王　华，甄拴平，党丽君，张树琪

(陕西省宝鸡市中医医院检验科　721001)



强直性脊柱炎与HLA-B27基因亚型的相关性研究

王华，甄拴平，党丽君，张树琪

(陕西省宝鸡市中医医院检验科721001)

摘要:目的探讨不同人类白细胞抗原B27(HLA-B27)基因亚型与强直性脊柱炎(AS)的相关性。方法采集骨科、针灸风湿科门诊及住院患者静脉全血,应用基因分析法定性检测HLA-B27，其中HLA-B27阳性的AS确诊患者380例，并选取HLA-B27阳性健康对照组50例，同时通过序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术检测AS患者和健康对照组的HLA-B27基因亚型。结果380例AS患者中，检出HLA-B2704亚型217例(57.1%)，HLA-B2705亚型143例(37.6%)，HLA-B2707亚型11例(2.9%)，HLA-B2711亚型9例(2.4%)；50例HLA-B27阳性健康对照组中，检出HLA-B2706亚型23例(46.0%)，HLA-B2709亚型21例(42.0%)，HLA-B2704亚型4例(8.0%)，HLA-B2705亚型2例(4.0%)，两组比较差异有统计学意义(P=0.002)。结论宝鸡地区AS患者HLA-B27基因亚型以B2704和B2705为主，与宝鸡地区汉族人群AS的发病呈强相关；B2706及B2709为该地区保护亚型。

关键词:强直性脊柱炎；HLA-B27；PCR-SSP;亚型

强直性脊柱炎(AS)是一种自身免疫疾病，目前尚未明确病因，认为属于遗传性疾病。AS是一种以骶髂关节炎及中轴关节病变为特征的慢性炎性血清阴性脊柱关节病。AS致残率高，早期诊断对患者的治疗非常重要。人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的检测有助于AS的诊断，在我国90%以上的AS患者HLA-B27呈阳性[1]，同时HLA-B27存在多个等位基因，不同亚型的分布有着地域和人种的差别。笔者选取了宝鸡地区HLA-B27阳性AS患者及健康人进行HLA-B27基因亚型检测，探讨本地区主要致病亚型及可能的保护亚型，以期为本地区AS的防治提供有用的依据。

1资料与方法

1.1一般资料2010年1月至2014年7月本院骨科、针灸风湿科门诊及住院患者，均为宝鸡及周边地区汉族个体，其中HLA-B27阳性的AS确诊患者380例(符合1984年AS纽约修订诊断标准[2])，男247例，女133例，男女比例1.86∶1，平均(35.00±8.37)岁；健康对照组50例，均为宝鸡地区汉族HLA-B27 阳性健康人个体之间无血缘关系，男33例，女17例，男女比例1.94∶1，平均(34.00±6.40)岁。两组年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂PCR仪器购自杭州博日，HC-2517高速离心机购自安徽中佳公司；JY600C电泳仪购自北京君意公司，全血DNA提取试剂盒、PCR试剂盒购自台湾贝索公司。BAG HISTO HYPE HLA-B27 Hight试剂盒和EXTRA-GENE试剂盒由德国BAG公司提供，上海培清JS-300凝胶图像分析仪，Gene Quant Pro型DNA浓度测定仪。

1.3方法

1.3.1应用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)定性检测外周血T淋巴细胞HLA-B27清晨空腹抽取患者及健康对照组静脉血1.0 mL，EDTA抗凝，各项操作及结果判断严格按照说明书步骤进行。

1.3.2HLA-B27基因亚型测定采用PCR-SSP技术检测HLA-B27阳性患者及健康对照人群HLA-B27亚型的DNA。(1)DNA模板的制备：采用EXTRA-GEN试剂盒(盐析法)，浓度>50 ng/μL，A260/A280的比值为1.6～2.0。(2)PCR扩增：使用BAG HISTO HYPE HLA-B27 Hight试剂盒(可检测HLA-B2701至B2743亚型)，PCR反应体系的配制和PCR扩增反应严格按照试剂盒操作说明书进行。(3)凝胶配制：准确称取2.0 g的琼脂糖溶解于100 mL 0.5×TBE溶液(浓度为2.0%)。(4)PCR扩增产物分析：准确吸取10 μL扩增产物加入电泳槽内琼脂糖凝胶中，采用150 mV电压电泳10 min，然后用JS-300凝胶图像分析仪照相，最后用BAG HISTO HYPE HLA-B27 Hight格局分析表进行HLA-B27亚型分型结果的判定。

1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件，计数资料采用百分率表示，各组HLA-B27阳性率比较采用χ2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

HLA-B27阳性AS患者年龄分布情况，见表1。AS患者及健康对照组HLA-B27基因亚型检出情况，见表2。AS患者及健康对照组HLA-B27基因亚型分布差异有统计学意义(P=0.002)。

表1　　HLA-B27阳性AS患者年龄分布情况

表2　　AS患者及健康对照组HLA-B27基因亚型检出情况[n(%)]

3讨论

目前AS确诊主要是依靠临床表现和影像学、实验室检查结果。成年患者AS的诊断主要依赖于详细的病史和细致的体格检查，临床表现为腰、骶及下肢关节疼痛，晚期患者脊柱僵硬、活动受限，甚至引起其他组织的伤害，严重影响患者的生活[3]；对于有慢性炎性背痛的青少年，特别是缺乏足够的骶髂关节炎影像学证据时，HLA-B27检测就显得尤为重要。AS患者遍及世界各地，其总体发病率约为7.3/100 000，在我国AS发病率约为0.3%，多见于中青年男性，且AS致残率高，故早期确诊并及时治疗对患者非常重要。

本研究中，11～20、21～30、31～40岁的HLA-B27阳性率分别为38.6%、34.5%、33.1%，显著高于其他年龄段，且这些青壮年人群的临床症状和体征普遍不够典型，大多数缺乏足够的骶髂关节炎影像学证据。因此，对本地区疑似AS患者应尽早检测HLA-B27，有助于青壮年AS患者的早期诊断和针对性治疗，同时结合AS家族史对于AS的预防具有积极的意义。尽管HLA-B27有助于AS诊断，但HLA-B27也可能出现于银屑病性关节炎、反应性关节炎和肠性关节炎等疾病，因此，临床上对于不典型病例有必要进行HLA-B27基因亚型检测，这样有利于AS与上述疾病的鉴别诊断。

目前认为HLA-B27与AS可能有以下关系[4]：HLA-B27为AS的致病菌或者感染因子受体；HLA-B27与外来的抗原反应，诱导机体产生抗原耐受性；HLA-B27增强了中性粒细胞活性；HLA-B27为免疫应答基因，与机体是否容易感染起决定性因素。

资料显示，HLA-B27有81个亚型，分别命名B2701～B2782(B2722等位基因后被删除)。B2705为分布最广的亚型，可能是其他基因的祖基因，即其他基因是由其进化而来[5],本研究采用的分型方法可检测HLA-B2701～B2743共43个亚型，涵盖了大多数的常见基因亚型。

研究显示，AS的患病率与HLA-B27的出现频率和种族分布差异紧密相关，约90%的AS白人患者HLA-B27呈阳性，而在非洲黑人和日本人中，几乎不存在AS和HLA-B27相关性(HLA-B27的阳性率低于1%)。同时不同HLA-B27亚型有着不同的地域和人种分布特点[6]。在世界范围内，除了西非的塞内加尔、冈比亚外，B2705和AS及相关的脊柱关节病有明显相关性。B2702主要存在于白种人，中东犹太人和北非人；B2704、B2706、B2707只在东方人种中发现，在我国也以B2704最多见，约占55%，是主要的HLA-B27亚型，但B2704的分布频率在东方各民族间又存在一定差异[6]，究其原因，主要受HLA-B27易感性因素或地理环境因素差异的影响。

有报道认为，B2705、B2704、B2702亚型与AS的发生呈正相关，B2703、B2708、B2709、B2707与AS的发生呈负相关[7-9]，而B2706亚型则被普遍认为是AS的保护性基因。本研究结果显示，宝鸡地区HLA-B27阳性患者亚型分布依次为B2704、B2705、B2707、B2711，且B2704亚型占57.1%，B2705亚型占37.6%。50例HLA-B27阳性健康对照组检出4种亚型：HLA-B2706亚型23例(46.0%)，HLA-B2709

亚型21例(42.0%)，HLA-B2704亚型4例(8.0%)，HLA-B2705亚型2例(4.0%)，经统计分析，两组差异有统计学意义(P=0.002)。证实本地区AS患者中HLA-B27主要亚型分布为B2704亚型与B2705亚型，且B2704亚型为优势亚型；而B2706亚型及B2709亚型仅见于HLA-B27 阳性健康者，提示B2706亚型及B2709亚型为本地区保护亚型。

综上所述，通过对宝鸡地区HLA-B27阳性的患者及健康对照人群HLA-B27分型研究，发现了本地区HLA-B27基因主要致病亚型和可能的保护亚型，对于症状体征不典型患者和疑难患者的诊断和鉴别诊断具有一定价值。但由于检测病例数量有限，未能涉及本地区HLA-B27基因动态表达量与AS患者疾病活动指数的相关性，后续将进一步开展这方面的工作，为本地区AS的防治提供必要的探索。

参考文献

[1]高凤云．HLA-B27检测应用于强直性脊柱炎的临床意义[J]．吉林医学，2012，33(6)：1164．

[2]Werner S,Alzheimer C.Roles of activin in tissue repair,fibrosis,and inflammatory disease[J].Cytokine Growth Factor Rev,2006,17(3):157-171.

[3]李梦远,姚中强,刘湘源.HLA-B27与强直性脊柱炎免疫学机制的研究进展[J].生理科学进展,2011,42(1):16-20.

[4]李微,王可鹏,张广繁.强直性脊柱炎与HLA-B27相关性的理论与实践[J].中国实用医药,2009,4(10):101.

[5]Khan MA.HLA-B27 polymorphism and association with disease[J].J Rheumatol,2000,27(5):1110-1114.

[6]Duangchanchot M,Puapairoj C,Romphruk A,et al.HLA-B*27 subtypes in Northern and Northeastern Thais,Karens,and Bamars determined by a high-resolution PCR-SSP technique[J].Tissue Antigens,2009,73(6):590-594.

[7]López-Larrea C,Sujirachato K,Mehra NK,et al.HLA-B27 subtypes in Asian patients with ankylosing spondylitis Evidence for new associations[J].Tissue Antigens,1995,45(3):169-176.

[8]汪薇,李志强.HLA-B*27基因亚型与强直性脊柱炎的相关性研究[J].临床输血与检验,2009,11(4):376-379.

[9]陆君,汪薇,李志强.强直性脊柱炎患者HLA-B*27基因亚型及序列研究[J].中国输血杂志,2011,24(9):743-745.

作者简介：王华，女，主管检验技师，主要从事临床免疫学及微生物学检验研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.021

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)14-1954-03

(收稿日期：2016-01-19修回日期：2016-03-22)

Study on correlation between ankylosing spondylitis and HLA - B27 subgenotype

WANGHua,ZHENShuanping,DANGLijun,ZHANGShuqi

(DepartmentofClinicalLaboratory,BaojiMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine,Baoji,Shaanxi721001，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the correlation between different HLA-B27 subgenotype and ankylosing spondylitis(AS).MethodsThe whole venous blood was collected from the outpatients and inpatients of the orthopedics,acupuncture and rheumatism departments and HLA-B27 was qualitatively detected by using the gene analysis method.Among them,380 cases of AS were HLA-B27 positive,and 50 cases of HLA-B27 positive were selected as the healthy control group.Then the HLA-B27 subgenotypes were detected by using the sequence specific primers PCR(PCR-SSP) technology.ResultsAmong 380 cases of AS,217 cases (57.1%) of HLA-AS B2704 subgenotype,143 cases (37.6%) of HLA-B2705 subgenotype,11 cases (2.9%) of HLA-B2707 subgenotype and 9 cases (2.4%) of HLA-B2711 subgenotype were detected out;among 50 cases of HLA-B27 positive in the healthy control group,23 cases (46.0%) of HLA-B2706 subgenotype,21 cases (42.0%) of HLA-B2709 subgenotype,4 cases (8.0%) of HLA B2704 subgenotype and 2 cases (4.0%) of HLA-B2705 subgenotype were detected out,the differences between the two groups were statistically significant (P=0.002).ConclusionThe subgenotypes of HLA-B27 among the AS patients in Baoji area are dominated by the genotype B2704 and B2705,which is strongly correlated with the occurrence of AS among Han population in Baoji area;B2706 and B2709 are the protective subgenotypes in this area.

Key words:ankylosing spondylitis；HLA-B27；PCR-SSP；subtype