刘翠华　昌　畅

南方医科大学南方医院药材科，广东　广州　510515



HPLC法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的研究

刘翠华昌畅

南方医科大学南方医院药材科，广东广州510515

【摘要】目的：探讨采用高效液相色谱法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的价值。方法：根据高效液相色谱法，色谱柱(150 mm × 4.4mm，5μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)；流速1 ml/min；柱温：25℃。分别对黄芪与红芪中的黄芪甲苷进行含量测定。结果：在2.024～10.120μg范围内，黄芪甲苷的线性关系良好。结论：该方法具有准确、稳定、可重复的特点。黄芪中明显含有黄芪甲苷，而红芪中黄芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鉴别黄芪与红芪。

【关键词】黄芪；红芪；黄芪甲苷； 高效液相色谱法

黄芪是临床常用的补益药，其味甘，性温，具有利尿排毒、敛疮生肌、补气固表的功效。研究发现，黄芪所含的皂苷具有提高免疫的功能，而皂苷中的主要有效成分为黄芪甲苷，并具有降压、消炎镇痛的活性。红芪具有补气升阳、固表止汗、敛疮生肌的功效。与黄芪相比，红芪的抗菌、降压作用较强。研究采用效液相色谱法对黄芪与红芪中黄芪甲苷进行鉴别，进而为黄芪、红芪中药制剂的质量控制提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪(蒸发光散射检测器，美国安捷伦科技有限公司)；ABS135-S型分析天平(美国梅特勒-托利多公司)。

1.2材料黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品鉴定所)；红芪(购自郑州药材市场)；黄芪(购自甘肃兰州药材市场)；高纯氮气(纯度为99.999%，济南尧天仪器有限公司)。甲醇、乙醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2方法

2.1色谱条件日本岛津C18色谱柱(150mm × 4.4mm，5μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)；流速1ml/min；柱温：25℃。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。见图1。

图1　黄芪甲苷标准液色谱图

2.2供试品溶液的制备精密称取黄芪/红芪粉末4.0g，放入索氏提取器，加入甲醇40m1，冷浸后再加30 ml甲醇。然后80℃回流4个小时，过滤，浓缩干燥，提取物加l0 ml水轻微加热进行溶解。用水饱和正丁醇进行萃取，每次40 ml，共4次。合并正丁醇液并洗涤，洗涤用氨试液进行，每次用40 ml，共洗涤2次，弃去氨液。蒸干正丁醇液后在残渣中加入水5ml。使用50ml水洗脱后弃去水液，再用40%乙醇洗脱，乙醇用量为30m1，同样去除乙醇洗脱液。随后用70%乙醇80ml继续进行洗脱，收集洗脱液，蒸干，甲醇溶解后放进5ml量瓶轻摇至均匀。

2.3对照品溶液制备精密称取5.0mg对照品黄芪甲苷放入l0 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品溶液。

2.4标准曲线与线性关系精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20μl测定，以黄芪甲苷含量为横坐标，峰面积均值为纵坐，得回归方程：Y=1.294×10-6X+0.02812(R=0.9994)。表明黄芪甲苷在2.024～10.120μg范围内具有良好的线性关系。

2.5稳定性实验取黄芪甲苷对照品溶液，分别在0、 3 、6、12、18、24h测定其峰面积。结果该溶液在24h内基本稳定。

2.6精密度实验取黄芪甲苷对照品溶液20μl，平行5次进样。结果峰面积的相对标准偏差为1.02%(n=5)，表明仪器的精密度较好。

2.7重复性实验称取黄芪药材5.0g，平行5份。按照“2.2”的方法进行操作，并测定峰面积。结果样品5次所得的黄芪甲苷含量一致，说明方法具有良好的重复性。

2.5回收率实验称取黄芪药材5.0g，平行5份，每份加入黄芪甲苷3.0mg，按照“2.2”的方法操作。平均回收率为98.2%，RSD=0.87%。说明样品的回收率较好。

2.6样品测定取黄芪、红芪中药饮品，按照“2.2”方法操作，按照“2.1”的条件测定黄芪甲苷的含量。结果：黄芪、黄芪中均含有黄芪甲苷，与黄芪相比，红芪中黄芪甲苷的含量微小。见图2、图3。

图2　黄芪中药饮品色谱图

图3　红芪中药饮品色谱图

3讨论

黄芪是一种常用的补气药，含有皂苷类、黄酮类、多糖类、氨基酸类等多种化学成分。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分，具有抗氧化、降压、消肿止痛、提高免疫功效等活性，目前作为监控黄芪药材质量的指标之一。薄层扫描法、高效液相色谱法均为测定黄芪甲苷含量的常用方法，但薄层扫描法的操作不便，测定结果的偏差较大，且紫外线检测器的灵敏度较低，受杂质的干扰较大、信噪比较低，回收率不稳定。研究采用高效液相色谱法对黄芪与红芪中的黄芪甲苷成分进行了检测，该方法具有较高的灵敏度，简单而准确，无干扰，重复性较高，适用于黄芪甲苷的含量测定。此外，研究发现，黄芪、黄芪中均含有黄芪甲苷，但与黄芪相比，红芪中黄芪甲苷的含量微小，这一特点可作为区分红芪和黄芪饮品的判断指标。

参考文献

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【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)09-0024-02

(收稿日期：2016.03.04)