梁少兰，杜作义，李自成，靳 文

(广东省第二人民医院 心血管内二科，广东 广州 510371)



阿司匹林抑制冠心病患者外周血单核细胞脂肪酸合酶表达

梁少兰*，杜作义，李自成，靳 文

(广东省第二人民医院 心血管内二科，广东 广州 510371)

脂肪酸合酶(fatty acid synthase，FASN)是催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A合成内源性长链脂肪酸的关键酶[1]，单核巨噬细胞通过表面的CD36受体摄取氧化型低密度脂蛋白，在FASN的作用下形成泡沫细胞，干扰FASN基因可以显著减少泡沫细胞的生成。本研究探讨了阿司匹林对单核细胞脂肪酸合酶的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床病例资料:收集2013年3月至2014年5月本院诊治的冠心病患者46例，其中男23例，女23例，年龄56～82岁，平均(68.4±11.2)岁。排除各种急、慢性炎性反应和服用维生素E等抗感染及抗氧化作用的药物者。另取本院同期健康体检者40例作为正常对照组，其中男20例，女20例，年龄54～80岁，平均(68.1±9.7)岁。本研究符合广东省第二人民医院伦理委员会的各项规定, 受试者签署知情同意书。

1.1.2 实验试剂:Percoll单核细胞分离液(天津灏洋生物制品科技有限责任公司)；荧光定量PCR检测试剂盒(大连宝生物科技有限公司)；PCR引物(上海生工生物科技技术有限公司)；FASN、白介素- 6(IL- 6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测试剂盒(北京四正柏生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 单核细胞的分离及处理:取受试者10 mL静脉血加入到10 mL单个核细胞分离液中，1 500×g离心20 min，吸取中间单核细胞层，将单核细胞培养于5% CO2，3 7℃条件下。实验分为：阴性对照、1、2和4 μmol/L阿司匹林司4组(每组46例)，每组调整上述收集的单核细胞浓度为106个细胞/mL，加入不同浓度的阿司匹林作用细胞12 h，检测相关指标的变化，每个实验重复3次。

1.2.2 荧光定量PCR检测FASN基因的表达:调整上述四组(每组46例)收集的单核细胞密度为106个细胞/mL，按试剂盒说明书扩增FASN基因，引物序列为5′-TGCGGTTATG GCAATTGCGAAGC-3′(sence)和5′-CTTCAAATTCGGATATG CTGGAAT-3′(antisence)，GAPDH基因作为内对照，FASN基因的表达量使用2-△△Ct评估。每个实验重复3次。

1.2.3 FASN、IL- 6和TNF-α水平的测定:取单核细胞分离时的血浆400 μL，-70 ℃冰箱冻存待测。收集阴性对照、1、2和4 μmol/L阿司匹林4组(每组46例)处理单核细胞12 h后的培养液上清，使用试剂盒ELISA法检测FASN、IL- 6和TNF-α表达水平。每个实验重复3次。

1.3 统计学分析:使用SPSS16.0进行统计分析，两样本均数比较采用t检验，多组比较使用方差分析，连续性的变量之间的相关性使用pearson 相关分析。

2 结果

2.1 健康对照和冠心病患者单核细胞FASN表达及其与IL- 6和TNF-α表达水平的相关性分析:冠心病组FASNmRNA和蛋白表达量以及IL- 6和TNF-α表达水平均显著高于健康对照组(P<0.01)。相关分析显示冠心病组FASN表达与患者血浆中IL- 6和TNF-α水平呈显著正相关(P<0.05)(表1)。

2.2 阿司匹林对单核细胞FASN表达的影响:4组之间FASNmRNA和蛋白表达量以及IL- 6、TNF-α水平均显著性差异(P<0.05)(表2)。

表1 冠心病患者和对照组单核细胞FASN表达的比较Table 1 Comparision of FASN Expression between CHD and control group(±s)

*P<0.01 compared with control.

表2 阿司匹林对单核细胞FASN表达的影响Table 2 Effects of aspirin on FASN expression(±s, n=46)

*P<0.05;#P<0.01 compared with control；▲P<0.05，▲▲P<0.01 compared with 1 μmol/L aspirin；△P<0.05 compared with 2 μmol/L aspirin.

3 讨论

脂肪酸合酶(FASN)可以促进单核巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取，抑制胆固醇流出单核巨噬细胞，借此参与到粥样斑块的形成过程中[2]。本研究的观察显示了冠心病组单核细胞的FASN基因的表达量显著高于健康对照组，说明了冠心病患者单核细胞FASN处于高表达状态。研究发现阿司匹林在动脉粥样硬化发生、发展的各个环节都有干预作用[3]，本研究的结果显示阿司匹林可以显著减低FASN的表达，同时IL- 6和TNF-α表达水平也相应减低。说明了以FASN为靶向的治疗可以起到干预冠心病进展的作用。

本研究为阿司匹林对冠心病的治疗提供了一种可能的作用机制。但其具体的作用机制和临床疗效还有待进一步研究。

[1] 陈惠, 蒋合众, 魏国清, 等. 脂肪酸合酶抑制剂的减肥作用研究进展[J]. 中华中医药学刊, 2014, 32:1026- 1028.

[2] 卢环宇, 韦梦影, 张更, 等. 脂肪酸合酶与脂肪酸代谢及细胞因子的关系[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28:1226- 1228.

[3] Gukop P, Gutman N, Bilkhu R,etal. Who might benefit from early aspirin after coronary artery surgery? [J] Interact Cardiovasc Thorac Surg, 2014, 19:505- 511.

2015- 03- 27

2015- 06- 30

1001-6325(2015)11-1544-02

R541.4

A

*通信作者(corresponding author)：shallen_liang@sohu.com