陈永传，崔亚利，李艳，任飒爽

(1.北京善方医院检验科，北京 100027；2.北京丰台医院检验科，北京 100071)

不同稀释液对肌酸激酶及其MB型同工酶测定的影响

陈永传1，崔亚利2，李艳1，任飒爽1

(1.北京善方医院检验科，北京 100027；2.北京丰台医院检验科，北京 100071)

目的 了解不同的稀释液对肌酸激酶(CK)及其MB型同工酶(CK-MB)测定结果的影响。方法 收集2009年5月至2014年5月在北京丰台医院门诊及病房治疗的患者，采用生理盐水、去离子水、正常血清作为稀释液，按1：10的比例对568例CK及CK-MB大于各自正常参考范围的血清样本进行稀释，根据统计分析比较稀释前后样本CK及CK-MB测定值的差异。结果 568例稀释前原始血清样本CK、CK-MB范围分别在1 400～1 610 U/L、232～251 U/L之间，原始血清、生理盐水1:10稀释、去离子水1:10稀释、正常血清1:10稀释后结果分别为(1 522.3±60)U/L、(243.7±12)U/L；(1 568±55)U/L、(251±10)U/L；(1 543±51)U/L、(247±10)U/L；(1 798±63)U/L、(288±15)U/L。生理盐水、去离子水稀释的样本稀释前后结果比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，正常血清稀释的样本测定值与稀释前比较差异有统计学意义(P＜0.05)。样本经生理盐水、去离子水、正常血清稀释后的CK、CK-MB与稀释前原始血清相关系数r分别为0.991、0.990，0.982、0.993，0.975、0.980，均r＞0.97，呈显著相关。放置一定时间内的CK及CK-MB测定值比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 正常血清不适合作为高浓度CK、CK-MB的稀释液，而生理盐水和去离子水适合作为稀释液。

肌酸激酶；MB型同工酶；生理盐水；去离子水；正常血清

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)也被称为肌酸磷酸激酶(CPK)，主要存在于心肌、骨骼肌，其次在脑组织，另有极少量存在于肝脏、平滑肌和红细胞，主要起到催化肌酸与ATP高能磷酸键转移的作用，为肌肉收缩提供能量[1]。CK同工酶有三种：CK-MB为心肌型，CK-MM为骨骼肌型，CK-BB为脑型。临床上，CK及CK-MB测定是判断心肌损伤的重要指标。部分心肌损伤可造成血清中CK及CK-MB超过试剂盒检测的线性范围，必须经过稀释才能测出，而不同的稀释液对测定结果的影响差异较大。为了选择合适的稀释液，本文采用三种稀释液对线性范围内血清CK及CK-MB进行检测分析。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Olympus AU2700生化检测仪。试剂、校准品、质控品均为原装配套产品。仪器按说明书进行操作和维护保养，用原装校准品、质控液进行校准和质控，以保证实验结果准确。

1.2 样本收集 选取2009年5月至2014年5月在北京丰台医院门诊及病房治疗的患者，共568例，其中男性300例，女性268例。所有患者的CK、CK-MB原始血清测定值均大于各自正常参考范围(CK参考范围：≤171 U/L；CKMB参考范围：＜24 U/L)，同时所有病例CK、CK-MB原始血清测定值均落在各自线性范围(CK线性范围：10～2 000 U/L；CK-MB线性范围：线性范围：10～2 000 U/L)之内。血清样本-20℃以下保存备用，所有样本避免溶血和脂血。

1.3 检测方法 具体操作按试剂盒说明书进行。仪器处于良好状态，室内质控在控，严格按照仪器的操作步骤进行操作。收集的样本用生理盐水、去离子水、正常血清分别做1:10稀释，所有测试均连续测定3次取均值，将测定结果均值乘以稀释倍数，即为最终结果。

1.4 重现性评价 从收集的样本中随机取100份血清，分别用生理盐水、去离子水、正常血清做1:10稀释，每个样品每种稀释液各分装三个密闭管放置，在0 h、12 h、24 h分别取1份室温平衡30 min后进行测定，所有测试均连续测定3次取均值，将测定结果均值乘以稀释倍数，即为最终结果。

1.5 统计学方法 应用SPSS20统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，多组间两两均数比较采用SNK-q检验。检验标准为α=0.05。两组数据间采用Pearson分析，相关系数r＞0.97为高度相关。

2 结果

2.1 不同稀释液稀释前后测定的CK、CKMB结果 收集的样本用生理盐水、去离子水、正常血清分别按1：10稀释后测定表明，正常血清稀释的样品测定值与稀释前CK及CK-MB测定值比较差异有统计学意义(P＜0.05)，而生理盐水和去离子水稀释样品与稀释前测定值比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 不同稀释液稀释前后测定的CK、CK-MB值比较(U/L，±s)

表1 不同稀释液稀释前后测定的CK、CK-MB值比较(U/L，±s)

注：与稀释前原始血清比较，t=2.358，aP＜0.05；t=2.786，bP＜0.05。

样本 标本总例数CK CK-MB稀释前原始血清生理盐水1：10稀释去离子水1：10稀释正常血清1：10稀释568 568 568 568 1522.3±60 1568±55 1543±51 1798±63a243.7±12 251±10 247±10 288±15b

2.2 不同稀释液稀释后CK及CK-MB的相关性 生理盐水1:10稀释CK、CK-MB与稀释前原始血清相关系数r分别为0.991、0.990，去离子水1:10稀释CK、CK-MB与稀释前原始血清相关系数r分别为0.982、0.993，正常血清1:10稀释CK、CK-MB与稀释前原始血清相关系数r分别为0.975、0.980，均r＞0.97，呈显著相关。

2.3 不同稀释液稀释后CK及CK-MB测定值重现性评价 比较样本经生理盐水、去离子水、正常血清稀释后，放置一定时间内的CK及CK-MB测定值的重现性，结果表明样品经三种溶剂稀释后，在0 h、12 h、24 h测定值间差异无统计学意义(P＞0.05)，重现性较好，见表2。

表2 不同稀释液稀释后CK及CK-MB重现性评价(U/L，±s)

表2 不同稀释液稀释后CK及CK-MB重现性评价(U/L，±s)

注：与0 h比较，aP＞0.05，bP＞0.05；与12 h比较，cP＞0.05。

测定时间CK CK-MB正常血清369±12 372±12a368±5bc0 h 12 h 24 h生理盐水1198±23 1203±19a1201±17bc去离子水1210±20 1193±23a1207±26bc正常血清1260±17 1267±20a1253±19bc生理盐水343±7 346±6a340±9bc去离子水341±11 343±12a344±9bc

3 讨论

CK是细胞内重要的能量代谢酶,分布广泛，主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，CK有3种同工酶：CK-MM、CK-MB和CK-BB。生理情况下，CK及CK-MB水平受性别、年龄、地域、种族、运动状态等多种因素的影响。CK-MB主要存在于心肌细胞的外浆层,当炎症或梗死等原因引起心肌细胞受损或坏死时该酶大量释放入血，引起血清中CK和CK-MB增高，是临床诊断急性心肌梗死(AMI)常用的酶学指标。此外，肌肉损伤、脑损伤，或应用他汀类降脂药、核苷类抗病毒药，也可能会使CK及CK-MB升高，过劳、饮酒、肌肉注射也可能导致特发性CK及CK-MB持续升高[2]。因此临床上常常遇到CK及CK-MB升高接近甚至超过检测线性范围的情况，而此时如果不对样本进行稀释，所得结果不可靠，容易导致临床误判。因此，在临床工作中对超过检测线性范围的CK及CK-MB稀释研究显得尤为重要。

酶学生化测定是一系列的酶促反应过程，该过程中许多因素均可影响酶活性，如pH值、温度、抑制剂、激活剂和介质等[3]。其中介质因素的影响往往被忽视，特别是待测血清中酶活性超过了检测方法线性范围时，需要对标本进行稀释检测，选用的稀释液常常会影响检测结果的准确性[4]。

血清CK、CK-MB超过试剂盒的检测范围时需要适当稀释后才能测出结果，但由于人体血清中存在有一种内源性抑制物质，当对血清进行稀释后其中的抑制物质也被稀释，稀释后的标本测定结果较真值要高[5]本试验是在温度等条件一致的情况下，观察不同的稀释液对CK及CK-MB测定的影响。本试验中采用三种介质：生理盐水、去离子水及正常血清。对高值样本进行稀释后分析表明，经正常血清稀释的样本，CK及CK-MB值与稀释前差异有统计学意义(P＜0.05)，不能作为CK、CK-MB高值血清的稀释液使用。其原因是正常血清作为稀释液对高值血清CK、CK-MB进行稀释后，测定时也把正常血清的CK、CK-MB值带入了测定中，为减少误差，需要把带入的CK、CK-MB值从测定中扣除掉，这需要进一步的研究分析。而生理盐水及去离子水稀释的样本与稀释前差异无统计学意义。此外重现性和相关性分析均表明，三种溶剂稀释后所测定样本的CK及CK-MB值与稀释前相比重现性较好，并且存在显著的相关性，这些结果表明生理盐水和去离子水适合作为CK、CK-MB高值血清样本的稀释液。

目前，临床上常用的血清稀释液为：生理盐水、去离子水、正常人低值血清及缓冲液[6]。不同的测定项目、不同的方法及不同的仪器都会对标本稀释液相应的要求[7]。本研究表明，生理盐水、去离子水稀释后的样本与稀释前差异无统计学意义(P＞0.05)，适合做高值CK及CK-MB血清稀释介质。

[1]汪翼.肌酸激酶升高的临床意义与特发性高肌酸激酶血症[J].中国实用儿科杂志,2009,24(6):494-496.

[2]Kini AS,Lee P,Marmur JD,et al.Correlation of postpercutaneous coronary intervention kinase-MB and troponin I elevation in predicting midterm mortality[J].Am J Cardiol,2004,93(1):18-23.

[3]朱爱萍,吕秀英.不同稀释介质对15个生化项目测定的影响[J].国际检验医学杂志,2009,30(3):214-216.

[4]毕瑩,程阳.不同稀释液对高水平CK、CK-MB测定的影响[J].贵阳医学院学报,2010,35(5):509-510.

[5]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.长沙:东南大学出版社,2006:422.

[6]Panteghini M,Pagani F.AACC creatine kinase MB(CK-MB)standardization material used as manufacturer's working calibrator is unable to harmonize CK-MB results between two commercial immunoassays[J].Clin Chem,2004,50(9):1711-1712.

[7]徐友文,王乐见,陈琪,等.不同免疫分析系统测定血清心肌标志物的比对分析和偏倚评估[J].中国卫生检验杂志,2013,23(2): 403-405.

R446.6

B

1003—6350（2016）15—2569—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.15.058

2015-12-27)

崔亚利。E-mail：chenyc717@sohu.com