刘玉梅　郝赫　梁霄

普罗布考对动脉粥样硬化兔MMP9表达的影响

刘玉梅郝赫梁霄

目的 观察普罗布考对兔主动脉粥样硬化病变及基质金属蛋白酶-9（MMP9）表达的影响。方法 27只新西兰大耳白兔建立动脉粥样硬化症模型，随机加喂普罗布考（n=9，普罗布考组）或阿托伐他汀（n=9，阿托伐他汀组）或高脂饮食（n=9，模型组）6周。观察各组大白兔血脂含量，免疫组化法测各组兔主动脉MMP9表达。结果普罗布考组主动脉粥样斑块，低密度脂蛋白胆固醇及MMP9表达均较模型组降低。结论 普罗布考在降低胆固醇的同时，抑制MMP9表达，发挥抗动脉粥样 硬化、稳定斑块作用。

普罗布考；动脉粥样硬化；高密度脂蛋白胆固醇；基质金属蛋白酶-9

普罗布考是一种抗动脉粥样硬化和稳定斑块类药物，其具体作用机制并不清晰。基质金属蛋白酶（matrixmetallo proteinases，MMPs）可降解细胞外基质，MMP9在细胞外基质降解过程中起关键作用，成为动脉粥样硬化的炎性因子，参与并导致斑块破裂，近年来受到广泛关注。本实验通过建立兔动脉粥样硬化模型，观察动脉粥样硬化斑块，血脂及MMP9水平的变化。分析普罗布考抗动脉粥样硬化及稳定斑块机制。

1　材料和方法

1.1实验动物和试剂

36只3月龄新西兰大白兔由延边大学基础医学院动物饲养中心提供。体重（2.0±0.5）kg。普罗布考：吉林康奈尔药业提供；阿托伐他汀钙：北京嘉林药业股份有限公司；蛋黄粉：天津化学试剂公司提供；胆固醇：上海惠世生化试剂有限公司提供。MMP9免疫组织化学试剂盒（Abcam公司提供）。

1.2方法

36只兔饲养1周，随机选27只高胆固醇饲料喂5周。第6周起随机加喂普罗布考1.5 g/d（普罗布考组，n=9）或阿托伐他汀钙10 mg/d（阿托伐他汀钙组，n=9）或高脂饮食（模型组，n=9），余9只普通饲料喂养13周作对照组。

13周时取空腹血4 ml，分离后血清。氧化酶法测血清总胆固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG），低密度脂蛋白胆固醇（lowdensity lipoproteincholesterol，LDLC）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDLC）。采用SABC法，石蜡包埋，烘片，脱蜡，灭活内源酶，修复抗原。免疫组化结果判定：用AB值法测MMP9表达的半定量分析结果。

1.3统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行分析。采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），方差齐时用LSD-t检验，方差不齐时用Tamhane-t检验进行两两比较。计数资料用Fisher确切概率法，P＜0.05为差异有统计学意义，均为双侧检验。

2　结果

2.1各组兔13周时血脂比较

13周末普罗布考组、阿托伐他汀组血清TC、LDL低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05），血清TG、HDL与模型组对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。普罗布考组、阿托伐他汀组与正常对照组血清TC、TG、HDL、LDL对比，差异无统计学意义（P ＞0.05），如表1。

2.2各组兔免疫组化MMP9蛋白的表达

普罗布考组与模型组相比MMP9明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），与阿托伐他汀钙片组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），如图1。

表1　13周4组血脂比较（±s，n=9）（mm o l/L）

表1　13周4组血脂比较（±s，n=9）（mm o l/L）

注：与模型组比较，**P＜0.05

TC　TG　HDL　LDL正常对照组　2.38±0.25**　1.18±0.82　1.19±0.37　1.59±0.56**模型组　36.15±4.31　1.14±0.33　0.89±0.28　13.38±4.21普罗布考组　2.26±1.36**　0.78±0.32　1.13±0.33　1.21±0.64**阿托伐他汀组　1.69±1.34**　1.25±0.37　1.02±0.32　0.78±0.38**

图1　各组兔主动脉免疫组化（×100）

3　讨论

普罗布考具有独特的抗动脉粥样硬化属性，包括降低LDL-C、抗氧化及抗炎功能[1］， 稳定斑块和降胆固醇作用已得到证实[2］。动脉粥样硬化是一种与氧化应激和血栓相关的炎症性疾病。HDL抑制动脉粥样硬化通过抑制LDL氧化[3］。普罗布考虽降低HDL-C水平，仍具较强抗动脉粥样硬化作用[4］。 本实验发现普罗布考组兔的动脉粥样硬化面积和程度均较模型组下降。基质金属蛋白酶存在于人体各组织，能降解所有细胞外基质的蛋白成分[5］。MMP-9作为其一员，在组织损伤、修复中不可或缺。动脉粥样 硬化斑块由纤维帽和粥样物组成，MMP-9高表达纤维帽被降解变薄、易破损，其内部粥样物释放入血；所以脂质多少及纤维帽的薄厚决 定斑块的稳定[6］。严鹏科等实验结论[7］，普罗布考可抑制巨噬细胞分泌MMPs及影响其活性，启到稳定斑块作用。本实验得出普罗布考组主动脉MMP-9，血脂水平明显降低，明显低于模型组，普罗布考是通过降低MMP-9表达，发挥抗动脉粥样硬化，稳定斑块作用。普罗布考与阿托伐他汀组在实验结果上无统计学差异，然而他汀类药物主要副作用是肝脏和肌肉毒性[8］。在日本，普罗布考已经被用来治疗那些不能耐受阿托伐他汀的高血脂患者。本实验进一步确定MMP9 在普罗布考抗动脉粥样硬化中地位。但普罗布考能否作为临床患者不适用阿托伐他汀时的替代药，需要进一步观察。

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Effect of Probucol on the Expression of MMP9 in Atherosclerotic Rabbits

LIU Yumei HAO He LIANG Xiao Department of Internal Medicine-Cardiovascular， The Affliated Hospital of Jilin Medical College， Jilin Jilin 132000， China

Objective To observe the effect of probucol on the expression of matrix metalloproteinases （MMP9） in atherosclerotic lesions of rabbits. Methods Establishment of atherosclerosis model in 27 New Zealand white rabbits， 6 weeks were random ly fed to probucol （n=9， probucol group） or atorvastatin （n=9， atorvastatin group） or high fat diet （n=9， model group）. The blood lipid levels were observed in each group， and the expression of MMP9 in aorta of each group was measured by immunohistochem istry. Resu lts Com pared with the m odel group， the exp ression o f aortic atherosclerotic plaque， low density lipoprotein cholesterol and MMP9 were decreased in the group. Conclusion While lowering cholesterol， MMP9 expression was inhibited， and the role of anti atherosclerosis and stabilizing plaque was also played.

Probucol， A therosclerosis， High density lipoprotein cholesterol， Matrix metalloproteinases-9

R 965

A

1674-9308（2016）25-0132-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.25.081

吉林医药学院附属医院心内科，吉林 吉林 132000