薛士鹏

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测研究

薛士鹏

目的 探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值。方法 本次研究的对象是小白鼠, 将本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素作为免疫抗体, 研究这种抗体在产生过程中的作用, 采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)检验方式对其进行检验,总结出金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测在细菌霉素中检测的理论依据。结果 本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素纯度较高, 能够与金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度呈现出线性关系。在本次研究过程中, 小白鼠最高效价为1：10000。从本次试验中发现, 当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml范围中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。结论 采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测这种方式应用于检测中具有极强的价值, 灵敏度较高, 能够检测出样品中金黄色葡萄球菌B型肠毒素的残留情况。

金黄色葡萄球菌B型肠毒素；酶联免疫检测；临床应用价值；研究

改革开放以来, 我国国民经济进入了快速增长的阶段,随着人们生活水平的提高, 日常生活的饮食结构和消费观念产生了巨大的变化, 动物源性食品的比重在人们生活中所占有的比重越来越多。金黄色葡萄球菌B型肠毒素是重要的食源性和医源性双重致病菌, 经常存在于多种物质中, 这种病菌对营养物质水平的要求不高, 耐盐性较强, 大量聚集会产生食物中毒的情况发生。为了探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值, 本院特进行了一次研究,取得了较为良好的效果, 现将具体情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 本次研究中所使用的分光光度计主要由日本岛津提供, 型号为UV-265FW；在实验中ZFQ-85A型酶联免疫检测仪主要由华中电子管厂提供；研究中采用的离心机型号为TGL, 由北京医用离心机厂提供。金黄色葡萄球菌B型肠毒素主要由信阳农业高等实验室保存。牛血清白蛋白主要由华美公司提供。

1.2 检测方法

1.2.1 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备主要包括3个方面：①从琼脂板上挑选出单菌落, 将其接种到10 ml的培养液中, 需要保持培养环境的温度为37℃, 培养的时间为12 h, 得到种子液, 将1 ml含量的种子液接种到200 ml的培养基中进行培养, 培养的温度、时间与上述时间相同；②将培养好的金黄色葡萄球菌B型肠毒素菌液进行离心处理, 离心的速度为10000 r/min, 离心后取其上清液, 用滤膜过滤后放置在300 ml的滤杯之中 ,用截留孔径为10 k的超模在氮气压力下对其进行浓缩处理,浓缩成其原体积的1/10。需要注意的是, 氮气压力设置在0.2 MPa。液体浓缩好之后将其放置在冰浴之中, 根据体积的具体情况分次进行磁力搅拌并加入固体达到饱和度为60%的状态, 再冰浴4 h之后进行15 min的离心处理, 取上清液继续放置在冰浴中加入(NH4)2SO4, 将饱和度情况提高到85%,放置在4℃的环境中即可。过夜后需要对取得的液体进行蛋白沉淀, 离心, 除去上清后加入其体积1/10的水重新溶解,随后进行为期为24 h的透析；③根据仪器中的色谱柱相关要求对毒素进行纯化。

1.2.2 金黄色葡萄球菌B型肠毒素抗血清的制备 此种制备的方式主要包括2个方面：①在进行抗原注射前的1周对小白鼠进行皮内注射, 注射的药物为卡介苗, 这样能够刺激动物的免疫系统, 然后再进行抗原注射, 抗原注射使用的量为0.1 ml/次；②抗原注射后的1个月之后对小白鼠进行断尾, 采其血样, 将其放置在室温中进行凝血处理, 在4℃的环境下进行过夜, 采用转速为3000 r/min的速度进行离心处理,离心的时间为5 min。

1.2.3 ELISA进行检测 按照ELISA的相关检测标准进行操作即可。

2 结果

小白鼠最高效价为1：10000, 当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml之中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。

3 讨论

金黄色葡萄球菌B型肠毒素英译为Staphylococcal Enterotoxin B, 简称为SEB。金黄色葡萄球菌B型肠毒素经常会蕴藏在蛋白质、水分含量充足并且同时含有一定含量的淀粉之类的食物之中［1］。在日常生活中, 牛奶、大多数乳制品均符合金黄色葡萄球菌B型肠毒素生长的条件, 在牛奶中含有的金黄色葡萄球菌B型肠毒素具有极强的耐热性, 耐受度可高达100℃300 min［2］, 也就是说在原料乳经过热处理后虽然金黄色葡萄球菌能够被杀死, 但是金黄色葡萄球菌B型肠毒素还能够导致机体致病的情况发生, 因此, 对乳制品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素进行检测对人类的身体健康具有极其重要的意义［3］。金黄色葡萄球菌B型肠毒素在检测中传统的方式是采用动物学试验的方式进行的, 但是这种检验方式动物来源较为困难, 并且灵敏度情况较低, 在检验的过程中经常会出现检测结果不满意的情况［4］。本次研究中, 作者根据具体的情况用自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素进行研究,将小白鼠作为免疫实验的对象, 取得了较为良好的效果, 检测的灵敏度情况明显提高。

综上所述, 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测这种检测方式具有极强的临床应用价值, 值得在实际中应用。

［1］ 杨静.食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因在液体培养基和牛肉制品中的表达研究.南京农业大学, 2013.

［2］ 章建辉.免疫磁珠快速检测金黄色葡萄球菌方法的研究.湖南师范大学, 2013.

［3］ 李乐.致病微生物新型检测方法及预防体系应用研究.中南大学, 2014.

［4］ 王立新.临床血流感染患者金黄色葡萄球菌耐药机制及分子流行病学研究.天津医科大学, 2013.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.192

2015-01-30］

473061 南阳医学高等专科学校