李慧艳葛 鹏周博宇

（1.吉林大学,吉林长春 130012；2.天津药物研究院新药评价有限公司,天津 300193）

多西环素治疗兔实验性骨关节炎的效果及作用机制探讨

李慧艳1葛 鹏2周博宇2

（1.吉林大学,吉林长春 130012；2.天津药物研究院新药评价有限公司,天津 300193）

目的:探究兔实验性骨关节炎采用多西环素的治疗效果和作用机制。方法:在实验中对30只家兔的右膝关节给予0.3ml1.6%木瓜蛋白酶溶液的注射，建立兔膝骨关节炎模型的建立，所有家兔给予清理霉素的治疗，对照组有15例正常的家兔。结果:两个多西环素组一氧化氮的释放量和总一氧化氮合酶活性明显比模型对照组低，差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。且两组多西环素组的评分明显低于模型对照组，差异显著（P＜0.05）；模型对照组的评分明显比正常对照组高，差异显著（P＜0.05）。结论:兔骨关节炎采用多西环素的关节腔内给药治疗，可使症状得到明显缓解，作用机制和一氧化氮合酶的活性以及软骨细胞基质金属蛋白酶-13的表达有关系。

兔实验性骨关节炎 多西环素 作用机制

骨关节炎为局灶关节软骨出现骨丢失、退行性变、关节边缘骨赘为特征的一种慢性关节疾病[1]。在研究中发现骨关节炎的发病是因为生物、力学、酶、化学等不同因素的发病机制造成的，重要特征为进行性的软骨破坏，通过多年的探究，四环素抗生素得到深入的研究，多西环素就是半合成四环素类的抗生素。本文主要对兔骨关节炎给予多西环素的关节内治疗，观察治疗效果，并探讨作用机制，现报告如下。

1 资料和方法

1.1 建立动物模型

共选择45只健康成年的大耳白兔，雌雄不限，体重为2kg左右，其中随机选择30只兔子在实验的第一天和第四天在右膝关节中注入0.3ml1.6%的木瓜蛋白酶，2周之后会形成稳定骨关节炎的模型。

1.2 使用试剂

一氧化氮合酶的试剂盒，生产商为：南京建成生物工程有限公司，木瓜蛋白酶粉剂的生产商为：Merck公司；基质金属蛋白酶-13单抗的生产商为：NeoMarker公司，

1.3 动物分组

将30只兔子随机分三组，A组在右膝关节中，每日注射生理盐水，剂量为0.3ml；B组给予大剂量的多西环素，将0.3ml浓度为1.33%多西环素注射到关节中，C组给予小剂量的多西环素，将0.3ml浓度为0.67%多西环素注射到关节中。另外15只兔子为对照组，并采取任何干预措施。

1.4 取材

在实验动物处死的过程中，在关节腔中注入1ml的三蒸水，用注射器进行反复的抽吸，30秒后将0.5ml吸出，在零下20摄氏度的环境下进行保存。取材前要将胫骨内侧的平台进行暴露，然后给予基本观察，然后选择直径为3mm的圆骨凿给予胫骨中髁关节的定点取材，一直到软骨的下骨，给予相关评分，并截取留下胫骨内侧的平台软骨，将其放置在10%中性的甲醛溶液中给予固定，然后给予脱水、脱钙和石蜡包埋的处理，并垂直骨表面给予5mm的切片，给予免疫组织和病理学的化学检查。

1.5 检测

将冷冻关节液取出，复温后根据说明书进行操作，选择化学的比色法，在550mm和530mm的波长下进行OD值的测定，计算相应一氧化氮的释放量，以及诱导型一氧化氮合酶与总一氧化氮合酶的活性。在光镜下进行细胞数量、软骨组织结构、潮线完整性、甲苯胺蓝染色的观察，给予评分。并对其余胫骨内侧的软骨组织给予病例形态的观察，将切片放置在10×20光镜下采取5个视野，并将视野中细胞的阳性表达率进行记数。

1.6 统计学分析

对本文所得实验数据均采用SPSS 13.0统计学软件进行检验，所得计量资料采用t检验，所得计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 多西环素对关节液一氧化氮释放量，总一氧化氮合酶活性的影响

同15只健康兔子进行对比，模型对照组关节液中一氧化氮的释放量和总一氧化氮合酶活性得到明显增加，差异较大，有统计学意义（P＜0.05）。两个多西环素组一氧化氮的释放量和总一氧化氮合酶活性明显比模型对照组低，差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 光镜下软骨组织的Mankin‘s评分

正常对照组的评分为：（0.0±0.0），基质键鼠蛋白酶：（0±0）；模型对照组的评分为：（6.8±0.5），基质键鼠蛋白酶：（92±4）；大剂量多西环素组的评分为：（3.7±1.1），基质键鼠蛋白酶：（25±5），小剂量多西环素组的评分为：（4.7±1.0），基质键鼠蛋白酶：（44±4）。两组多西环素组的评分明显低于模型对照组，差异显著（P＜0.05）；模型对照组的评分明显比正常对照组高，差异显著（P＜0.05）。

3 讨论

骨关节炎实验动物模型的制作方法为机械和药物两种，药物方法就主要在关节腔中给予木瓜蛋白酶的注射，该模型能够防止机械法因手术因素影响造成的药物渗漏[2]。通过相关实验，促使局部药物浓度的提高，减缓药物的不良反应。通过实验得出两个多西环素组一氧化氮的释放量和总一氧化氮合酶活性明显比模型对照组低，差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。且两组多西环素组的评分明显低于模型对照组，差异显著（P＜0.05）；模型对照组的评分明显比正常对照组高，差异显著（P＜0.05）。

综上所述，骨关节炎这一疾病给予多西环素的治疗，可明显缓解骨关节炎的软骨退变，提高治疗效果。

[1] 商亮.多西环素治疗兔实验性骨关节炎的疗效及其作用机制研究[D].武汉大学，2005.

[2] 商亮，陈廖斌，郑先念，等.多西环素治疗兔实验性骨关节炎的疗效及其作用机制的研究[J]. 中国临床药理学与治疗学，2004，（11）：1248-1252.