杨炳林 肖 坚 陈文新 王合兵 李永林 苏卫国

CD90在增生性瘢痕中的表达及其生物学作用研究

杨炳林 肖 坚 陈文新 王合兵 李永林 苏卫国

目的 探讨CD90在增生性瘢痕的形成过程中所起的生物学作用。方法 20例带有正常皮肤组织的瘢痕为手术切除后的标本，经过严格固定、石蜡包埋、组织切片、HE染色后，分为增生性瘢痕组(A组)、瘢痕交界处组(B组)及正常皮肤组(C组)，每组20例。从每例标本中选取1个典型部分进行采样，构建包括60个典型组织标本的芯片蜡块，从该蜡块中切取1张切片，免疫组化染色,检测CD90在A、B、C组中的表达水平，将所得结果进行统计分析。结果 CD90的阳性表达在A组与B组中均较高，两组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，而在C组中阳性表达较低，与上述两组相比差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 在增生性瘢痕中，CD90阳性表达的成纤维细胞与瘢痕异常增生存在相关性。

增生性瘢痕；CD90；免疫组化

增生性瘢痕是因创伤后胶原纤维等细胞外基质过度生长、无序沉积所致。CD90作为粘附分子家族成员，在成纤维细胞的粘附、凋亡、细胞增殖等方面通过信号传导发挥作用,与创面愈合和纤维化疾病关系密切［1］。本实验应用免疫组化结合组织芯片技术方法，检测成纤维细胞CD90在增生性瘢痕、瘢痕交界处、周围正常皮肤组织中的阳性表达情况，为增生性瘢痕的临床防治提供新的思路和实验依据，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 20例标本均来自本院外科手术切除的瘢痕组织，用福尔马林溶液进行严格固定，然后常规石蜡包埋,切片经过HE染色检测证实临床诊断后，分为正常皮肤组、瘢痕交界处组、增生性瘢痕组，每组20例。所选标本都符合以下实验标准［2］：①病变未超过损伤范围；②病程中瘢痕组织具有持续性生长、表面发红、疼痛及瘙痒等临床症状；③未经过口服激素药物、冷冻、激光等非手术治疗；④供者无遗传性疾病及全身系统性疾病。

1.2 试剂来源及染色方法 鼠抗人CD90单克隆抗体、SP通用型免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程公司)。将新鲜的组织标本用10%中性甲醛固定，制成3 μm厚度石蜡切片后HE染色。根据染色结果，通过观察组织标本中成纤维细胞的分布特征及胶原含量情况，进行实验分组。分成增生性瘢痕组(A组)、瘢痕交界处组(B组)、正常皮肤组(C组)。选取三组组织蜡块的标本，根据标本HE切片染色及形态学观察结果确定其典型病变部位，从每例标本中选取1个典型部分进行采样，构建包括60个典型组织标本的芯片蜡块，阵列均为10×6。将组织芯片蜡块切片，制成3 μm厚度。

1.3 观察方法 通过观察组织切片中成纤维细胞CD90的表达情况，CD90以细胞膜及胞浆内呈现棕黄色颗粒为阳性，由两名高年资病理科医师在光学显微镜下观察并照相，评估其免疫组化结果。

1.4 评分标准 在400倍光镜下随机观察5个视野，每张切片由2名观察者双盲交换判断，采用半定量记分法，根据细胞膜或细胞浆的染色强度及染色细胞百分比进行综合评分［3］。阳性细胞数评分标准：＞50%为3分；26%～50%为2分；≤25%为1分；无细胞染色记为0分，染色强度评分：3分为棕褐色；2分为棕黄色；1分为浅黄色；0分为无色。结合每张切片染色程度和阳性细胞数百分比进行综合评分，两者相加为其最后得分：判定0～2分为阴性，3～6分为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件进行数据分析。计数资料以率(%)表示，采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

20例标本中，A组有13例可以观测到有少量CD90阳性表达的成纤维细胞分布在管周，真皮中CD90阳性表达的成纤维细胞相对较多，且体积肥大，C组中CD90阳性表达的成纤维细胞相对较少，且体积也较小。B组中CD90的阳性表达(50.00%)介于A组(61.11%)与C组(16.67%)之间。A组与B组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，A组与C组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

CD90是最小的免疫球蛋白超家族成员，一般都贴附在细胞膜的胞浆面，它作为一种细胞的粘附结构，是细胞与细胞之间，细胞和细胞外基质之间相互作用的重要调节结构［1］。本实验结果发现成纤维细胞CD90阳性的表达情况，在A组中表达最高，而在B组及其C组中表达量依次递减，这说明CD90在增生性瘢痕成纤维细胞中表达明显，而且与瘢痕形成密切相关。

为了减少实验误差，本实验中作者采用组织芯片技术检测成纤维细胞CD90的阳性表达情况，发现成纤维细胞CD90在A组与B组中的阳性表达均较高，两组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，而在C组的阳性表达较低，其与上述两组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。这些都提示成纤维细胞CD90在增生性瘢痕中的确存在异常表达，推测CD90可能是增生性瘢痕成纤维细胞的特异标记，它在瘢痕异常增生过程中起作用,如能针对CD90进行干预和调控，有望在增生性瘢痕的防治中发挥积极的作用。

［1］ Hagood JS，Prabhakaran P，Kumbla P，et al.Loss of fibroblast Thy-1 expression correlates with lung fibrogenesis.Am J Pathol，2005，167(2):365-379.

［2］ 李荟元，鲁开花，郭树忠.新编瘢痕学.西安:第四军医大学出版社，2003:9-25.

［3］ Mattern J，Koomagi R，Volm K.Association of vascular endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung cancer.Br J Cancer，1996，73(7):931-934.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.018

2015-04-29］

000000 福建医科大学附属三明第一医院乳腺外科(杨炳林 肖坚 陈文新 王合兵)；郑州市第一人民医院整形外科(李永林 苏卫国)