陈能桥 ，赵福葳 ，毛以智 ，朱大举 ，李红艳 ，冉浴

（1.贵州省遵义市动物疫病预防控制中心，贵州 遵义 563000；2.遵义市绥阳县动物疫病预防控制中心）

猪O型口蹄疫是由O型口蹄疫病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，该病传播迅速，发病率高，是世界动物卫生组织（OIE）规定必须报告的传染病之一，我国将其列为一类动物疫病[1～2]。长期以来，使用猪O型口蹄疫疫苗免疫接种是我国预防该病的重要措施[3～5]。为科学制定遵义市猪O型口蹄疫的免疫程序，合理使用猪口蹄疫O型灭活疫苗和合成肽疫苗，于2014年在遵义市绥阳县某种猪场，随机筛选90头53～73日龄仔猪分组进行猪口蹄疫O型灭活疫苗和合成肽疫苗及猪口蹄疫O型灭活疫苗不同剂量免疫后副反应调查、免疫抗体水平和抗体维持时间等相关工作的研究。

1 材料与方法

1.1 试验动物

随机选择53～73日龄的仔猪若干头，无菌前腔静脉采血分离血清，用酶联免疫吸附试验检测母源抗体，筛选母源抗体阴性的仔猪90头为试验动物。将90头仔猪随机分成A、B、C 3组，每组30头，对每头仔猪进行唯一编号。

1.2 试验疫苗

上海某生物医药有限公司生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽 2570+7309）（批号：20131203，有效期：20141202）；兰州某生物科技股份有限公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗（O/MYA98/BY2010株）（批号：H131154J，有效期：20141127）。

1.3 检测试剂

A组和B组用猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）（郑州中道生物技术有限公司，批号：20140101，有效期：20150109）。C组用O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物制品有限责任公司，批号：140302，有效期：150112）。

1.4 免疫剂量

A组每头仔猪耳根后肌肉注射猪口蹄疫O型灭活疫苗2mL；B组每头仔猪耳根后肌肉注射猪口蹄疫O型灭活疫苗4mL；C组每头仔猪耳根后肌肉深层注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗1mL。

1.5 免疫副反应调查

免疫后72h内细心观察试验仔猪是否出现采食减少、体温升高甚至死亡等免疫副反应。

1.6 采血时间

分别于免疫后第 7d、15d、30d、45d、60d、90d、120d、150d和180d，进行无菌前腔静脉采血并分离血清，4℃保存，次日检测。

1.7 抗体检测

酶联免疫吸附试验。按检测试剂盒使用说明书操作、判定。A组和B组：样品OD450nm值≥Cut Off值时判为阳性；样品OD450nm值＜Cut Off值时判为阴性；C组：样品OD630nm值≥0.4时判为阳性；样品OD630nm值＜0.4时判为阴性。

2 结果与分析

2.1 免疫副反应调查结果

见表1和图1，本试验共有28头猪出现了不同程度的免疫副反应，表现为精神沉郁、体温升高、呕吐和腹泻，其中A组6头，B组22头，C组未见免疫副反应，28头猪均在72h内自愈。

2.2 免疫后不同时间抗体的检测结果

表1 免疫猪群副反应调查结果 头，%

图1 免疫猪群副反应调查结果

表2 不同时间免疫抗体检测结果 天，头，%

图2 免疫猪群O型口蹄疫抗体动态检测OD值

图3 免疫后不同时间群体保护率

见表2、图2和图3。整个试验过程因其他原因导致6头猪死亡，其中A组2头，即45d和150d各死亡1头；B组于45d死亡1头；C组3头，即15d死亡1头、45d死亡2头。从表2、图2和图3可知，A组7 d时免疫抗体阳性率即群体保护率为20.00%，15～150d群体保护率均＞70%；B组和C组免疫第7 d时群体保护率分别为76.67%、73.33%，150d时3组的群体保护率分别为71.43%、75.86%和77.78%。3个试验组免疫后150d猪的群体保护率均达到农业部规定≥70%的标准。由表2知，接种猪口蹄疫O型灭活疫苗2mL后，15～150d免疫猪群体的群体保护率＞70%，所以生产中遵照疫苗使用说明书规范操作，就可获得较好的免疫效果。

3 结论与讨论

3.1 接种猪口蹄疫O型灭活疫苗72h内，试验猪出现免疫副反应的头数是：A组6头，B组22头，分别为免疫数的20.00%和73.33%（6/30、22/30）。由此可知，生产实践中不应随意加大免疫剂量，避免对动物机体造成伤害。免疫后150d，3个试验组群体保护率分别为71.42%、75.86%和77.77%；到180d时，C组（合成肽组）的群体保护率为22.22%，A、B两组因试验猪销售未能检测，根据120～150d A、B两组抗体OD值下降的幅度可以看出，180d时这两组猪的群体保护率都将低于70%。由此可知，接种猪口蹄疫O型灭活疫苗和猪口蹄疫O型合成肽疫苗后的群体有效保护期（免疫期）为150d左右（图3）。

3.2 对猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体消长变化的研究表明，猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫1次，即可确保高效价抗体维持至150d。猪口蹄疫O型合成肽疫苗具备免疫原性高，生物安全性好，免疫副反应小等优点，在生产实践中值得普及推广。由于有1头猪接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后（B组，4mL），7～150d的检测结果均为阴性，表明该头猪未产生免疫抗体，其原因是否为加倍剂量免疫导致免疫不应答（免疫耐受）有待进一步探讨。

3.3 在本试验中,B组即加倍剂量注射猪口蹄疫O型灭活疫苗后，猪群提前7d达到群体保护水平，但免疫副反应也随之大幅度增加 (为免疫数的73.33%)，主要表现为体温升高、精神沉郁呕吐和腹泻，因此只有在紧急免疫情况下，才建议使用该种免疫方法进行免疫。C组即接种口蹄疫O型合成肽疫苗后，未见猪群出现以上副反应；通过表2、图2和图3可知，接种口蹄疫O型合成肽疫苗后猪群的群体保护率均较好，且抗体水平和群体保护率的时间较稳定，说明接种该疫苗效果最好。

[1]谢庆阁.口蹄疫[M].北京：中国农业出版社，2004：16～27.

[2]易悦，王利娜，徐志文，等.猪口蹄疫疫苗的研究进展及其应用[J].猪业科学，2011，28（2）：44～48.

[3]周小红.猪口蹄疫免疫抗体合格率影响因素研究[J].北京农业，2012(12):21～22.

[4]钟小艳，凌洪权，黎朝燕.猪口蹄疫免疫抗体检测方法比较[J].中国畜牧兽医文摘，2011，27(6):50～51.

[5]Sellers R,Gloster J.Foot-andmouth disease:A review of intranasal infection of cattle,sheep and pigs[J].The Veterinary Journal,2008,177(2):159～168.