许丹妮，杨海玲，甘静玉，林 婕，黄文男

(1.广西民族师范学院，广西崇左 532200；2.广西高校桂西南特色植物资源化学重点实验室培育基地，广西崇左 532200；3.广西中医药大学，广西南宁 530001；4.成都中医药大学，四川成都 610072)



姜黄酒炙前后多糖含量比较研究

许丹妮1，2，杨海玲3，4*，甘静玉3，林 婕3，黄文男3

(1.广西民族师范学院，广西崇左 532200；2.广西高校桂西南特色植物资源化学重点实验室培育基地，广西崇左 532200；3.广西中医药大学，广西南宁 530001；4.成都中医药大学，四川成都 610072)

[目的]比较姜黄酒炙前后多糖含量。[方法]采用苯酚-硫酸法测定姜黄酒炙前后多糖含量。[结果]葡萄糖质量浓度在10～70 μg/ml时呈现良好的线性关系，平均回收率99.67%，RSD为1.33%；姜黄多糖的含量为酒炙品(1.38%)>生品(0.68%)。[结论]该方法简便、可行，可用于姜黄多糖成分的提取及含量测定。

姜黄；酒炙；多糖；含量；苯酚-硫酸法

姜黄(CurcumalongaL.)为姜科植物姜黄的根茎，具有行气破瘀、通经止痛的功效。近年来，多糖成分研究在中药、天然药物中已成为了研究的热点。现代药理研究表明，多糖具有免疫调节[1]、抗肿瘤[2]、抗氧化[3]、降血糖[4]、降血脂[5]、镇痛[6]等广泛的药理作用。姜黄中含有多糖类成分[7]，但有关姜黄酒炙前后多糖含量的测定尚未见报道。因此笔者采用苯酚-硫酸法[8]对姜黄生品、酒炙品中多糖含量进行初步研究，以期为姜黄饮片炮制、临床应用、质量标准制定等提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1研究对象。姜黄购于玉林药材市场，经广西中医学院韦松基教授鉴定为姜科植物姜黄(CurcumalongaL.)的干燥根茎。

1.1.2试剂。 黄酒(浙江古泉酿酒有限公司生产，生产批号20140119)，米醋(山西水塔醋业股份有限公司生产，生产批号20140320)。苯酚(广东省化学试剂工程技术研究开发中心，生产批号20140317)，硫酸(广东汕头市西陇化工厂，生产批号20120309)，葡萄糖(天津市大茂化学试剂厂，生产批号20131219)，均为分析纯。

1.1.3仪器。 pl203型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，UV-1800型紫外分光光度计(岛津企业管理中国有限公司)。

1.2 方法

1.2.1姜黄炮制品的制备。

1.2.1.1生品。取原药材，浸泡30 min，闷润8 h，切成2 mm厚的薄片，干燥，筛去碎屑作为生品。

1.2.1.2酒炙品。取生品(饮片)，取定量黄酒，用适量蒸馏水稀释混匀后，加入饮片中拌匀,稍闷润，待酒被吸尽后，置预热电热炉内，用文火(600 W)，加热翻炒(5 min)，炒至亮黄色略带焦斑时，取出，放凉，称重，收率为98%。姜黄每100 kg，用米醋 10 kg。

1.2.2姜黄不同炮制品多糖溶液的制备。称取各饮片5.0 g于50 ml水中浸泡30 min后加热，30 min后收集提取液，药渣中加50 ml水，继续加热，30 min后收集提取液，如此操作反复2次，合并提取液，浓缩后放冷，于25 ml容量瓶中定容，备用。

1.2.3葡萄糖标准储备液的配制。称取无水葡萄糖0.10 g，精密称定，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容，配制成浓度1 mg/ml的葡萄糖标准储备溶液，备用。

1.2.4姜黄多糖显色条件单因素试验。

1.2.4.1显色时间的选择。吸取2.0 ml姜黄生品多糖样品溶液7份，分别置于不同编号的试管中，加入苯酚(浓度为5 %)1.0 ml、浓硫酸5.0 ml迅速振荡摇匀，于常温下分别显色5、10、15、20、25、30、35 min。以2.0 ml蒸馏水按同样显色操作为空白，在波长490 nm处测定吸光度值，以评价显色时间对多糖含量测定的影响。

1.2.4.2苯酚用量的选择。吸取2.0 ml姜黄生品多糖样品溶液5份，分别置于不同编号的试管中，依次加入苯酚0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 ml和浓硫酸5 ml，迅速振荡摇匀，于常温下显色30 min。在波长490 nm处测定吸光度值，以评价苯酚用量对多糖含量测定的影响。

1.2.4.3浓硫酸用量的选择。吸取2.0 ml姜黄生品多糖样品溶液5份，分别置于不同编号的试管中，加入苯酚0.6 ml，再依次加入浓硫酸4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 ml迅速振荡摇匀，于常温下显色30 min。在波长490 nm处测定吸光度值，以评价浓硫酸用量对多糖含量测定的影响。

1.2.5方法学考察。

1.2.5.1线性关系的考察。精密吸取葡萄糖标准储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0和3.5 ml分别置于50 ml容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即得10、20、30、40、50、60、70 μg/ml标准葡萄糖溶液，在最佳显色条件显色。以2.0 ml蒸馏水按同样方法显色后作为空白，在波长490 nm处测定各标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线。

1.2.5.2精密度、重复性、稳定性试验。精密吸取葡萄糖标准溶液(浓度为40 μg/ml)6份，测定吸光度。取生品 6份，每份约 5.0 g，精密称定，按多糖供试品的制备方法制备供试液,分别精密吸取2 ml，按照“1.2.5.1”项下操作,测定吸光度。精密吸取姜黄生品多糖样品溶液，在显色后的0、10、20、30、40、90 min测得吸光度。

1.2.5.3加样回收率试验。分别精密量取姜黄醋炙品每份2.5 g,共6份，分别加入葡萄糖对照品34.5 mg,按照“1.2.2”项制备成多糖溶液，在最佳显色条件显色，测定吸光度，计算回收率。

1.2.6姜黄酒炙前后多糖含量测定。分别精密吸取各样品溶液2.0 ml，在最佳显色条件显色，平行试验3份。测定吸光度，计算其含量。

2 结果与分析

2.1 姜黄多糖显色条件单因素试验

2.1.1显色时间的选择。由图1可见，显色时间5～10 min吸光度呈现下降趋势，10～15 min开始增大，15～25 min又开始下降，25～30 min又开始上升，30 min时吸光度最大，之后又开始下降，35 min时吸光度最低，故选择最佳显色时间为30 min。

2.1.2苯酚用量的选择。从图2可以看出，苯酚用量在0.2～0.6 ml，吸光度呈现上升趋势，0.6～1.8 ml则随着用量的增加反而下降，在0.6 ml时吸光度最大，故该试验选择苯酚最佳用量为0.6 ml。

2.1.3浓硫酸用量的选择。由图3可见，浓硫酸加入量4.0～5.0 ml时吸光度逐渐增大，5.0～8.0 ml时吸光度又逐渐下降，浓硫酸加入量为5.0 ml时吸光度最大，故该试验中显色浓硫酸最佳用量为5.0 ml。

2.2 方法学考察

2.2.1线性关系的考察。以吸光度值(Y)对葡萄糖标准溶液浓度(X)进行线性回归(图4)，得回归方程为Y=0.012 9X+0.016 1(r=0.998 5)，表明葡萄糖在10～70 μg/ml时与吸光度值呈现良好的线性关系。

2.2.2精密度、重复性、稳定性试验。精密度试验结果RSD为1.56%，表明仪器精密度较好。重复性试验结果RSD为1.71%,表明该仪器的重现性良好。稳定性试验中，吸光度在0～90 min内变化不大，RSD为1.14%，表明姜黄生品多糖样品溶液在90 min内显色反应的稳定性较好。

2.2.3加样回收率试验。按照“1.2.5.3”项操作得出多糖平均回收率为99.67%，RSD为1.33%(表1)。

2.3 姜黄酒炙前后多糖含量测定在最佳显色条件下测定姜黄、酒炙姜黄样品的吸光度，计算其姜黄酒炙前后其含量分别为生品0.68%、酒炙品1.38%(表2)。

表1 姜黄多糖加样回收率试验(n=6)

表2 姜黄酒炙前后多糖含量测定(n=3)

3 结论与讨论

采用苯酚-硫酸法分析姜黄生品、酒炙品中多糖含量，得出姜黄酒炙炮制前后多糖的含量高低为酒炙品(1.38%)>生品(0.68%)，进一步比较发现，姜黄经加入黄酒炮制后多糖含量与生品比较，约提高1倍。酒炙品明显高于生品，可能是酒炙提高了多糖含量的溶出，这提示辅料酒可能对姜黄多糖类成分含量有一定影响，其酒炙方法及工艺还有待进一步结合药理药效作用进行研究。

该试验采用热水提法提取姜黄多糖，运用苯酚-硫酸法测定其含量，该方法简便、可行，可用于姜黄多糖成分的提取及含量测定。

[1] 陈璋辉，陈云龙，吴涛，等．细茎石斛多糖 DMP4a-1的结构特性及免疫活性研究[J]．中国药学杂志，2005，40(23):1781．

[2] 何铁光,杨丽涛，李扬瑞，等．铁皮石斛原球茎多糖 DCPP1a-1的理化性质及抗肿瘤活性[J].天然产物研究与开发，2007，19(4):578．

[3] 鲍素华，査学强，郝杰，等．不同分子量铁皮石斛多糖体外抗氧化活性研究[J].食品科学，2009，30(21):123．

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[6] 李伟平，何良艳，马哲龙,等.土牛膝多糖抗炎镇痛作用的研究[J] .中华中医药学刊,2012,30(4):747.

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[8] 徐晶， 姜瑞平， 夏光辉，等.苯酚-硫酸法测定金顶侧耳中多糖含量[J].安徽农业科学,2011,39(5):2649.

Study on the Contents of Polysaccharide inCurcumalongaL. before and after Wine Sauteed

XU Dan-ni1，2，YANG Hai-ling3,4*,GAN Jing-yu3et al

(1.Guangxi Normal University for Nationalities, Congzuo, Guangxi 532200;2.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory Breeding Base of Chemistry of Guangxi Southwest Plant Resources,Congzuo, Guangxi 532200;3.Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning, Guangxi 530001;4. Chengdu University of TCM,Chengdu,Sichuan 610072)

[Objective] The research aimed to compare the contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed. [Method]The contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed were determined by phenol-sulfuric acid method.[Result]The concentrations of glucose between 10-70 μg/ml were good in linear relationship. The average recovery was 99.67% withRSD1.33%,and the contents of polysaccharide inCurcumalongaL. before and after wine sauteed were as follows:wine sauteed (1.38%) > raw products (0.68%).[Conclusion]This method was simple,convenient and quit stable,so it can be used for the extraction and detection of polysaccharide inCurcumalongaL..

CurcumalongaL.;Wine sauteed;Polysaccharide;Content;Phenol-sulfuric acid method

广西高等学校科学技术研究项目(LX2014170)； 广西中医药大学中药学博士点建设工程开放课题(201410-14)；广西民族师范学院校级项目(2014YB001)。

许丹妮(1983-)，女，壮族，广西崇左人，讲师，硕士，从事中草药的研究及新药开发工作。*通讯作者，讲师，在读博士，从事中药炮制机理及质量标准研究。

2014-12-02

S 567

A

0517-6611(2015)02-094-03