苟想珍王 珂何茂昌杨荐俊刘彦军

(1.甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉 744000；2.定西旺盛养殖有限公司,甘肃定西 743000；3.定西市团结乡畜牧兽医站,甘肃定西 743000)

冻前预处理对萨福克肉羊精液冷冻效果的影响

苟想珍1王 珂1何茂昌1杨荐俊2刘彦军3

(1.甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉 744000；2.定西旺盛养殖有限公司,甘肃定西 743000；3.定西市团结乡畜牧兽医站,甘肃定西 743000)

通过对萨福克肉羊新鲜精液在离心前进行不同时间的静置，选择不同的离心速度及离心时间进行冷冻前预处理，以解冻后精子活率，复苏率为判断指标，比较了各种不同预处理对萨福克精液冷冻效果的影响。结果表明:离心前在37℃环境下静置60min的冻后效果（活率达 0.47和复苏率达到73.8%）优于 30min 和 90min 的冻后效果（p＜0.05）；离心过程以 1000r/min 的速度离心 10min 较好，冻后活率 0.45，复苏率达到74.5%，优于500r/min 和 1500r/min转速和其他时间（p＜0.05）。

萨福克肉羊 冷冻精液 预处理 冷冻效果

精液的冷冻保存技术是随着人工授精（AT）的发展而发展起来的，是通过降低或抑制精子新陈代谢强度从而达到延长精子在体外生存的目的。以精液体外保存为基础的人工授精技术的广泛应用已经加速了动物的遗传选择并使生产能力得到极大的提高。

萨福克肉羊号称世界上长得最快的肉用型品种，早熟，生长快，产肉多，肉质好，适应性强，繁殖率达到160%-210%。为了有效地解决肉用种羊缺乏的现状，节省优质种羊引种费用和饲养管理成本，开发萨福克肉羊高端品质冷冻精液，扩大良种覆盖率，建立良种繁育体系，良种杂交改良体系，质量监督体系，开展集约化，精准化，产业化，绿色化的发展模式。

1 材料与方法

1.1 样品来源

精液样品采集于甘肃定西旺盛养殖有限公司选择成年，体质健康，性欲旺盛，配种频率正常的萨福克肉羊，收集中段富含精子部分，经 4 层灭菌纱布过滤，用保温瓶在 37℃左右运回实验室，生物显微镜下进行精液品质常规检查，选择活率 0.7 以上，密度“中”级以上的精液用于实验。

1.2 实验仪器

隔水式电热恒温培养箱，800 型电动离心机，400-600X 生物显微镜，电子天平，超低温温度计，氟板，5L 液氮罐，烘箱，高温高压灭菌器，普通冰箱及羊用采精器械和冷冻器械等。

1.3 精液的预处理

1.3.1 离心前静置时间

将采集的合格精液保存在 37℃左右的保温瓶中，分别静置30min、60min 和 90min。

1.3.2 离心

分别以 500r/min、1000r/min、1500r/min 的速度离心 7min、10min 和 15min。

1.4 冷冻精液制作与解冻

用液氮熏蒸法制作细管冻精，剂量为 0.5ml，解冻时用40～45℃温水。

1.5 数据处理

应用 t 检验和方差分析法对实验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 离心前静置时间对萨福克肉羊冻精活率及复苏率的影响

本研究在稀释前采用 30 min、60 min 和 90 min 3 种不同的静置时间对精液冻后活率的影响见表1。精液离体后静置 60 min 再采取 1 000 r/min 的速度离心，冻后活率及复苏率明显优于静置30 min和90 min（p＜0.05），冻后精子活率达 0.47，复苏率达73.8%。

2.2 离心速度及离心时间对冻后活率及复苏率的影响

对萨福克新鲜精液采用 500 r/min、1 000 r/min 和 1 500 r/min的速度分别离心 7 min、10 min和 15 min，分别制成细管冻精和颗粒冻精，同时，在相同条件下解冻（45℃温水）。结果见表2。当采用500 r/min 的速度离心时，离心时间的长短对冻后精子活率及复苏率的影响都非常明显。而采用 1 000 r/min 的速度离心，精子活率最高可达 0.45，复苏率也能达到 74.5%，这表明，离心时间对精液的冻后活率影响较大，通常以离心 10 min 较好，在细管冻精中表现非常明显（P＜0.05）。离心速度以1 000 r/min 较为理想。

表1 离心前静置时间对冻后活率及复苏率的影响

表2 离心速度及离心时间对冻后活率及复苏率的影响

3 讨论

（1）本研究在稀释前将精液分别静置 30min，60min 和90min，结果表明，平衡 60min可有效地使精子和精清接触，以增强精子对冷休克及冷冻损伤的抵抗能力，静置时间太长可引起精浆变质而对精子产生影响，同时，精子不运动也容易形成假死状态，该结果与 Paulenz所采用的猪精液 Beltsville 预处理方法所获得的结果相同。

（2）本研究采用不同的离心速度和离心时间，结果表明，以1000r/min 的离心速度离心10min 较好，解冻后活率达到 0.45。这主要是由于不离心，精液体积过大稀释效果不佳，而过快的离心速度则使精子在离心管底部凝结，导致形态异常，活率降低。也有报道表明，萨福克精液冻前以 1200r/min 的速度离心 10 分钟较好，本研究认为，在平凉地区以 1000r/min 的速度离心较好。

4 结论

（1）精液稀释前的静置时间，以在37℃下静置60min较好，优于30min和90min（p＜0.05）。

（2）离心时以 1000r/min 的速度离心 10min 较好，优于其他的速度时间。

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