李桂华

紫外分光光度法与反相高效液相色谱法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦的含量

李桂华

目的 探讨紫外分光光度法及反相高效液相色谱法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦含量的可行性。方法 采用紫外分光光度法、反相高效液相色谱法根据相同方法制备阿昔洛韦眼用凝胶试品后于252 nm波长下测定其阿昔洛韦含量。结果 高效液相法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦含量为（100.49±0.14）%，明显低于紫外分光光度法所测的（101.55±0.47）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 高效液相色谱方法因可有效分离相关物质，减少杂质干扰，方法简单、结果准确、灵敏度高，相比于紫外分光光度法更利于阿昔洛韦凝胶中阿昔洛韦的含量测定。

反相高效液相色谱法；阿昔洛韦；眼用凝胶；紫外分光光度法

【Abstract】Objective To explore the feasibility of the determination of A Silowe in A Silowe ophthalmic gel by UV spectrophotometry and reversed phase high performance liquid chromatography.Methods By UV spectrophotometry，reversed phase high performance liquid chromatography according to the same method of preparing the aciclovir eye gel sample at 252 nm wavelength determination the content of aciclovir.Results Cntent of acyclovir in acyclovir ophthalmic gel（100.49±0.14）% lower than the measured UV spectrophotometry （101.55±0.47）%，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HPLC method is effective because of the separation-related substances，reducing interference of impurities，the method is simple，accurate and sensitive than UV spectrophotometry，it'is more conducive to the determination content of acyclovir in acyclovir gel.

【Key words】HPLC method；Acyclovir；Ophthalmic gel；UV spectrophotometry

阿昔洛韦因其选择性高、不良反应发生率低、药物耐受好，且为特异性抗单纯疱疹病毒药物［1］，已成为目前治疗单疱病毒性角膜炎的最佳药物［2］。早期眼部用药治疗多采用眼膏或滴眼剂，因使用方便、患者接受性好等特点，已广泛应用于临床。但近期研究发现，由于滴眼剂在眼内停留时间较多，易被体内吸收，药物生物利用度低，重复多次应用又可能引发较多不良反应［3］。凝胶型眼用制剂的出现，有效解决了上述问题［4］。阿昔洛韦凝胶剂可有效解决单疱病毒性角膜炎治疗需反复用药、生物利用度低等问题［5］。如何快速测定此类眼用凝胶中主成分含量，有效监测此类药物质量，已成为众多药学工作者所关注的热点［6］。目前，检测阿昔洛韦含量方法较多，以紫外分光光度法及高效液相色谱法为主［7］。本研究就紫外分光光度法及反相高效液相色谱法测定阿昔洛韦眼用凝胶中阿昔洛韦含量的可行性进行探讨，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1药品与试剂 甲醇、冰醋酸，国药集团化学试剂有限公司；阿昔洛韦对照品，中国药品生物制品检定所，批号：150913-151102；阿昔洛韦凝胶，江苏圣宝罗药业有限公司，批号：140911、150212、150622。

1.2仪器 岛津LC-20A型高效液相色谱仪；岛津UV-2501型紫外分光光度计；离心机（北京医用离心机厂）。

2 方法与结果

2.1方法学验证

2.1.1色谱条件 波长选择：以流动相做空白对照，于200～400 nm波长下对阿昔洛韦对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在252 nm处阿昔洛韦有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在252 nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长252 nm。

色谱柱：Zorbax Extend C18不锈钢柱（250 mm ×4 mm，5 μm）；流动相：水-甲醇-冰醋酸（90：10：0.1）；检测波长：252 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃。

2.1.2溶液制备

2.1.2.1供试品溶液的制备 精密称取0.3 g阿昔洛韦凝胶，加入流动相25 ml稀释，充分混匀后，3000 r/min，离心半径10 cm，离心5 min，取上清液，0.2 mm微孔滤膜过滤，取续滤液做供试液。

2.1.2.2对照溶液的制备 精密量取阿昔洛韦对照品15 mg，置于100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3高效液相色谱法

2.1.3.1精密度试验 精密量取20 μl对照品溶液，重复进样6次，分别测定峰面积，并计算其相对标准偏差（RSD）=1.2%（小于2.0%），符合标准规定，结果表明本实验精密度良好。

2.1.3.2重复性试验 精密称取同批号阿昔洛韦凝胶6份，根据供试品2.1.2.1项下操作制备溶液，取10 μl溶液注入液相色谱仪中，记录色谱图，可得到6份供试品溶液的RSD，RSD=0.9%（小于2.0%），符合标准规定，因此具有良好重复性。

2.1.3.3稳定性试验 取供试品溶液与对照品溶液，分别在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h精密量取10 μl溶液注入液相色谱仪中进行测定，对照品溶液峰面积的RSD为1.16%（小于2.0%），符合标准规定；供试品溶液峰面积RSD为1.23%（小于2.0%），符合标准规定，提示对照品及供试品溶液在48 h内均较稳定。

2.1.3.4回收率考察 分别精密称取约10 mg同一批次的阿昔洛韦凝胶，保存至3个锥形瓶内，依次加入阿昔洛韦对照品2.23 mg、5.17 mg和10.31 mg，根据2.1.2.1项下步骤，取续滤液10 μl进样，对峰面积进行测定，分别计算回收率为101.23%、101.18%和99.79%，平均回收率为100.67%，RSD为1.32%，与药典标准相符。

2.1.3.5线性关系考察 精密称取阿昔洛韦对照品13.4 mg置于100 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml、6 ml溶液置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液，分别取10 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，并以峰面积对其浓度进行线性回归，得线性方程为Y=633 417X－52 341（r=0.9996），结果表明，阿昔洛韦浓度在0.12～1.44 μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.4紫外分光光度法 以流动相为空白于252 nm下，选择2.1.3.6项下不同浓度对照品溶液进行紫外扫描，建立阿昔洛韦含量标准曲线，并以峰面积对其浓度进行线性回归，得线性方程为Y=634 517X－55 321（r=0.9998），结果表明，阿昔洛韦浓度在0.12～1.44 μg/m范围内与吸光度值线性关系良好。参考2.1.3.1项至2.1.3.4项下过程并结合药典标准，对紫外分光光度法进行精密度、重复性、稳定性、回收率实验，结果上述RSD均小于2%，与药典标准相符。

2.2样品中阿昔洛韦含量测定 结合上述检测条件，分别测定阿昔洛韦对照品溶液与3批阿昔洛韦凝胶供试品溶液（取供试品0.2 g），高效液相色谱法及紫外分光光度法均采用自身对照组对供试品内的阿昔洛韦含量进行测定。

2.3结果 研究显示，高效液相法测定阿昔洛韦凝胶中阿昔洛韦平均含量（与标识量比较）为（100.49± 0.14）%，而紫外分光光度法测定的平均含量为（101.55±0.47）%，两组差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1　阿昔洛韦凝胶中阿昔洛韦含量测定结果（%）

3 讨论

阿昔洛韦（C8H11N5O3）属嘌呤类抗病毒药物［8］，在高效液相色谱条件摸索过程中，通过前期试验及文献调查显示［9-10］，凝胶中存在大分子物质，可导致色谱柱堵塞，进而影响测定［11］。经试验分析，在酸性流动相处理后，对应高聚物配合离心可有效去除，故考虑先对样品稀释后离心，排除干扰［12］；在色谱条件选择上，本研究参考了早期［13］的文献报道，结合本实验室条件优选所得。通过本研究结果可知，高效液相色谱法结果低于紫外分光光度法，相较而言，高效液相法更接近药物标识含量。考虑为高效液相法通过色谱柱分离作用，将阿昔洛韦凝胶制备过程中的有关物质、杂质等干扰进行有效分离［14］，而紫外分光光度采用直接测定方式，故高效液相法测定结果相对更为准确，且对于已知工艺流程及相关物质已知情况，高效液相法相较于紫外分光光度法能更为方便的定位相关物质含量，从而更好地用于此类物质的质量控制，确保用药安全［15］。

综上所述，高效液相色谱法及紫外分光光度法测定阿昔洛韦凝胶中阿昔洛韦含量均具有准确性高、精密度好的特点，重现性和相关性均符合相关要求，但高效液相色谱法所测结果更接近药物真实含量，建议考虑此种方式来测定阿昔洛韦凝胶中阿昔洛韦含量。

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Determination of A Silowe in A Silowe Ophthalmic Gel by UV Spectrophotometry and Reversed Phase high Performance Liquid Chromatography

Li Guihua

R927.2

A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.09.004

新疆玛纳斯佳园医院，新疆昌吉回族自治州 832200

李桂华（1967.9-），硕士学位，副主任药师。研究方向：药剂及药事管理