史兆忠

[摘 要] 本文主要介绍了酶联吸附法（ELISA）的原理，并阐述如何将该原理通过相应的技术运用到水产养殖的实际操作中去，其实际操作主要有将ELISA用于水产品安全监测、可致病的水产动物病原菌检测等。

[关键词] 酶联免疫吸附法 水产养殖 实际应用办法 生物科技

[中图分类号] S942 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2016）04-0290-01

作为现代化的检测技术，酶联免疫吸附法即将酶复合物与抗原（或抗体）有效结合，通过显色变化测定病原菌。由于抗原（抗体）在结合到固相载体表面后仍具免疫活性，抗体（抗原）与酶的结合物仍能保持二者的活性，结合物与相应抗原（抗体）反应后所结合的酶仍能催化底物生成有色物质其含量根据结合物颜色深浅易于测定，故而使得ELISA具有选择性优良、高灵敏、数据客观可靠、结果准确、实用性强的优点。

1 酶联免疫吸附法

1.1 酶联免疫吸附法的测定原理

酶联免疫吸附法基本原理：根据抗原或抗体具有特异性功能，通常选取可溶性抗原或抗体结合到固相载体上，一般采用固苯乙烯作为固相载体，此过程保持抗原抗体具有免疫活性。在固相载体上使抗原或抗體与另外一种酶结合，成功结合的产物即具有酶的活性又具有抗原抗体的免疫性。测定时，将待测物于已经用酶标记好的抗原抗体反应，时间不需要很长，然后将固相载体上的结合物洗涤，主要是将待测物于酶抗原抗体结合的产物分离出来。然后加入酶催化，被酶催化生成有色产物，故而可根据颜色变化情况进行分析，由于酶的催化效率很高，因此酶联免疫吸附法能够达到很高的准确率。

1.2 酶联免疫吸附法的方法及其操作

尽管至今酶联免疫吸附法的检测方法的分类仍没有一个准确权威的定论，但是无论采用怎样的形式进行检测，均需要在试剂的帮助下完成，具体为酶反应的底物、免疫吸附剂、被酶标记过的抗体或抗原，其中免疫吸附剂主要是将抗原或抗体与固相载体结合的产物。在确定检测试剂后，依据检测样本性状差异，选择不同的检测方式进行，目前该种检测技术现存方式较多，其中以下几点最为常见：其一，双抗体夹心法。结合特异性抗体与固相载体，形成固相抗体：洗涤未结合抗体及杂质，用BSA进行封闭。洗涤除去多余的BSA，加受检标本，与固相抗体接触反应，形成固相抗原复合物，而后洗涤除多余杂质。最后加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合并彻底洗涤未结合的酶标抗体并根据颜色深浅进行定量测量；其二，双位点一步法。该种检测方法针对抗原检测，依据抗原分子的决定簇不同，分别对其单克隆抗体进行标记，形成霉变抗体与固相抗体，将两种抗体同步检测，通过将其并作一步完成检测操作；其三，间接法测抗体。该种检测方式，主要借助抗原的特异性，通过固相抗原的形成，去除检测物质中的杂物，以及没有完成结合的抗原。（4）其余的检测方法还有竞争法、捕获法测IgM抗体。

1.3 酶联免疫吸附法的特点

与过去经典的生物化学检测方法相比较，酶联免疫吸附法由于其检测限可达ng甚至pg，故而具有灵敏度高的特点；而且，它还具有特异性很强的抗原抗体免疫反应，这就使得那些结构类似物、有色或荧光物质对检测的干扰会变得很小，大大提高了结果的准确性；最后，本着绿色实验思想，这种灵敏度高，可以利用低浓度的标准品和少量的有机溶剂就能得到精准实验结果的方法，无疑能够大大减小试剂对环境和实验人员的污染和危害。

2 水产养殖中的的酶联养殖吸附法应用

2.1 致病病原菌的检测

近年来，致病微生物严重影响着水产品养殖行业的发展，下面我们就来说一下水产品中致病微生物。水产品的致病微生物无非分为两种，一种是自身携带细菌：溶血性弧菌和甲肝等都是水产品中致病微生物导致的。一种是人为污染导致细菌滋生：通过人体或动物肠道消化产生的粪便排放到水中导致细菌污染。伴随生物技术的不断完善，水产品致病微生物的检测面临新的发展机遇，生物检测技术日益准确、快捷、操作简单，现对当前应用较为广泛的PCR技术加以分析。

PCR技术：该技术三大核心要素是DNA、四种脱氧核糖核苷酸和引物，在DNA聚合酶的作用下，快速复制翻译目标DNA，此方法可以在试管中操作，因此操作方便，由于反应速度非常快，短时间内就能复制数十万想要的目的基因或DNA片段，无需进行DNA克隆就能达到目的。此项技能已经应用于生物各个领域，比如DNA检测，基因分离，DNA分析，同样也应用于水产品中致病微生物的检查

2.2 水产品安全检测

我国采用的ELISA氯霉素试剂盒线形范围在50ng/kg～1350ng/kg，定量检测下限为100ng/kg，而水产品组胺的FDC和EEC最大允许量为100mg/kg～200mg/kg。ELISA法测定组胺始于1983年，之后方法不断完善，如Neogen组胺试剂盒，运用该试剂盒检出速度非常快，35min快速检测，且限达2.5mg/kg，检测结果不受样品盐分干扰，且直接用水相进行样品的前处理，避免有机试剂的污染。

结语

可见ELIS的应用范围十分广阔，而其在水产养殖中应用的效果尤为突出，它不仅是革新了传统的方法，也修正了原有检测方法耗时长、成本高、环境负担大的问题。ELISA操作简捷、快速，低污染、高效率，在水产养殖中大有可施为的地方。

参考文献

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[2]赵晓联，蔡建荣.酶联免疫吸附分析法在食品卫生分析中的应用[C]//全国首届生物毒素学术研讨会. 1998.

[3]伏旭，李培武，贺莉等.酶联免疫吸附检测法的应用研究进展[J].氨基酸和生物资源，2012，34（3）：41-44.