王伟，张双翔，周碧君，胡兴义，张海文明，程振涛，王开功*

(1．贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025;2．贵州大学动物疫病研究所，贵州 贵阳 550025;3．贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550001)

猪源沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

王伟1，2，张双翔3，周碧君1，2，胡兴义1，2，张海1，2文明1，2，程振涛1，2，王开功1，2*

(1．贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025;2．贵州大学动物疫病研究所，贵州 贵阳 550025;3．贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550001)

对采自贵州省某规模化养猪场的57份腹泻仔猪肠道样本进行沙门氏菌的分离鉴定，并用药敏纸片法对其进行耐药性分析。结果，共分离鉴定沙门氏菌20株;药敏试验表明所鉴定沙门氏菌对抗菌药物的耐药率从高到低依次是麦迪霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素和诺氟沙星，且均为多重耐药株，耐药种类达12种以上。研究结果对合理使用药物控制仔猪沙门氏菌感染提供了理论依据。

仔猪腹泻;沙门氏菌;分离鉴定;耐药性

由于仔猪消化器官、免疫器官和神经系统发育不完善，消化功能不健全、免疫力差、体温调节机能差、抗寒能力低等，易受外界不良因素侵袭，仔猪患病率高，其中腹泻是仔猪常发疾病，也是引起初生仔猪至断奶保育仔猪死亡的主要原因［1，2］。仔猪沙门氏菌病又称仔猪副伤寒［3，4］，常发于6月龄以下的仔猪，1～4月龄多发，临床上可分为急性(败血型)、亚急性和慢性3种类型，常引起较高死亡率，其中败血型病死率达90%，慢性型病死率达25%～50%。本研究对腹泻仔猪肠道样本进行沙门氏菌的分离鉴定，并进行抗生素的耐药性检测，为临床诊断和抗生素的合理使用提供理论依据。

1 材料与方法

1．1 材料采集贵州省某规模化养殖场出现腹泻症状的仔猪肠内容物57份，放入采集器，4℃保存。

1．2 主要试剂及药品

1．2．1 试剂:血琼脂基础培养基、SS琼脂、肠杆菌科生化常规鉴定管，均购自杭州微生物试剂有限公司产品。

1．2．2 药敏纸片:青霉素(PEN)、哌拉西林(PIP)、氨苄西林(AMP)、红霉素(ERY)、罗红霉素(ROX)、麦迪霉素(Med)、头孢他定(CAZ)、头孢曲松(SCF)、头孢哌酮(CRO)、氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、丁胺卡那霉素(AMI)共15种兽医临床常用药敏纸片，均购自杭州微生物试剂有限公司。1．3方法

1．3．1 细菌的分离:无菌条件下将病料按照常规划线分离细菌的方法接种于血平板培养基，37℃培养12～14 h后，挑取单菌落做纯化培养，备用。

1．3．2 生化鉴定:从纯培养物中挑取单菌落接种于血清肉汤中，220 r/min振荡培养12 h，革兰氏染色，镜检，并按照伯杰氏生化鉴定手册进行生化鉴定。

1．3．3 鉴别培养基:将通过初步生化鉴定的细菌划线于鉴别培养基，37℃培养12～14 h后观察菌落形态。

1．3．4 革兰氏染色:挑取血琼脂培养基上的单个菌落，划线接种于新的血琼脂培养培养基，37℃培养过夜，并做革兰氏染色，镜检。

1．3．5 药敏试验:药敏纸片琼脂扩散法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的标准进行。

2 结果

2．1 细菌分离培养及革兰氏染色沙门氏菌在血琼脂培养基生长良好，呈现圆形、灰白色、微隆起、边缘整齐、湿润菌落(见图1);SS培养基上，菌落为黑色、整齐、湿润的小菌落(见图2)。取纯培养菌进行革兰氏染色，镜检，可见无荚膜、无芽胞、散在的革兰氏阴性短杆菌(见图3)。

图1 沙门氏菌在鲜血琼脂上菌落形态

2．2分离菌株生化鉴定结果分离的沙门氏菌均能发酵木糖、山梨醇，发酵葡萄糖并产气，动力学试验、硫化氢反应阳性，赖氨酸脱氢酶、枸橼酸盐、MR反应阳性，棉子糖、鸟氨酸脱氢酶、靛基质、硝酸盐还原均为阴性，与沙门氏菌的生化特性一致(见表1)。通过对57例肠道样品进行初步鉴定，得到疑似20株为沙门氏菌，初筛分离率为35．1%。

图2 沙门氏菌在SS琼脂上菌落形态

图3 革兰氏阴性杆菌(1 000×)

表1

2．3 沙门氏菌分离株药敏试验结果对所鉴定的20株沙门氏菌进行药敏试验，结果见表2。由表2可知，20株沙门氏菌对麦迪霉素高度耐药，耐药率为95%;对其余抗菌药物的耐药率分别为:红霉素90．0%、罗红霉素90．0%、卡那霉素60．0%、庆大霉素55．0%、头孢哌酮45．0%、诺氟沙星40．0%、丁胺卡那霉素40．0%、头孢他啶30．0%、青霉素35．0%、头孢曲松25．0%、氧氟沙星25．0%、氨苄西林20．0%、环丙沙星20．0%、哌拉西林15．0%。

2．4 沙门氏菌耐药图谱对所分离鉴定20株沙门氏菌建立多重耐药图谱，结果见图4。由图4可知，20株沙门氏菌分离株中1株(5．0%)耐5类药，2株(10．0%)耐6类药，2株(10．0%)耐7类药，2株(10．0%)耐8类药，1株(5．0%)耐9类药，4株(20．0%)耐10类药，5株(20．5%)耐11类药，3株(15．0%)耐12类药。

表220 株沙门氏菌分离株对15种抗菌药物敏感性试验

图4 沙门氏菌多重耐药图谱

3 讨论

3．1 本次调查共分离鉴定沙门氏菌20株，分离率为35．1%。2015年，黄美州等［5］对甘肃地区新生仔猪腹泻细菌性病原调查发现，大肠杆菌与沙门氏菌混合感染引起仔猪严重腹泻。近年来，随着养猪业的发展，养殖规模不断扩大，养殖环境急剧恶化，猪群感染性腹泻在全国各地频繁暴发，尤其是仔猪腹泻给养猪业造成巨大的经济损失。

3．2 对分离株进行临床常用药物敏感性试验发现，沙门氏菌对大环内酯类药物耐药率高达90%以上，对氨基糖苷类药物耐药率在50%左右。多重耐药分析发现，分离株8重耐药菌株最多，为19．2%，其他依次为12重、9重及7重耐药。VaargaC等［6］检测并比较了加拿大阿尔伯塔省922株猪源沙门菌对15种抗菌药物的耐药性，结果没有1种菌耐第3代头孢菌素和喹诺酮类药物，28%的沙门氏菌耐2至多种抗菌药物，这与本次试验结果差别较大。本次分离的沙门氏菌产生了对第三代头孢菌素和喹诺酮类药物耐药的菌株。试验结果说明，目前我省规模化养猪场细菌耐药谱正不断扩大，多重耐药增多。随着养殖业中抗生素的滥用和不规范使用，细菌在药物的选择性压力下不断发生变异，以适应药物环境，其中以多重耐药和耐药谱不断扩大最为常见［7］。通过对病原菌耐药性的调查，推荐该场使用敏感性高的药物对仔猪腹泻进行治疗。

［1］白马伟，李芳，张英，等．云南省蒙自市仔猪腹泻致病性细菌病原分析［J］．上海畜牧兽医通讯，2016(2):25－26．

［2］王继春，金星方，陈建明，等．常熟地区猪高热病细菌性病原分离与鉴定［J］．江苏农业科学，2007(5):154－156．

［3］朱琳．猪细菌性腹泻的防治［J］．疾病防治，2012(6):53－54．

［4］朱玲云，郑龙龙，毕峻龙，等．曲靖地区仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析［J］．中国畜牧兽医，2015，42(3):696－700．

［5］黄美州，刘永明，王慧．甘肃地区新生仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定及其耐药性分析［J］．西北农业学报，2015，24(12):35－39．

［6］Varega C，Rajie A，Me Fall M E，et al．Compration of antimicrobial resistance in generic Esch－erichia coli and Salmone．cultured from identical fecal sampels in finishing swine［J］．Can J Vet Res，2008，72(2):181－187．

［7］卢晓辉，杜少甫，张磊．豫北地区仔猪腹泻病的调查及防控［J］．畜牧与兽医，2016，48(2):141－142．

Isolation，Identification and Drug Resistance of Salmonella from Swine

Wang Wei1，2，Zhang Shuangxiang3，Zhou Bijun1，2，Hu Xingyi1，2，Zhang Hai1，2，Wen Ming1，2Cheng Zhentao1，2，Wang Kaigong1，2*
(1．College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang Guizhou 550025，China;2．Institute of Animal Diseases，Guizhou University，Guiyang Guizhou 550025，China;3．Animal Disease Prevention and Control Center in Guizhou Province，Guiyang Guizhou 550001，China)

Isolation and identification of Salmonella from 57 intestinal samples of diarrhea piglets collected from a large－scale pig farm in Guizhou province，and drug susceptibility was analyzed by drug sensitivity method．The results showed that the resistance rate of Salmonella to antimicrobial agents was from high to low in the order of aboren，erythromycin，kanamycin，gentamicin and norfloxacin，and are multi－drug resistant strains，resistant to more than 12 kinds of species．The results provided a theoretical basis for rational use of drugs to control Salmonella infection in piglets．

Piglet Diarrhea;Salmonella;Isolation;Drug Resistance

S858．28

A

1007－1474(2016)06－0001－04

2016－09－26

贵州省科学技术厅农业攻关项目(黔科合NY［2015］3009－1号);“贵州省动物疫病防控与兽医公共卫生保障科技创新人才团队”(黔科合人才团队［2015］401号6)

王伟(1990—)，男，贵州大学动物科学学院，在读硕士研究生。E－mail:332087913@qq．com

*通讯作者:王开功(1959—)，男，教授，从事预防兽医学的教学和科研工作。E－mail:kaigongwang@aliyun．com