罗友军，肖　媛，李广平

(广东省东莞三局医院检验科　523710)



·临床研究·

东莞塘厦地区门诊女性人乳头瘤病毒感染调查

罗友军，肖媛，李广平

(广东省东莞三局医院检验科523710)

目的了解人乳头瘤病毒(HPV)基因亚型在东莞塘厦地区女性人群中的感染状况、型别分布和年龄分布等特点。方法选择2013年1月至2015年12月东莞三局医院皮肤性病科和妇科门诊的女性宫颈脱落细胞标本共3 316例，应用导流杂交基因芯片技术对其进行分型检测，分析HPV感染状况及感染亚型的分布情况。结果HPV总感染率为25.21%(836/3 316)；HPV亚型的感染率高危型中较高的依次为52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)较高。其中单一型别感染率为16.04%，多重亚型混合感染率为9.17%。不同年龄段HPV感染率差异有统计学意义(P<0.05)。结论应加强对该地区高危人群的干预，降低HPV的感染率。

人乳头瘤病毒；基因分型；分子杂交；广东

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属的球形DNA病毒，感染区域主要是人的皮肤和黏膜的基底层上皮细胞，并引起皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，迄今为止已发现170种亚型[1]。据研究表明，在常见的HPV型别中分高危型别和低危型别，型别的不同导致它们的生物学特性及致病性各不相同，高危型别的HPV主要与宫颈上皮内瘤样病变、宫颈癌等有关；而低危型别的HPV主要与外生殖器病毒性疣、软下疳等良性病变有关[2]。不同的年龄阶段对HPV的敏感程度存在一定的差异，此外也存在一定的地区差异，故HPV分型检测对女性宫颈病变的随访治疗，宫颈癌的早期筛查及预后判断具有重大的临床意义；研究不同地区HPV基因型分布情况也有很大的现实意义。本次应用导流杂交技术结合基因芯片技术对东莞塘厦地区门诊女性的宫颈脱落细胞标本进行HPV基因型的检测[3]，通过对检测结果的研究分析，了解该地区女性人群HPV的感染情况，不同亚型感染率分布及不同年龄段感染情况。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2013年1月至2015年12月本院皮肤性病科和妇科门诊的女性宫颈脱落细胞标本共3 316例，年龄16～79岁，平均(38.7±11.3)岁,其中≤20岁98例，>20～30岁1 142例，>30～40岁1 256例，>40～50岁658例，>50～60岁138例，>60岁24例。

1.2仪器与试剂BIOER life Express PCR仪(杭州博日)；高速离心机(长沙湘仪离心机有限公司)；HybridMax医用核酸分子快速杂交仪(广东凯普生物科技股份有限公司)；检测试剂为广东凯普生物科技股份有限公司生产的21种HPV分型检测试剂盒。

1.3方法21种HPV分型检测试剂盒能检测的基因型别包含16种高危亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304)和5种低危亚型(6、11、42、43、44)。

1.3.1宫颈脱落细胞标本的核酸分离提取取800 μL标本，严格按照试剂盒的说明书对标本进行离心、加热等处理，提取标本核酸。

1.3.2标本核酸的PCR扩增按照试剂盒说明书配制PCR扩增试剂并分装每管24 μL，加入待检核酸1 μL，PCR反应总体积为25 μL，按试剂盒说明书进行40个循环扩增，获得扩增产物。

1.3.3PCR产物杂交分析扩增产物95 ℃变性5 min，迅速放入冰水浴，严格按照试剂盒说明书将扩增产物加入到杂交仪中准备好的芯片膜条上进行杂交、洗膜、封阻、酶标、洗膜、显色、洗膜等实验步骤，实验结束取出芯片膜条判读结果。

1.3.4结果判读根据说明书上杂交膜具体探针位置，其中Biotin为杂交反应对照点，IC点为PCR扩增反应对照点。正常结果的膜条中Biotin和IC这两个点都会显色，其他为阳性结果点。HPV单一型别感染时，在导流杂交膜芯片上相应的HPV亚型探针位点处可见一蓝紫色圆点，多重型别复合感染时，在膜上可见2个或2个以上的显色斑点。

1.4统计学处理检测统计所得的数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析，计数资料采用百分率表示，组间比较采用χ2检验；以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1HPV阳性率及各基因型阳性率本次研究共检测3 316例标本，其中HPV阳性标本共有836例，阳性率为25.21%。HPV亚型的高危型中感染率较高的5种依次为52型(5.52%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)；低危型中6型(4.92%)，11型(3.80%)较高。各亚型的阳性率见表1。

表1　HPV不同亚型阳性率[n(%)]

注：基因型阳性率指该基因型单一感染或多重感染时出现的阳性率,例如某患者检测结果为HPV16、18、31三种型别复合感染，那么计算时分别在HPV16、HPV18、HPV31中各计数1次。

2.2HPV亚型感染的比例在836例阳性结果中，单一型别的感染为524例，占感染总数的62.68%(524/836)，多重型别的感染为312例，占感染总数的37.32%(312/836)。

2.3HPV感染与年龄分布经统计，在≤20岁组别中HPV阳性率最高，为39.80%，各年龄段之间的HPV阳性率比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　HPV阳性率情况与年龄分布

3　讨　论

HPV基因分型检测技术是目前较先进的基因检测技术，其将PCR技术的高灵敏度、导流杂交技术的高特异性及基因芯片技术的高通量特点相结合，一次实验操作便能完成对21种HPV亚型的检测，有很好的临床应用价值。

HPV是一类以感染人体皮肤及黏膜复层鳞状上皮细胞为主的乳头瘤病毒，在女性生殖道中具有较高的感染率，据调查了解，很多关于HPV的研究表明了HPV 的感染情况存在着明显的地区差异[4]。本次调查对3年来在本院的3 316例门诊女性的宫颈脱落细胞标本进行检测统计，结果的HPV感染率为25.21%，与全国的平均水平14.20%[5]相比，明显高于该水平，也高于成丽虹[6]研究报道的东莞莞城区的HPV感染率(15.4%)和李灿等[7]研究报道的成都成华区的HPV感染率(19.0%)，与闫琛等[8]研究报道的郑州地区HPV感染率(25.9%)接近。由此说明HPV的感染情况存在一定的地域差异。经统计分析，东莞塘厦地区的HPV感染情况主要以单一感染为主。在本次研究的结果中高感染率的型别中有52型(5.52%)，6型(4.92%)，11型(3.80%)，CP8304型(3.80%)，16型(3.71%)，58型(2.83%)，53型(2.68%)，因本次调查研究的标本对象有部分来自皮肤科门诊的标本，所以低危型中的6型和11型有较高的感染率。鲍彦平等[9]报道的中国妇女子宫颈HPV型别分布的Meta分析中提出HPV16、HPV58、HPV52型在亚洲(尤其在中国是高发区)人群中具有重要的意义。这说明在各个地区HPV亚型的流行情况是不同的，这对疫苗的研发具有指导意义，因此在新一代的疫苗研发中，我国HPV疫苗的研发还应该对HPV52和58型予以重视。

此次研究中发现，HPV在≤20岁的年龄段和>60岁的年龄段中感染率较高，认为HPV的感染在趋于年轻化，这与≤20岁的年轻女性性行为提前，婚前性行为增多，性生活比较混乱，而高龄(>60岁)妇女随着年龄的增加免疫力相对减弱有关。21～40岁年龄段的检查例数最多，主要是因为该年龄段的女性性生活相对比较活跃，因而出现的妇科问题也相对比较多，检测筛查的意愿相对也比较强。

通过调查统计了解本地区的门诊女性人群HPV感染的情况，不同HPV型别的感染率及不同年龄段感染率分布情况，及早发现HPV感染的高危人群，及早干预治疗、跟踪随访，对于研究本地区的HPV流行病学，降低本地区女性人群的HPV感染率，降低女性宫颈癌的发病率有重大的意义。

[1]Bzhalava D,Guan P,Franceschi S,et al.A systematic review of the prevalence of mucosal and cutaneous human papillomavirus types[J].Virology,2013,445(1/2):224-231.

[3]陈占国，周武，许张晔，等．导流杂交方法检测人乳头状瘤病毒分型的临床应用[J]．中华医院感染学杂志，2008，18(9)：1345-1348．

[4]张丽娜，周蓓蓓，陈昕华，等．区域性人乳头状瘤病毒基因型别检测临床研究[J]．中国妇幼保健，2010，25(16)：2216-2218．

[5]赵戴君，龚向真，胡争光，等．上海市社区妇女子宫颈人乳头瘤病毒感染现况及危险因素研究[J]．现代预防医学，2010，37(10)：1867-1870,1872．

[6]成丽虹．东莞市莞城区妇女人乳头瘤病毒感染率及其对HPV疫苗的认知情况调查[J]．深圳中西医结合杂志，2015，25(19)：188-190．

[7]李灿，陈伟，赵静，等．妇科门诊病人HPV分型检测及感染情况分析[J]．西南军医，2015，17(3)：253-255．

[8]闫琛，杨广英．郑州市女性HPV感染状况及基因型的分布情况调查[J]．中外医学研究，2012，10(5)：64-66．

[9]鲍彦平，李霓，王鹤，等．中国妇女子宫颈人乳头瘤病毒型别分布的Meta分析[J]．中华流行病学杂志，2007，28(10)：941-946．

2016-02-19修回日期：2016-05-19)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.052

A

1673-4130(2016)15-2177-03