卢晓宇,李军朝,许梦怡,王雅丽,沈安宁,徐司雨,王彦红,3

(1.扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;3.江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009)

1株猫葡萄球菌的分离与初步鉴定

卢晓宇1,2,李军朝1,2,许梦怡1,2,王雅丽1,2,沈安宁1,2,徐司雨1,2,王彦红1,2,3

(1.扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;3.江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009)

葡萄球菌是医学和兽医临床上常见的病原菌,为革兰阳性菌,广泛分布于自然界,如水、空气、土壤、饲料和一些物品中,绝大多数为人体表常在菌,少数菌对人和动物有一定的致病性,是一种重要的人畜共患病原菌,痰、血、分泌物和伤口等是致病性葡萄球菌的主要标本来源[1],近日在猫鼻腔中发现1种猫葡萄球菌,国内文献罕见报道,将其生物学特性进行的试验,报告如下.

1　材料与方法

1.1细菌分离一只两月龄暹罗猫出现咳嗽、食欲不振,治疗一周后症状减轻,但鼻腔中持续出现黏性分泌物.用无菌棉签拭子取猫鼻腔中的分泌物接种于含5%绵羊血营养琼脂平板.将该血平板放置在37℃恒温培养箱中培养24 h,观察菌落形态特征.挑取单个菌落分别接种于血平板上和普通营养琼脂平板进行纯化.取纯化好的分离菌,挑取菌落,涂片固定,进行常规革兰染色,观察细菌的形态及染色特征.

1.2生化试验将纯化的菌株无菌接种于蔗糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、果糖、木糖醇、麦芽糖、硝酸盐还原、尿素、蕈糖共10种葡萄球菌细菌生化管(购自杭州天和微生物试剂有限公司),置于37℃培养24～48 h.

1.316SrDNA基因序列根据文献方法[2]制备细菌基因组DNA模板,按照16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit方法操作进行PCR扩增,经电泳鉴定后,切胶测序;将测定的序列在NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.gov/BLAST)进行BLAST搜索比对,鉴定细菌种属.

1.4药敏试验采用世界卫生组织(WHO)推荐的Kirby-Bauer法进行药敏试验[4],判定标准参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS,2009)公布的标准.药敏纸片(购自杭州天和微生物试剂有限公司)有:痢特灵(300μg/片)、复方新诺明(23.75 μg/片)、丁胺卡那霉素(30 μg/片)、美洛西林(75 μg/片)、链霉素(10 μg/片)、庆大霉素(10 μg/片)、菌必治(30 μg/片)、诺氟沙星(10 μg/片)、大观霉素(100 μg/片)、新生霉素(30 μg/片)、万古霉素(30 μg/片)、氟苯尼考(30 μg/片)等14种.

2　结果

2.1细菌分离在无菌操作下从病料中分离出细菌接种于血平板,在37℃培养24 h后,菌落直径能达到2～3 mm,菌落圆形凸起,光滑不透明且不溶血.细菌在普通培养基上生长良好.镜检可见细菌排列呈葡萄串状,革兰染色阳性.

2.2生化试验分离菌株能与尿素反应,不能还原硝酸盐,也不能分解麦芽糖、乳糖、甘露糖、甘露醇、果糖、蔗糖、蕈糖.

2.361SrDNA基因序列分离菌的16S rDNA经PCR扩增,电泳后出现500 bp左右的目的条带,切胶测序后,经查询比对与已上传的猫葡萄球(序列号:D83365.1)99%同源性,认为分离菌为猫葡萄球菌.

2.4药敏试验药敏试验结果显示,分离菌株对氟苯尼考和复方新诺明耐药;对链霉素、罗美沙星、淋必治、菌必治、万古霉素、新生霉素等敏感.

3　讨论

3.1从送检病猫鼻腔黏液分离出1株细菌,从细菌的生长特性和形态特点初步判定其为葡萄球菌,然而分离菌株的生化结果无法定型,借助16S rDNA PCR技术,将分离菌PCR结果上传到NCBI网站(http:// www.ncbi.nlm.gov/)的数据库进行查询结果为猫葡萄球菌.该菌在1989年首次报道[3],该菌是一种微厌氧的革兰阳性球菌,在37℃培养24 h后,菌落直径能达到2～3 mm,菌落圆形凸起,光滑不透明且不溶血.猫是现代社会人们的宠物,国外报道由猫咬伤后引起的各种感染较多[3],另外,2012年在马的鼻腔中也发现了猫葡萄球菌的存在[4],所以对猫葡萄球菌的相关研究不仅对猫、马等动物有重要的临床意义,对人类同样有很重要的临床意义.

3.2由药敏试验结果可知,分离菌株对罗美沙星、链霉素、万古霉素、丁胺卡那霉素、新生霉素等药物敏感;相关研究表明,猫葡萄球菌对很多药物都敏感[4-5].

[1]Muniz I M,Penna B,Lilenbaum W.Treating Animal Bites:Sus⁃ceptibility of Staphylococci from Oral Mucosa of Cats[J].Zoonoses and Public Health,2013,60:504-509.

[2]王彦红,刘文博,邵慧君,等.PCR方法诊断猪瘟病毒和猪丹毒杆菌混合感染[J].动物医学进展,2011,09:113-116.

[3]Igimi S,Kawamura S,Takahashi E,et al.Staphylococcus felis,a new species from clinical specimens from cats[J].International Journal of Systematic Bacteriology,1989,39:373-377.

[4]Karakulska K,Fijakowski P,Nawrotek A,et al.Czernomysy-Fu⁃rowicz.Identification and methicillin resistance of coagulase-nega⁃tive staphylococci isolated from nasal cavity of healthy horses[J]. Journal of Medical Microbiology,2012,50:444-451.

[5]Hariharan H,Matthew V,Fountain J,et al.Aerobic bacteria from mucous membranes,ear canals,and skin wounds of feral cats in Grenada,and the antimicrobial drug susceptibility of major iso⁃lates[J].Comparative Immunology Microbiology and Infectious Dis⁃eases,2011,34:129-134.

S829.3

B

0529-6005(2016)06-0081-01

2015-04-16

江苏高校优势学科建设工程资助项目;江苏省人兽共患病学重点实验室资助项目(R1406);扬州大学大学生创新创业训练计划基金

卢晓宇(1995-),女,本科生,就读于兽医专业学习,E-mail:1055874278@qq.com

王彦红,E-mail:wyh7405@163.com