韩　锋　李庆文　冯振中　邓　娟

(蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科，安徽　蚌埠　233000)



前哨淋巴结连续切片及免疫组化检查在阴茎癌治疗中的价值

韩锋李庆文冯振中1邓娟2

(蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科，安徽蚌埠233000)

摘要〔〕目的探讨前哨淋巴结(SLN)连续切片及免疫组化检查在阴茎癌治疗中的价值。方法回顾性分析阴茎癌41例患者临床资料与病理资料，患者切除原发病灶后使用亚甲蓝蓝染，并行改良腹股沟淋巴清扫术(ILND)。结果SLN检出39例(95.12%)，检出SLN共有62枚，免疫组化检查结果显示，其中SLN阳性12例，阴性27例，SLN结果与ILND病理检查结果相符合者12例，1例假阴性，SLN免疫组化准确率为97.44%(38/39)，假阴性率为7.69%(1/13)，灵敏度为92.31%(12/13)，两种检查方式差异无统计学意义(P>0.05)。结论SLN活检技术(SLNB)相对于预防性的淋巴结清扫术而言，具有创伤小、并发症低的优点，故对于阴茎癌手术患者治疗方案的确定具有重要临床应用价值。

关键词〔〕前哨淋巴结；免疫组化；阴茎癌

1病理科2手术室

第一作者：韩锋(1975-),男,硕士,主治医师，主要从事泌尿系统疾病研究。

前哨淋巴结(SLN)最早于1977年Cabanas提出，这组淋巴结是阴茎癌患者最早发生转移的淋巴结〔1〕。目前认为SLN是最先接受肿瘤引流的第一站区域淋巴结，同时它也最先反映肿瘤转移情况，因而SLN是进行组织病理学检查中最具有价值的一组淋巴结〔2〕。目前，关于SLN连续切片及免疫组化检查在阴茎癌治疗中的价值研究报道鲜见，而患者于术前、术后对于淋巴结转移状态的准确评估，对于手术淋巴结清扫方案的制定有着重要的价值，从而能够解决一直以来所争论的淋巴结清扫范围问题。本研究探讨SLN连续切片及免疫组化检查在阴茎癌治疗中的价值。

1资料与方法

1.1一般资料2005年4月至2013年4月我院泌尿科住院的阴茎癌患者41例，年龄52～85岁，平均(64.52±12.42)岁；肿瘤直径0.5～3.4 cm，均为鳞状上皮癌，其中低分化鳞癌2例，中分化鳞癌16例，高分化鳞癌23例。实际检出SLN 39例，其临床分期为T3期17例，T2期15例，T1期7例。其中4例接受了阴茎部分切除术，其余均行阴茎全切除术及会阴部造口术，术后随访6个月至7年。

1.2主要仪器与设备徕卡切片机RM2135(德国LEICA产品)、病理组织漂烘处理仪PHY-Ⅲ(常州中威电子仪器厂)、电热恒温培养箱WMK-L8(山东潍坊医药集团医疗器械厂)、低温冰箱BCD-206(三菱重工)、双目光学显微镜、彩色病理图像分析系统(日本OLYMPUS公司)。

1.3手术及SLN穿刺定位、活检方法患者取平卧位，待麻醉满意后，常规消毒铺巾，使用亚甲基蓝为染料，抽取亚甲基蓝10 ml，于瘤体周边0.5～1 cm处，于12、3、6、9点4个方位顺时针将染料注射于皮下及肿瘤深部组织当中，每点注射量为2～25 ml，注射范围皮肤使用手掌轻轻揉按10 min，以利于染料的充分扩散；之后再行阴茎全切除术或阴茎部分切除术，并进行阴部造口术，30～60 min后取SLN(SLN根据术中蓝染的淋巴管解剖走向进行找寻，即距离瘤体中心位置最近的第一个蓝染淋巴结)，送病理检查。后行改良腹股沟淋巴结清扫术(ILND)，术后将腹股沟淋巴结做病理切片检查。

1.4免疫组织化学染色法①标本处理：将所有标本使用10%甲醛溶液固定，常规脱水后使用石蜡包埋，4 μm连续切片，其中一张行HE染色，其余均行免疫组化染色。②载玻片处理：将载玻片放置于重铬酸钾溶液中浸泡24 h后使用流水冲洗2 h，蒸馏水冲洗3次、无水乙醇冲洗1次后放置于37℃烘箱中烘干，然后将其浸泡于1:10多聚L-赖氨酸液中大约20 s后取出沥干，置于37℃烘箱中备用。③将石蜡切片使用二甲苯、梯度酒精洗脱后清水冲洗3遍、蒸馏水冲洗2遍。④封闭：将脱蜡之后的切片放置于3%H2O2溶液中浸泡10 min(切勿超过15 min)，以阻断内源性的过氧化氢酶，然后用蒸馏水冲洗2遍。⑤抗原修复：将切片放入煮沸的pH6.0柠檬酸盐缓冲液中进行抗原修复2 min，该目的是为了使抗原位点暴露。⑥待切片自然冷却后，使用磷酸缓冲液(PBS)冲洗2遍，去除PBS，滴加一抗50 μl(阴性对照使用PBS代替一抗)，然后放置于37℃恒温孵箱中孵育1.5 h。⑦将切片取出后使用PBS冲洗5 min，去除PBS后加聚合物增强剂，然后置于37℃孵箱中继续孵育30 min。⑧取出切片，使用PBS冲洗5 min，去除PBS后滴加二抗，然后再置于孵箱中孵育30 min。⑨取出切片，PBS冲洗5 min，滴加新鲜配制的二氨基联苯胺(DAB)溶液，显色3～5 min，在显微镜下进行观察，胞膜或胞质内出现有棕黄色的颗粒则为阳性细胞，使用自来水冲洗以终止显色。⑩将显色后的切片使用清水冲洗之后，浸泡于苏木精中进行染色，然后将其放于1%盐酸当中分化，自来水冲洗3遍后放于温水中返蓝。将复染的切片放置于水中冲洗后，使用梯度酒精冲洗后再浸泡于二甲苯中，最后用中性树胶封片后置于通风柜中晾干。

1.5SLN评价标准参照Louisille大学对于SLN活检技术(SLNB)的评价标准，从检出率、灵敏度、准确率及假阴性率几个方面进行评价〔3〕，计算方法为：①检出率=SLN检出的例数÷实施SLN检测的总例数×100%；②灵敏度=SLN阳性例数÷清扫淋巴结阳性例数×100%；③准确率=(SLN真阳性例数+SLN真阴性例数)÷SLN活检总例数×100%；④假阴性率=SLN假阴性例数÷清扫去淋巴结阳性例数×100%。

1.6统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件进行Kappa检验。

2结果

SLN检出率为95.12%(39/41)，检出SLN共有62枚，其中1枚21例，2枚13例、3枚5例。SLN阳性12例，阴性27例，棕色代表阳性肿瘤细胞，见图1。2例未检出SLN患者术后证实均无腹股沟淋巴结转移。SLN结果与ILND病理检查结果相符合者12例，1例假阴性。SLN免疫组化准确率为97.44%(38/39)，假阴性率为7.69%(1/13)，灵敏度为92.31%(12/13)。

图1　SLN免疫组化结果

3讨论

阴茎癌是一种较为罕见的恶性肿瘤，目前其治疗仍然以手术治疗为主。阴茎癌发生转移的主要途径是通过淋巴系统，其主要区域淋巴结是髂血管淋巴结及腹股沟淋巴结，机体区域淋巴结是否累及及累及的程度是影响患者手术预后的决定性因素〔3～5〕。对于阴茎癌患者的淋巴清扫术，大部分学者持有怀疑态度，认为对于淋巴清扫术的实施可能导致某些早期患者过度治疗，从而带来一定的风险，但是目前也有文献报道表示患者于早期实施淋巴结清扫术有助于预后的改善，从而提高无病生存率〔6〕。

SLN是阴茎肿瘤通过淋巴系统转移必须经过的第一站，具有阻止肿瘤细胞从淋巴道进行扩散的功能，其功能类似于“哨兵”，其理论基础为恶性肿瘤细胞的阶梯式扩散〔7～10〕。SLNB是一门新兴的检测技术，目前其正逐渐成为许多实体肿瘤局部淋巴结分期标准及治疗标准〔11〕。研究报道显示〔12〕，放射性示踪剂及染料的联合运用能够显著提高患者SLN的敏感性，从而有助于其检出率的提高，但是该方法所需设备昂贵，在临床工作中不利于推广运用。染料标记方法，具有廉价、操作简单、无辐射等优点，无须特殊设备。

假阴性率对于SLNB的推广具有决定性作用，在国外文献报道中SLNB的假阴性率在5%左右〔13,14〕。导致本研究假阴性率略高的原因可能与患者转移灶体积小、位置深有关系，由于转移灶的位置特性，到时染料未能够扩散到此，从而导致检查中显色较差，因此在未来的临床工作当中，提示应进一步注意染料的注射深度及染料的使用剂量，从而提高染料的显色性。SLN免疫组化方法与常规病理结果相比较，两种检测方法相似，而SLNB相对于预防性的淋巴结清扫术而言，其具有对患者创伤小、检查并发症低等优点，因此对于阴茎癌手术患者，可以考虑将SLNB作为首选检测方案，根据检测的结果，阳性患者可择期行二期ILND，对于检验结果阴性的患者则可密切观察随访，以避免假阴性结果的出现，这样既能够减少过度的淋巴结清扫术的风险，同时又可以避免延误治疗。

参考文献4

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12陆晓娜.乳腺癌前哨淋巴结活检研究进展〔J〕.中国医学创新,2011;8(16):181-4.

13Yi M,Giordano SH,Meric-Bernstam F,etal.Trends in and outcomes from sentinel lymph node biopsy(SLNB)alone vs.SLNB with axillary lymph node dissection for node-positive breast cancer patients:experience from the SEER database〔J〕.Ann Surg Oncol,2010;17(3):343-51.

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〔2014-09-27修回〕

(编辑苑云杰)

中图分类号〔〕R737.2〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)24-7025-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.026