者的血清TC、HDL-C、LDL-C均明显高于正常组，血脂代谢紊乱较为明显，而保护性脂蛋白HDL明显下降，提示CHD患者各项生化检测指标的异常。

在AMI患者中TWEAK及CD163的表达均明显上升，明显高于SAP、UAP组，而SAP、UAP组血清中的可溶性TWEAK及CD163也高于正常对照组，提示TWEAK及CD163在CHD的发生发展过程中可能发挥了重要的作用。Moreno J A等［13，14］学者通过回顾性分析了35例CHD患者的临床资料，发现AMI患者溶栓治疗前后的TWEAK及CD163均明显高于正常对照人群，上升幅度可达50%以上，这与本次研究的结论较为相似。Gensini评分是评估冠状动脉狭窄程度的重要指标，Gensini评分越高，狭窄越严重［7，15］，在AMI、UAP、SAP患者中Gensini评分呈逐渐降低趋势，同时更为重要的是，TWEAK、CD163水平与Gensini评分均呈显著的正相关关系，TWEAK、CD163与冠状动脉狭窄或者病变的程度具有密切的关系。

综上所述，TWEAK及其配体CD163在CHD患者中异常表达，同时与冠状动脉狭窄程度密切相关。

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本文编辑：孙竹

Correlation analysis between TWEAK and receptor with coronary heart disease

ZHAO Li.The secondcardiovascular heart ward， Dongguan branch of Affiliated Hospital of Yan'an University， Yan'an 716000， China.

Objective To investigate the expression and clinical significance of TNF-like weak inducer of apoptosis （TWEAK） and its receptor soluble CD163 in peripheral blood of patients with coronary heart disease （CHD）. Methods 154 CHD patients diagnosed by coronary angiography between January 2015 and January 2016 from Dongguan Branch of Yan'an University Affiliated Hospital with in patients were selected as case group， including 98 males， 56 females， with mean age of 64.8±10.2 years. 50 normal subjects were selected as control group， including 33 males and 17 females， with mean age of 62.3±11.0 years. The levels of soluble TWEAK and soluble CD163 in peripheral blood was detected by ELISA method. Results Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 in peripheral blood of acute myocardial infarction （AMI） patients， unstable angina pectoris （UAP） patients， or stable angina pectoris（SAP） patients， patients of normal group were significantly different （P<0.05）. Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 of AMI patients were significantly higher than UAP and SAP patients and normal group （P<0.05）. Levels of soluble TWEAK and soluble CD163 of UAP and SAP patients were significantly higher than normal group （P<0.05）. The Gensini score of AMI， UAP and SAP patients showed a gradual decreasing trend and were significantly different（P<0.05）. There was a significant positive correlation between soluble TWEAK， soluble CD163 level and Gensini score in peripheral blood of CHD patients （P<0.05）. Conclusion Peripheral blood soluble TWEAK， soluble CD163 were significantly elevated in CHD patients， and were related to the severity of the patient's condition.

Coronary heart disease； Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis factor； Soluble CD163

R541.4

A

1674-4055（2016）08-0983-03

1716000延安，延安大学附属医院东关心血管分院心内二病区

10.3969/j.issn.1674-4055.2016.08.28