沈江涛 陈黎

微柱凝胶法测ABO血型正反定型不符原因分析

沈江涛 陈黎

目的 探讨微柱凝胶法测ABO血型正反定型不符原因及处理措施。方法 通过对住院与门诊患者3000例进行ABO血型血清学检测，发生正反定型不符标本18例患者的临床资料进行回顾性分析。结果 正反定型不符标本18例，其中自身因素占27.78%，治疗因素所占比例为22.22%，疾病因素占44.44%。结论 微柱凝胶法为血型检测的重要方法，盐水凝集试管法为传统的血型检测方法，两种方法联合使用可提高疑难血型鉴别的准确性。

微柱凝胶法；ABO血型；正反定型不符；分析

ABO血型同临床输血密不可分，准确鉴定血型是保证输血安全的关键，选择一种准确度高、灵敏度高和操作简便的方法检测血型具有重要的临床意义。微柱凝胶法为传统血型血清基础发展的免疫学检测技术，通过特异免疫反应、分子筛技术及离心技术，将血型同血清与微柱凝胶有机结合，可检测出微弱血型抗原抗体，但某些特殊情况可出现正反定型不一致情况[1]。应用微柱凝胶法在ABO血型鉴定过程中，会出现抗原减弱、个体疾病、ABO亚型等影响，引发血型正反定型不符情况，若血型定型失误，可能引发溶血性输血反应，严重甚至威胁患者生命安全[2]。本文通过对住院与门诊患者3000例标本进行ABO血型血清学检测，讨论微柱凝胶法测ABO血型正反定型不符原因及应对措施，现分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 泰州市第二人民医院2013年1月～2014年10月住院与门诊患者3000例标本进行ABO血型血清学检测，发现正反定型不符标本18例，男11例，女7例，年龄1～73岁，平均年龄（36.74±4.65）岁。

1.2 试剂与仪器 抗A、抗B标准血清(上海血液生物医药有限公司)；反定型红细胞，抗A 1、A 1红细胞，A 2红细胞，谱细胞(上海血液生物医药有限公司)；ABO、RhD血型定型检测卡(长春博讯生物技术有限公司)；抗人球蛋白检测卡(长春博讯生物技术有限公司)。孵育器和专用离心机为长春博研科学仪器有限责任公司产品。

1.3 方法 配血试验、抗体鉴定和正反定型参照临床检验操作规程，血型检测标准方法：应用微柱凝胶法进行正反定型鉴定，若正常可发血型报告，若出现正反定型不符、凝集减弱情况时，应用10%红细胞悬液、增加受检者血清和血浆进行盐水凝集试管法，结合显微镜观察结果，若不能得出结论，应将标本、试剂混合置于37℃水浴箱中孵育30 min，离心观察。通过生理盐水洗涤标本3次后排除自身抗体影响。疑难血型鉴定后，同型献血人员标本应采用交叉配血试验，若无主次侧无溶血及凝集，可发血型报告。

2 结果

应用微柱凝胶法检测，出现ABO正反定型不一致结果共18例。见表1。

3 讨论

ABO血型正反定型不符原因包括技术、管理问题，主要包括:标本，试剂错误，试剂污染，器材不清洁，离心不足或离心过量，漏加试剂，阳性反应出现溶血现象，结果记录错误，标本红细胞血清本身问题，发生ABO血型正反定型不符，不可按照ABO血型正定型或者反定型确定血型结果，可导致ABO血型判断错误，应通过复查，检查ABO血型正反定型不一致原因，保证ABO血型定型准确[3]。红细胞A、红细胞B抗原弱化为ABO血型正反定型不一致的常见因素，抗原弱化可以为遗传因素引发的弱表现型，同时可也以是获得性，例如白血病患者N-乙酰半乳糖转移酶或半乳糖酶受抑制可引发红细胞A抗原、红细胞B抗原发生弱化，通过结合临床和血清学特点，准确判定引发抗原弱化因素，正定型中升高1倍以上悬浮红细胞，同时可通过吸收放散试验的方式进行检测[4]。

表1 18例ABO血型正反定型不符原因[n(%)]

ABO血型正反不符因素包括很多方面：（1）自身因素：①亚型：因红细胞ABO抗原位点少，细胞正定型出现干扰引发定型困难，可选择受检者唾液检测；②冷凝集素：自身冷抗体是影响ABO血型正反定型不符的常见原因。冷凝集素属于IgM抗体，其多存在于自身及供者红细胞中，发生全凝集情况。（2）治疗因素：①造血干细胞移植：造血干细胞移植导致正反定型不符是因ABO异基因造血干细胞移植，鉴定发生混合凝集，临床应进行追踪；②消化道大出血：治疗消化道大出血过程中应用甘露醇、羟乙基淀粉等血浆扩容基，导致红细胞出现为串钱状，影响结果。（3）疾病因素：①肠道G菌：肠道G菌感染可引起获得性B抗原，应用吸收试验检测检测抗B，并进行临床追踪；②急性白血病：急性白血病患者对半乳糖转移酶产生影响，使A抗原和B抗原弱化，在检测过程中可增加红细胞数量；③自身免疫溶血性贫血：发生自身免疫溶血性贫血，通过抗人球蛋白试验，自身抗体试验为阳性，间抗试验阳性；④多发性骨髓瘤：多发性骨髓瘤易引发非特异性凝集，影响判定结果。（4）人为因素：采错患者血样导致标本混淆或标本离心不充分等。

微柱凝胶免疫检测是指通过微柱腔凝胶介质将红细胞抗原抗体发生凝聚反应，应用分子筛技术、特异性免疫技术、离心技术原理，将血型血清和凝胶分子筛技术结合，其具有操作简便、准确度高、灵敏度高等特点，在临床得到较为广泛的应用。微柱凝胶法具有较多优点，但其本质是由于克隆抗体同红细胞凝集进行检测，抗原和抗体强弱变化、血液异常血清蛋白、自身冷抗体、新生儿未形成抗体、异基因造血干细胞移植均可对微柱凝胶法的测定血型结果产生影响，导致正反定型不一致，最终导致血型判定结果[5]。微柱凝胶卡若保存不当，可导致管内液体降低，患者血清抗体和红细胞抗原均显著下降，抗原和抗体搭桥不及时，引发假阳性。盐水凝集试管可调节血清、血浆使用量和红细胞浓度，此方法有效弥补微柱凝胶法的缺陷[6]。微柱凝胶法经初次检测发生正反定型不一致情况，通过提高受检者红细胞浓度或增加受检者血清、血浆两，改善抗原和抗体比例，调整至最合适比例，应用盐水凝集试管法，确定正确的血型，由此证明血型抗原、抗体仅为降低，并不是完全缺失。抗原、抗体减弱在影响微柱凝胶法对血型正确鉴定外，高冷凝集素也是影响血型鉴定的重要因素，高效价冷凝集速为患者体内产生的抗自身红细胞嗜异性冷抗体，此抗体属于IgM类抗体，体外一定条件下或在室温条件下其可同ABO系统红细胞或自身红细胞发生非特异性凝集反应，在交叉配血、正反定型时出现全凝集现象，导致血型判断错误[7-8]。应用37℃水浴箱和生理盐水洗涤，将微柱凝胶法同盐水凝集法结合，保证判断的准确性。

本研究显示，应用微柱凝胶法检测ABO血型，出现配血不合共18例，其中正反定型不符标本18例，其中自身因素占27.78%，治疗因素所占比例为22.22%，疾病因素占44.44%,人为因素占5.56%。综上所述，微柱凝胶法为血型检测的重要方法，具有优点和不可取代性，盐水凝集试管法为传统的血型检测方法，两者联合使用取长补短，提高疑难血型鉴别的准确性，在临床检查过程中，遇到正反定型不符合情况应查明原因做出正确的分析。

[1] 张海宇，张珂.微柱凝胶法ABO血型鉴定正反定型不相符的统计及原因探讨[J].检验医学与临床,2012,9(11):1295-1296.

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[3] 谢霞，安宁，王文婷，等.输血前免疫血液学相容性检查的重要性及其注意事项[J].细胞与分析免疫学杂志,2012,28(12):1338-1339.

[4] 赵胜昔，闫雪霞.孕妇ABO血型鉴定正反定型不符41例原因分析[J].临床误诊误治,2013,26(4):96-97.

[5] 李萌，冯丽，王晓卫，等.新生儿血型抗体产生情况分析及微柱凝胶法与盐水试管法的结合医院[J].南京医科大学学报（自然科学版）,2012,32(8):1174-1176.

[6] 赵子贤，李娟红，李健茹.微柱凝胶法和改良凝聚胺法在免疫性溶血性贫血患者交叉配血中的应用[J].中国医药科学,2013,3(15):116-117.

[7] 刘明霞.微柱凝胶免疫检测ABO血型的局限性及其与盐水试管法判定血型的结合应用[J].中国误诊学杂志,2010,10(7):1595-1596.

[8] 许琴,李娟,许亚莉.微柱凝胶技术在自身免疫性溶血性贫血实验诊断中的应用[J].临床医学,2011，31（10）：97-98.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.36.030

江苏 225500 泰州市第二人民医院输血科 （沈江涛 陈黎）