抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体提取方法探究

2015-12-14张桂荣王振辉刘玉梅刘

兽医导刊 2015年18期

关键词：辛酸脱脂效价

张桂荣王振辉刘玉梅刘军

(1.吉林农业科技学院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松树镇畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正业生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体提取方法探究

张桂荣1王振辉1刘玉梅2刘军3

(1.吉林农业科技学院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松树镇畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正业生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

为了探究抗鸭病毒性肝炎卵黄抗体的最佳提取方法。采用泊洛沙姆法卵黄抗体的脱脂方法试验。通过对浓度、蛋白质含量、效价等结果进行比较。试验结果显示:由泊洛沙姆作为脂肪沉淀剂,其泊洛沙姆浓度为1.2%、辛酸浓度为0.2%时制得的抗体物理性状好,抗体收率最高,效价高,抗体效价为1:64。

雏鸭病毒性肝炎;卵黄抗体;脱脂

1 方法

1.1 免疫鸡蛋收集与蛋黄的分离

取收集的鸡蛋，浸入42℃的0. 1%新洁尔灭水溶液中消毒15 min；随后将鸡蛋浸入温度为95℃以上的水中消毒5 s，取出后于无菌条件下晾干或吹干；打蛋分离蛋清与卵黄，充分除去蛋清和卵黄系膜，将卵黄收集于一容器中，搅拌均匀，然后分别装在三个容器内。

1.2 泊洛沙姆法雏鸭病毒性肝炎卵黄抗体去脂试验[1]

泊洛沙姆法提卵黄抗体步骤

1.2.1 泊洛沙姆浓度的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度分别为0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%。静置后用纱布过滤，取上清。

1.2.2 pH值的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度为上步所得的最佳浓度。用稀盐酸调pH值，使pH值分别为5.2、5.7、6.2、6.7、7.2、7.7。静置后用纱布过滤，取上清。

1.2.3 辛酸浓度的优化

分别取卵黄液20ml，用去离子水做4倍稀释，加入泊洛沙姆，使其终浓度为上步所得的最佳浓度和pH。静置后用纱布过滤，取上清，加入不同浓度辛酸，静置48h。此后去除上层脂肪层，将粗提的抗体液用微孔滤器过滤至澄清。

1.3 脱脂抗体的效价测定[2]

采用琼脂扩散试验测定抗体效价。将1%琼脂溶于100ml的8%NaCl溶液的适量稀释后的抗体与等量琼脂混匀加入约0.01%的硫氯汞钠盐作为防腐剂，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔径3mm，孔间距10mm，孔中加入抗原，每孔10μl，放置湿盒中，37℃温箱，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。24～48h后观察结果。

1.4 蛋白质浓度的测定

将制得的抗体液用饱和硫酸铵法沉淀蛋白后，各组试验样品以同样的稀释倍数稀释，用ND-1000型紫外分光光度计测定卵黄抗体的蛋白含量。