李天立郑 丽徐明波

（1.吉林省通榆县动物检疫站，吉林通榆 137200；2.吉林省通榆县新华镇畜牧兽医站，吉林通榆 137200）

猪丹毒的实验室诊断及防制

李天立1郑 丽2徐明波2

（1.吉林省通榆县动物检疫站，吉林通榆 137200；2.吉林省通榆县新华镇畜牧兽医站，吉林通榆 137200）

猪丹毒是由红斑丹毒丝菌感染引起的猪的一种急性热性传染病。该传染病广泛流行于全世界所有养猪国家，我国也存在。

猪丹毒；防制；诊断

1 病原特征

猪丹毒的病原体为红斑丹毒菌丝，习惯上又称为猪丹毒杆菌，是一种革兰氏染色阳性的纤细的小杆菌。本菌在固体培养基上培养24h，在45°折射光下用实体显微镜观察生长的菌落，有光滑型、粗糙型和介于两者之间的中间型之分。光滑型菌落表面光滑细致，菌落较小，边缘整齐，有微蓝色虹光；粗糙型，菌落较大，表面粗糙，边缘不整，呈土黄色。中间型菌落呈金黄色，毒力介于光滑型和粗糙型之间。

2 病理性特征

猪感染红斑丹毒菌丝的特征性病理变化为急性型的败血症全身变化，亚急性型的特征性疹块变化及慢性型关节炎、心内膜炎和皮肤坏死等。

3 病原学诊断

病原学检查是诊断猪丹毒较为可靠的方法，可用于病猪的生前和死后检查。

3.1 病料的采集及处理

无菌采取发病猪的耳静脉血和切开疹块挤压出的血液或渗出液，或者病死猪的心血、肝、脾、肾及淋巴结，慢性病例的心瓣膜增生部和关节液，作为病原检查的材料，可现地涂片或将病料于冰瓶中送到实验室做细菌学检查。

3.2 细菌学检查

涂片镜检：制成的涂片，用瑞特氏或革兰氏染色法染色，镜检。红斑丹毒丝菌是一种纤细的革兰氏阳性小杆菌，菌体平直或稍弯，陈旧的培养物可出现革兰氏染色阴性。在血涂片上，可见到散在于红细胞之间的菌体，有的出现丛集，还能见到被白细胞吞噬的现象。在脏器的抹片中，菌体常单独、成对或丛状排列。在瓣膜增生的纤维组织和关节液涂片中，见到的红斑丹毒丝菌呈长丝状，构成丝状菌团。本菌所表现的丝状形态与霉菌不同，不分枝。

3.3 细菌分离与鉴定

（1）培养检查：将上述病料接种于pH 7.6～7.8含有5%健康马血清的马丁肉汤培养液、马丁琼脂培养基或血液琼脂培养基，在37℃恒温箱中培养24～48h。红斑丹毒丝菌在液体培养基中生长，使培养液变混浊，在4℃冰箱中放置2～3d后，在管底部有乳白色沉淀，轻轻将试管振动，沉淀物似絮状悬浮于液体中，有丝绸光泽。在马丁琼脂培养基上，形成直径约为0.8～1.0mm的透明呈露滴状的小菌落，继续培养至4d以后，少数菌落发生变异，菌落边缘呈现不规则状。在血液琼脂培养基上，培养48h可形成直径约为1～2mm边缘整齐的菌落，稍带蓝色光泽，初代分离的菌落呈现轻度的α-溶血。（2）生化特性：将分离到的可疑菌落进行纯培养后，做进一步的生化特性等检查。明胶穿刺培养2～3d后，可沿穿刺线横向生长，看似试管刷状，不能液化明胶。接种含1%蛋白胨水和5%马血清的各种糖类培养基，培养48～96h后观察结果。可发酵葡萄糖、乳糖、半乳糖和果糖，产酸而不产气；木糖和蜜二糖可能产酸；一般不发酵蜜三糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、鼠李糖、山梨醇、甘露醇、肌醇、甘油、棉子糖、淀粉、菊糖、水杨苷等；能产生硫化氢，不产生靛基质，不分解尿素，石蕊牛乳不发生变化，MR和VP试验阴性，硝酸盐还原试验亦呈阴性。（3）动物试验：当细菌学检查做诊断有困难时，可做动物接种试验做出诊断。小鼠和鸽子对红斑丹毒丝菌最敏感，而豚鼠顿感。取血液、脾、肝、肾等脏器或病变组织，用生理盐水制成1：5或1：10的悬液，或用24h肉汤培养物做接种材料。分别以0.2ml经皮下接种小鼠、以1ml的剂量经胸肌接种鸽子，同时以1ml量皮下接种豚鼠作为对照。在接种后2～5d，如果被接种的小鼠和鸽子发生死亡，并从其心血和实质脏器中检出大量红斑丹毒丝菌，而同样接种的豚鼠则不死，也不反应，则证明被检材料为红斑丹毒丝菌感染，可做出确诊。

5 血清学诊断

用于猪丹毒诊断的血清学方法有多种，如平板、试管、微量凝集试验和生长凝集试验，间接血凝、血凝抑制试验、ELISA和免疫荧光试验，但现在还没有一种有效的血清学试验可用于急性猪丹毒和区别野毒感染和疫苗免疫猪的诊断。这里只就生长凝集试验和免疫荧光试验作一概略介绍。

（1）生长凝集试验 用生长培养物作为凝集原的试验，其具体作法是在培养猪丹毒液体培养基中按1：40～1：80加入猪丹毒高免血清，再加入卡那霉素400μg/ml及万古霉素25μg/ml（亦可用0.05%叠氮钠及0.005%结晶紫代替）作为猪丹毒血清诊断液。取病猪耳尖血1滴或病死猪肝、脾、心血少许，接种其中，37℃培养14～24h。当发现管底出现凝集颗粒或团块即为阳性反应。

（2）免疫荧光试验 用异硫氰酸荧光黄标记猪丹毒免疫球蛋白制成荧光抗本，可与病料涂片中的本菌发生特异性结合，在荧光显微镜下观察可见呈亮绿色的菌体。

6 防控措施

预防。疫苗接种：在高发区域及高发季节时，在肉猪断奶后接种猪丹毒弱毒冻干苗或灭活苗，间隔一个月再接种一次。加强饮水消毒和管理，防止病从口入，特别是使用自然水和浅表水的养殖户，以及喀斯特地貌的区域也要注意水源的消毒，包括冲栏用水。注意饲料的清洁和卫生，确保饲料无丹毒污染，平时尽量不用湿料。加强舍内卫生的清理，减少冲栏，做好防暑降温工作，避免出现高温高湿。加强猪舍周边杂草及杂物的清理以及消毒，做好灭蝇灭蚊工作，减少吸血昆虫的传播。注意病猪和病死猪的处理，防止传播病原。高危地区适当增加青霉素类药物的保健。提高警惕，平时仔细巡栏，及时发现及时处理。对猪场的种猪或养户中大猪突然出现发烧、减料等症状的，可直接肌注青霉素400万单位/头做治疗性诊断。

治疗。首选治疗药物为青霉素，药效快。如果发病猪为急性型，应采用短效青霉素大剂量注射，400～600万单位/头（即3～4支/头），每日注射两次，持续四天。如非急性发病，可采用注射长效青霉素，两天一次，连续三次，猪群可全群用1000～1200PPM阿莫西林饮水或拌料。四环素对本病也有一定的效果，500ppm的剂量拌料可用于预防保健。

［1］ 王晓虎，范秀波，袁宝.猪丹毒的诊断及防制［J］.吉林畜牧兽医，2006，27（11）：36-37.