钟伟球

博罗中等专业学校 广东博罗 516100

液相色谱-质谱法测定酒中甜蜜素含量的研究

钟伟球

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甜蜜素是我国广泛使用的甜味剂，过多食用会对人体产生不良影响，因此需要严格控制甜蜜素的含量。本文研究测定酒中甜蜜素的含量，通过对液相色谱－质谱/质谱法这一标准进行反复研究，并进一步优化，结果表明，优化后的该方法测定甜蜜素的含量既简单易行，又大大减少假阳性，提高分子结果的准确性。

液相色谱-质谱法;甜蜜素；测定

一、引言

甜蜜素（Sodium Cyclamate）学名环己基氨基磺酸钠，是食品生产中常用的添加剂，其口感好、价格低廉，甜度是蔗糖的30～40倍，而价格仅为蔗糖的3倍，若经常食用甜蜜素含量超标的饮料或其他食品，就会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害。因此，许多国家禁止或限制使用甜蜜素，我国食品安全国家标准GB2760-2011中对甜蜜素的使用范围和最大使用量做了限制。除了在配制酒中可以使用甜蜜素，而且最大使用量为0.65g/ kg外，在蒸馏酒和发酵酒中均不得使用甜蜜素。为保障人们身体健康，研究能够准确、快速测定酒中甜蜜素的方法是十分必要和具有现实意义的。目前我国酒中甜蜜素含量的测定主要依据SN/ T1948-2007进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法∶液相色谱－质谱/质谱法，该方法中，两对离子对通过两种离子模式进行采集，相对较繁琐。本实验将对此方法进行优化，使得该方法测定酒中甜蜜素的含量更为简便、高效。

二、材料与方法

（一）材料与试剂

酒，监督抽检；乙酸、甲醇均为色谱纯；甜蜜素标准物质：纯度≥99.8%；试验用水为超纯水。

（二）仪器与设备

Agilent-1260高效液相色谱-4500QTRAP质谱仪，美国AB公司；S205DU分析天平。

（三）方法

1、对照品储备液。准确称取甜蜜素501.08mg，置50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，即得甜蜜素对照品储备液，浓度为10.00mg/mL。

2、对照品工作液。精密量取对照品储备液0.1ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀(浓度为100.0μg/ml)，精密量取该溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品工作液(浓度为1.000μg/ml)。

3、标准曲线。取5个10mL容量瓶，分别加入对照品工作液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，加水定容至刻度，摇匀，即得曲线L1、L2、L3、L4、L5，甜蜜素浓度分别为10.00、20.00、50.01、100.0、200.0ng/mL。

4、色谱条件。色谱柱∶AgilentSB-Aq4.6mm×100mm，2.7μm；流动相组成为∶A-0.1%乙酸水溶液，B-甲醇，流速∶0.7mL/min；柱温30℃；进样量∶5μL。等度洗脱，比例为50∶50。

表1 甜蜜素检测的质谱条件

5、质谱条件。离子源∶电喷雾离子源；检测方式∶MRM；气帘气流速∶35L/min；离子源温度∶550℃；碰撞气流速∶6L/min；喷雾电压∶-4500V；辅助气流速∶50L/min；其余质谱条件见表1。

6、供试品溶液制备。取10mL量瓶，精密加入供试品10mL，用水浴加热氮吹仪除去乙醇，冷却后，用水定容至刻度，摇匀，然后用0.22μm滤膜过滤，滤液待上机分析。

7、加标回收率实验。取10mL比色管，精密加入供试品10mL，并称其重量，共9份，在氮吹仪上吹至无乙醇味。于1-3份中精密加入对照工作液0.2mL,作为加样回收1，于4-9份中精密加入对照工作液1.0mL,作为加样回收2，用水定容至刻度，混匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液上机分析。

8、检出限溶液制备。取10mL量瓶，精密加入空白供试品10mL，用水浴加热氮吹仪除去乙醇，冷却后，加入0.1mL对照品工作液，并用水定容至刻度，摇匀，然后用0.22μm滤膜过滤，滤液待上机分析。

9、样品测定方法。将处理好的待测液放入自动进样器的样品盘上，进样器自动进样1μL，数据采集采用Analyst Software工作站进行采集处理，采用Quantitative Analysis软件进行数据处理，使用外标法进行数据分析，得出样品溶液中甜蜜素的质量浓度。再根据以下公式得出检测结果。

结果计算用公式(1)，回收率计算用公式(2)，检出限计算用公式(3)∶

W=C×V/M (1)

回收率(%)=测得浓度×稀释倍数×100/加标量 (2)

检出限(μg/kg)=进样浓度×稀释倍数×3/取样量/信噪比 (3)

式中，W为样品中甜蜜素的含量(μg/kg)；C为测得浓度/(ng/ mL)；V为稀释倍数；M为样品取样量(g)。

三、结果与分析

表1 甜蜜素标准曲线图

（一）质谱与色谱条件的选择

将含有1μg/mL的甜蜜素标准溶液分别在正离子和负离子模式下进行全扫描，找到最佳的电离模式。结果表明在正负离子模式下，各有两对离子响应相对较强，不过正离子模式下，基线响应较高，综合离子对响应及离子对之间的丰度比等因素，选择负离子模式作为扫描模式，选择[M-Na]作为母离子，进行碰撞能量的优化。以178/79.8离子对作为定量离子，178/96离子对作为定性离子。质谱条件见表1。

（二）线性关系

把标准品曲线注入液相质谱联用仪，以峰面积为(Y)轴，相对质量浓度为(X)轴建立标准曲线，并求出回归方程，结果见图1。结果显示

，该方法的线性范围为∶10ng/mL～200ng/mL，标准曲线线性良好，其回归方程及相关系数R分别为∶Y=87602X+62876，R=0.9999。

（三）回收率及精密度结果

图2 负离子模式下甜蜜素质谱图及信噪比

表2 回收率及精密度结果

回收率实验结果表明，低浓度回收率为103，RD值为3.8%，高浓度回收率为99.1%，RD值为2.1%。结果见表2。从表中结果可看出，改方法对酒中甜蜜素的检测回收率较高，精密度好，能满足酒中甜蜜素的测定。

（四）样品检测结果

按照(1.3.6)对样品进行前处理，然后进样分析，外标法进行定量，并通过定性定量离子风度比对结果进行判定，结果见表3。

表3 酒中甜蜜素的测定结果

（五）方法检出限

在本实验条件下，在空白样品中添加标准溶液进行测定，以质谱仪3倍信噪比计算目标物组分的检出限为4.2μg/kg。结果见图2及表4。

表4 酒中甜蜜素检出限结果

四、结论

综上所述，在食品安全形势严峻的大局下，把好食品安全检测关非常重要，为了做好酒中甜蜜素的测定工作，通过优化检测手段，研究快速、高效和灵敏度高的检测方法，将成为甜蜜素检测的发展方向。本文主要针对SN/T1948-2007进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法中的测定方法进行了研究，把其中的正负离子模式各对一组离子对进行扫描，优化成只通过负离子模式对两组离子对进行扫描，并通过丰度比对结果进行判定。结果表明，该方法在测定酒中甜蜜素时，准确度高，回收率高，检出限低，而且该方法便于操作、重现性良好，大大减少假阳性，提高了结果的准确性。

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[2]石敏,吕世玲,李彩霞．利用气相色谱仪进行白酒中甜蜜素的检测方法的研究[J]．酿酒,2016．43(3):77-79．

[3]张卫军,毛周平．高效液相色谱法对白酒中甜蜜素含量的测定[J]．酿酒,2016(05)．