陈兆云，谢　娜，张朝霞，孟存仁，顾　挺，赵建梅，张　晨

(1.新疆医科大学第一附属医院检验中心，乌鲁木齐 830054；2.新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830011；3.新疆医科大学第五附属医院，乌鲁木齐 830011)



论著·临床研究

新疆汉族、维吾尔族丙型肝炎感染者HCV基因型研究*

陈兆云1，谢娜2，张朝霞1，孟存仁1，顾挺1，赵建梅1，张晨3△

(1.新疆医科大学第一附属医院检验中心，乌鲁木齐 830054；2.新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心，乌鲁木齐 830011；3.新疆医科大学第五附属医院，乌鲁木齐 830011)

[摘要]目的了解新疆不同地区汉族和维吾尔族(以下简称维族)丙型肝炎感染者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型的特征，为新疆丙型肝炎的诊断和治疗提供依据。方法对380份汉族和维族丙型肝炎感染者血清样本先进行荧光定量PCR检测病毒载量，载量大于1×103 copies/mL的再采用PCR-反向点杂交法进行HCV基因分型。结果基因分型确定355份样本，成功分型率为93.4%，汉族和维族基因型检出率1b型分别为59.91%、69.92%，2a型分别为30.17%、12.20%，3a型分别为5.60%、8.13%，3b型分别为3.88%、8.94%。新疆乌鲁木齐和其他地区丙型肝炎感染者中，维族、汉族病例分布差异有统计学意义(P<0.05)，且乌鲁木齐和其他地区男性、女性病例分布差异有统计学意义(P<0.05)。乌鲁木齐地区病例中，维族、汉族男性感染者2a型和女性感染者1b、3b型差异均有统计学意义(P<0.05)。新疆其他地区，仅2a型男性维族、汉族感染者发病有差异有统计学意义(P<0.05)，其他基因型差异无统计学意义(P>0.05)。结论新疆地区汉族和维族丙型肝炎感染者HCV基因型分布与国内大多数地区不同，汉族以1b、2a型为主，而维族以1b型为主，其次是2a、3a、3b型。

[关键词]新疆；丙型肝炎；基因型

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)属于黄热病毒科，颗粒外有脂质包膜，是一种高度异质性的单股正链RNA病毒。通过对HCV进行基因序列分析发现，其株间存在很大差异，因此HCV基因分型得到同行的认同[1-3]。目前至少有Kanazawa系统、Okomoto 系统、Chan 系统、Simmonds 4种不同的HCV 基因型命名系统[4],在第2届HCV与相关病毒国际讨论会议上制订了统一的命名系统——Simmonds基因分型系统。按此命名系统目前HCV有6种基因型(1～6)和11种基因亚型(1a～c，2a～c，3a～b，4a，5a，6a)[5]。HCV基因型与疾病严重程度存在相关性[6]。HCV基因分型对监测HCV基因型的变化、追踪传染源、分析流行趋势，以及对HCV感染、传播、诊疗及预防等方面均有重要意义[7]。本文通过对新疆地区汉族和维吾尔族(以下简称维族)丙型肝炎感染者HCV基因型进行分析，以期为今后新疆地区丙型肝炎的治疗提供有价值的参考。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1临床资料收集2013年7月至2014年7月在乌鲁木齐3所三级甲等医院就诊的来自全疆的丙型肝炎感染者血清380例，分型确定355份样本，其中，汉族男111例，年龄19～85岁，汉族女121例，年龄19～78岁；维族男62例，年龄20～72岁，维族女61例，年龄12～76岁；乌鲁木齐地区的汉族和维族感染者分别为110例和30例，新疆其他地区的汉族和维族感染者分别为122例和93例。纳入标准：感染者有详细的家庭住址，无其他病毒性肝炎感染或携带，且经HCV荧光定量PCR检测，病毒载量大于1×103copies/mL。标本的处理：非抗凝真空负压采静脉血2～3 mL于30 min内3 000 r/min离心15 min分离血清，-80 ℃冻存备用。

1.1.2仪器和试剂伯乐iCycler iQ型荧光定量PCR扩增仪。HCV-RNA定量检测试剂(YZB/国 5567-2011)和基因分型试剂(YZB/国 5573-2011)均由达安生物工程公司提供。引物序列如下，外侧上游引物：5′-TGG GGA TCC CGT ATG ATA CCC GCT GCT TTG A-3′；外测下游引用：5′-GGC GGA ATT CCT GGT CAT AGC CTC CGT GAA-3′。扩增的片段长度为401 bp。内侧上游引物：5′-CTC AAC CGT CAC TGA GAG AGA CAT-3′；内侧下游引物：5′-GCT CTC AGG TTC CGC TCG TCC TCC-3′(杂交引物)。扩增的片段长度为339 bp。

1.1.3感染者分组慢性丙型肝炎、中重度肝炎、丙型肝炎肝硬化、丙型肝炎相关性肝癌分别为45、272、26、12例，临床诊断均依照《中华人民共和国卫生行业标准》丙型病毒性肝炎诊断标准(WS213-2008)[8]。

1.2方法

1.2.1HCV-RNA定量检测的所有操作按照试剂盒使用说明书进行，主要包括以下过程。

1.2.1.1RNA提取采用离心柱提取方法将待测样本与阴性质控品、HCV 强阳性质控品、HCV 临界阳性质控品进行同步处理。

1.2.1.2扩增逆转录体系：0.5 mmol/L dNTPs，1 μmol/L oligo-dT引物，Rnase抑制剂10 U，逆转录酶4 U；扩增体系：加入探针和引物的反应缓冲液(DNA聚合酶，UNG，dNTP)；提取的RNA，总体积一般为20～50 μL。

1.2.2丙型肝炎基因分型检测丙型肝炎基因分型检测严格按照基因分型检测试剂盒说明书进行杂交、洗膜。

1.2.3结果判定杂交膜条采用扫描仪采集实验数据，并以JPEG格式输出结果。探针阴阳性判定：肉眼观察杂交膜条或扫描结果，明显可见蓝色的探针，判定为阳性；不显色或显色极淡的探针，判定为阴性。

1.2.4质量控制基因分型检测时，随标本同时加入1个阴性对照，1个阳性对照，阳性对照为1b型。显色反应控制点 CC：信号值应大于或等于临界值，且为边缘清晰的蓝色圆点，表示杂交过程正常。否则需要重新进行杂交显色过程。

南疆脱贫攻坚成为新疆全面建设小康社会的底线任务和标志性指标，随着扶贫工作的进展，农村通电、通广播电视、通网络宽带、通路、通水已逐步实现，村镇经济发展在电力保障下，各种电器设备的安装、使用、维护需求日益凸显，其中不乏新技术、新工艺、新设备的应用，如果不能适应新环境下对电工提出的新需求，从业人员必将在今后竞争中处于劣势。

1.3统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行分析，计量资料多组比较采用方差分析，计数资料以率表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1民族差异基因分布结果显示，1b型为新疆丙型肝炎发病的基因型，355例HCV感染者中，225例为1b型，占63.38%。2a型所占比例也较高，且汉族、维族之间差异有统计学意义(P<0.05)，其他各基因型也占有一定比例，汉族、维族差异无统计学意义(P>0.05)。新疆地区汉族和维族HCV基因型构成比见表1。

2.2地区分布乌鲁木齐地区和新疆其他地区丙型肝炎感染者中，汉族、维族病例分布差异有统计学意义(P<0.05)，且两地男性、女性病例分布差异也有统计学意义(P<0.05)，见表2。乌鲁木齐病例中，汉族、维族男性感染者2a型差异有统计学意义(P<0.05)，女性感染者1b、3b型有差异，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。新疆其他地区病例中，仅2a型男性汉、维族感染者发病差异有统计学意义(P<0.05)，其他基因型差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表1　　新疆地区汉族和维族HCV基因型构成[n(%)]

-：未做统计学处理。

2.3不同疾病HCV基因型差异在中重度肝炎、丙型肝炎肝硬化、丙型肝炎相关性肝癌患者中，分析显示1b、2a型在3种疾病中分布差异无统计学意义(P>0.05)。但是合计310例，所占比例远高于慢性丙型肝炎的例数(45例)。见表5。

表2　　不同地区维族、汉族HCV基因型性别差异[n(%)]

-：未做统计学处理。

表3　　乌鲁木齐地区男性、女性中汉族和维族HCV基因型差异[n(%)]

续表3　　乌鲁木齐地区男性、女性中汉族和维族HCV基因型差异[n(%)]

-：未做统计学处理。

表4　　新疆其他地区男性、女性中汉族和维族HCV基因型差异[n(%)]

-：未做统计学处理。

表5　　不同疾病HCV基因型比较[n(%)]

3讨论

丙型病毒性肝炎是一种由HCV感染引起，主要经血液、性、母婴等方式传播。近年来，我国丙型肝炎的诊断率在不断提高，丙型肝炎新报告病例也不断增加[9]。2010年全国丙型肝炎发病数约为15万，比2009年增加近15.50%，2011年又比2010年增长20.00%以上[10]。

HCV基因型分布呈现明显的地域差异[11]，亚洲的香港以1、2 和6 型为主，台湾以2 型为主，南亚以1 型为主，欧洲国家以1 型为主，且3 型流行率高于非洲和亚洲，而非洲以4 和5 型为主[12]。而在我国以往的学者研究报道中，也存在地域差异，南方沿海城市以1b 为主(占90.00%以上)，北方城市以2a为主(占46.00%～70.00%)，虽然南北方差异不大，但总体上南方1b 多于东北地区[13]。本研究中，1b基因型比例最高，为225例(63.38%)，这与之前的研究不一致。其次为2a 型为85例(23.94%)，且维、汉族之间差异有统计学意义(P<0.05)，新疆是少数民族聚居的地区，其中维族占47.50%，这一民族分布特征与其他北方内陆城市有一定差异，这可能是导致HCV 基因型分布与以往报道的流行病学分布特征不一致的原因之一。

从地区分布来看，乌鲁木齐和新疆其他地区HCV感染者基因型比较，维族、汉族男性、女性差异均有统计学意义(P<0.05)。乌鲁木齐病例中，维族、汉族男性感染者2a型差异有统计学意义(P<0.05)，女性感染者1b、3b型差异有统计学意义(P<0.05)。新疆其他地区病例中，仅2a型男性维、汉族感染者发病差异有统计学意义(P<0.05)，其他基因型差异无统计学意义(P>0.05)。此外，本研究经过细致分析，发现性别对HCV基因型分布有一定影响， 乌鲁木齐地区2a型汉族与维族之间存在差异，汉族男性以2a型所占比例较高；女性感染者中，维、汉族1b、3b型有差异。新疆其他地区病例中，仅2a型男性维、汉族感染者发病差异有统计学意义(P<0.05)，其他基因型差异无统计学意义(P>0.05)。可见不同地区，影响疾病发生的因素有所不同，乌鲁木齐是新疆省会，卫生资源相对其他地区较丰富，医疗机构相对集中，疾病严重感染者多在当地无法医治时转往乌鲁木齐就诊，血液使用量远高于其他地区，由输血所导致的HCV感染可能占一定比例。此外，吸毒行为造成反复感染可能也是原因之一。

鉴于新疆地区多民族的特殊情况，本文详细分析了两个民族HCV基因分型与地区、性别之间的关系，对了解新疆地区丙型肝炎感染者的HCV基因分型情况提供了重要资料，同时对于判断病情、预后提供资料。

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Hepatitis C virus genotyping of Han and Uygur patients in Xinjiang Uygur autonomous region*

ChenZhaoyun1,XieNa2,ZhangZhaoxia1,MengCunren1,GuTing1,ZhaoJianmei1,ZhangChen3△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang830054,China;2.CenterforDiseasesControlandPreventionofXinjiangXinjiangUrumqi,830011,China;3.theFifthAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang830011,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the genotyping characteristics of Han and Uygur patients with hepatitis C virus(HCV) in Urumqi and other area of Xinjiang,and provide information for diagnosis and treatment.MethodsTotally 380 samples of Han and Uygur patients virus load were detected by real-time PCR,with the load greater than 1×103 copies/mL,HCV genotyping was carried out by PCR-reverse dot blot hybridization.ResultsA total of 355 samples(93.4%) was genotyped successful.Type 1b of Han and Uygun were 59.91%,69.92%,type 2a were 30.17%,12.20%,type 3a were 5.60%,8.13% and type 3b were 3.88%,8.94%.In Urumqi and other areas,significant difference of patient distribution,male and female were found between Han and Uygur patients(all P<0.05),In Urumqi,type 2a had significant difference between Uygur and Han male patients,type 1b,3b had significant difference in female patients(P<0.05).In other areas except Urumqi,type 2a had significant difference between Uygur and Han man(P<0.05),other genotypes were not found difference(P>0.05).ConclusionHCV genotyping of Uygur and Han patients in Xinjiang is different with the majority areas in China,type 1b and 2a are the main infectious virus in Han,and type 1b is the main infectious virus in Uygur,followed by type 2a,3a,3b.

[Key words]Xinjiang;hepatitis C;genotype

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.005

基金项目：新疆医科大学第一附属医院自然青年科学基金(2013ZRQN52)。

作者简介：陈兆云(1979-)，主管技师，在读硕士，主要从事临床免疫学检验。△通讯作者，E-mail：zhangchendr@163.com。

[中图分类号]R512.63

[文献标识码]A

[文章编号]1671-8348(2016)01-0014-03

(收稿日期：2015-06-08修回日期：2015-09-20)