不同地区的东北龙胆根中獐牙菜苦苷含量分析

2015-01-26高娟姜华

中国林副特产 2015年3期

关键词：龙胆黑龙江东北

高娟，姜华

(1. 黑龙江农业经济职业学院，黑龙江牡丹江157041；2. 牡丹江医药技工学校，黑龙江牡丹江157000)

不同地区的东北龙胆根中獐牙菜苦苷含量分析

高娟1，姜华2

(1. 黑龙江农业经济职业学院，黑龙江牡丹江157041；2. 牡丹江医药技工学校，黑龙江牡丹江157000)

研究不同地区的东北龙胆，组间獐牙菜苦苷的含量差异。采用高效液相色谱法。结果表明：生长在不同地区的东北龙胆，獐牙菜苦苷的含量差异显著，即生长环境不同，东北龙胆根中有效成分龙胆苦苷含量差异显著。土壤类型因素对条叶龙胆根中獐牙菜苦苷含量的影响达到显著水平。

东北龙胆；獐芽菜苦苷；含量分析

东北龙胆(GentianamanshuricaKitag.)，龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)多年生草本植物，以中药“龙胆”入药，是一种常用中药，具“泻肝火，清湿热，健胃”功能。东北龙胆主要药效成分为龙胆苦苷和獐牙菜苦苷，其含量差异受遗传和环境的共同作用，因此本论文设计不同的环境条件下，比较东北龙胆个体间有效成分含量的差异大小；比较在不同的土壤条件下个体间根中獐牙菜苦苷的含量差异。

1 实验材料与方法

1.1 材料

东北龙胆植株采集于黑龙江五常小岭地区、镜泊湖、三江平原植株。植物生长年限为3年生植株。

1.2 方法

本文鉴于对东北龙胆獐牙菜苦苷含量分析研究，所以主要选择采用高效液相色谱法,测定东北龙胆根中次生代谢物獐牙菜苦苷含量。

1.3 仪器和试剂

1.3.1 主要仪器。Waters-1525高效液相色谱泵，Waters-2487紫外-可见检测器，Empower Pro工作站，Nova-Pak C18色谱柱(3.9mm×150mm)，Sartoriua BS-210s电子天平，Water Code 5CH型柱温箱，B-321型超声波清洗器(美国Branson Cleaning Equipment公司)。

1.3.2 试剂。甲醇为色谱纯(美国迪马公司)和分析纯，水为超纯水；龙胆苦苷对照品购自中国药品生物制品检定所；獐牙菜苦苷对照品购自中国药品生物制品检定所。

2 东北龙胆根中獐牙苦苷含量测定

关于东北龙胆苦苷类成分的含量测定方法，有纸色谱-比色法、薄层色谱-比色法、薄层色谱-紫外分光光度法、薄层色谱-光密度法和高效液相色谱法等，本实验用高效液相色谱法测量东北龙胆根中獐牙菜苦苷含量，此方法简便、快速、准确、可重复性强。

2.1 獐牙菜苦苷含量测定

色谱条件：流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0mL/min；进样运行时间为5min；獐牙菜苦苷保留时间为3.2min；进样量5μL；紫外检测波长237nm；论塔板数按獐牙菜苦苷计算不低于2500，柱温39℃。

标准曲线的制备：精密称取獐牙菜苦苷对照品5.1mg，置于10mL的容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀制成浓度为0.51mg/mL的对照品，然后用0.22μm滤膜过滤，备用贮存液。精密吸取上述贮存液，以甲醇进行准确配置浓度分别为0.0、0.018、0.02550、0.03185、0.06375、0.12750 mg/mL。每一浓度平行进样3次，进样量为5 μL。以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标准曲线。回归方程为：Y=5.02e+006X+2.52e+003,r=0.999295，表明獐牙菜苦苷在0.0～0.6375 μg范围内具有良好的线性关系。

样品溶液的制备：精密称取条叶龙胆根干燥粉约100mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇9 mL,超声提取55 min, 提取温度10℃，用纯甲醇定容至刻度，混匀，放置20 min然后用0.22μm滤膜过滤后用于进样。在选定的色谱条件下测量其獐牙菜苦苷含量，每份样品进样3次。

2.2 对照品与样品的纯度检查

取对照品与样品液各10μL，进样，色谱分离，对照品与样品中獐牙菜苦苷的峰纯度指数均大于0.9999，即样品峰无其他杂质干扰。

样品溶液稳定性试验:精密吸取已知含量的条叶龙胆样品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、10、12 h进行进样1次测定，测定峰面积,计算RSD为1.57%,表明供试品溶液在12 h内稳定。

精密度试验：精密吸取同一样品溶液5 μL，连续重复进样6次，测定峰面积积分值， RSD为0.93%，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批条叶龙胆样品5份，精密称定，按含量测定方法重复测定，计算RSD为2.41%表明该方法重复性良好。

回收率试验：精密称量已知含量的条叶龙胆样品6份，每份100 mg，精密加入獐牙菜苦苷对照品溶液约1 mg，按前述样品溶液的制备方法制备样品，并进行测定，计算平均回收率和RSD分别为：97.8%和2.15%。