张华成

（浙江富阳科兴生物化工有限公司,浙江富阳 311400）

兽药残留免疫学快速检测技术研究进展

张华成

（浙江富阳科兴生物化工有限公司,浙江富阳 311400）

兽药在降低畜禽发病率与死亡率，提高畜禽养殖经济效益方面发挥了巨大作用，但随着兽药品种和数量不断增加，以及兽药甚至违禁药品在临床中的大量滥用，兽药蓄积在动物机体及其动物产品中造成兽药残留，由兽药残留导致的微生物耐药性、生态环境毒性、食品安全等问题日益受到重视。故加强兽药残留检测技术的研究与应用对保障食品安全和人类健康均具有十分重要的现实意义。随着现代免疫学技术的快速发展，兽药残留免疫学检测技术日臻完善，本文就近年来针对兽药残留的酶联免疫法、放射免疫分析法、电化学免疫方法、胶体金免疫层析法等免疫学检测技术做一简要综述，以期为我国兽药残留的快速检测提供参考。

1 酶联免疫法（ELISA）

ELISA是将抗原或抗体结合在固相载体表面，并使其保留免疫活性，再加入抗体或抗原与酶结合成的偶联物，该偶联物既有酶的活性特异性又具有与固相载体表面抗原或抗体特异性结合的活性，再加入酶的底物即可呈现出颜色反应。王鹤佳等[1]利用尼卡巴嗪残留标志物作为抗原免疫动物获得特异性抗体，建立了鸡肉中尼卡巴嗪残留的ELISA检测方法，该方法对鸡肉中检测限为9.2 µg/kg，在灵敏度、精密度、准确度方面均能满足兽药残留快速筛选的检测要求。ELISA方法检测快速、操作简单，敏感性高、特异性强，已广泛应用于常见兽药残留的快速检测。

2 放射免疫分析法

放射免疫分析法将微生物学与免疫学有效结合，具有分析成本低、操作简单、检测速度快，整个检测过程大约20 min左右，特别适用于现场大量样品的筛选。但该方法的放射性对人体和环境造成一定的危害，容易造成污染。周浩等[2]应用放射免疫法检测蜂蜜中四环素类抗生素的残留，该方法特异性强，与氯霉素、红霉素、链霉素、青霉素G、磺胺嘧啶等其他族抗生素无交叉反应，该方法与液相色谱质谱法符合率达100 %，能达到检测蜂蜜中四环素类抗生素残留的要求，为四环素类抗生素残留的快速检测提供了一种很好的快速筛选方法。

3 电化学免疫方法

电化学免疫检测方法测定快速、灵敏、经济、适合大规模生产，比较适合现代化畜产品检测的需要。李孝君等[3]将玻碳电极表面氧化处理后，用戊二醛作交联剂，将新亚甲蓝及辣根过氧化酶标记的青霉素多克隆抗体修饰到电极表面，制成了电流型青霉素免疫传感器，并对鸡肉中青霉素的残留进行了定量的检测。结果表明，传感器对鸡肉中含有的青霉素最低检出限为1.90ng/g，受交叉干扰和鸡肉中其他成分干扰均较小。该方法具有操作简易、反应快、灵敏度高、稳定性和重现性好等优点，可用于实际肉样中青霉素残留量的测定。

4 化学发光免疫法

化学发光免疫法将免疫反应的特异性与化学发光分析的灵敏性相结合，具有特异性好、灵敏度高、简便快速、标记物有效期长、无辐射、可实现全自动化检测等优点。马玲等[4]利用制备的抗磺胺二甲嘧啶单克隆抗体建立了磺胺二甲嘧啶间接竞争化学发光酶免疫分析法，该方法批内和批间变异系数分别为3.07 %和8.22 %，与磺胺脒等药物无交叉反应，与ELISA试剂盒的符合率为100 %。化学发光免疫分析法是免疫分析的重要发展方向，有逐步取代放射免疫和ELISA的趋势。

5 时间分辨荧光免疫法

时间分辨荧光免疫分析方法采用稀土离子螯合物作为标记物，通过时间分辨和波长分辨，能够有效降低背景荧光的干扰，具有操作简便、灵敏度高、无放射性污染等优点。李丽华等[5]将环丙沙星-卵清白蛋白包被于固相微孔板，利用铕标羊抗兔IgG示踪，建立环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法，该方法的检测限为0.5 µg/L，批内和批间变异系数分别为7.42 %和10.92 %，具有灵敏度高、特异性好、性能稳定的优点，适于高通量筛查。时间分辨荧光免疫分析方法样品处理简单、线性范围相对较宽、可满足实际样品的检测要求，可实现全自动大批量样品的筛查，具有一定的推广应用前景。

6 量子点荧光免疫法

量子点通过链霉亲和素和生物素亲和作用的抗体标记技术在药物检测方面逐步得到应用，杨杰等[6]将量子点同抗氧氟沙星抗体通过生物素-亲和素系统进行连接，建立了基于量子点的氧氟沙星间接荧光免疫检测方法，该方法针对实际牛奶样品中氧氟沙星抗生素残留回收率测定结果为88.2 %～105.3 %，变异系数达7.3 %～10.9 %，可以替代传统的ELISA方法应用于牛奶中氧氟沙星抗生素残留的实际测定中，具有特异性强、灵敏度高、操作简单、便于推广等优点，是一种可用于不同药物残留的多重测定技术。

7 胶体金免疫层析法

胶体金免疫层析法以毛细作用使样品溶液在纤维膜上泳动，层析时胶体金标记物与待测物的络合物被相应的配体捕获而浓集显色，以显色条带的有无即可进行快速检测。赵正苗等[7]应用胶体金免疫层析法检测动物组织中残留的呋喃西林代谢物，表明试纸条检测限为1.0 µg/kg，假阳性率小于5 %，假阴性率为0 %，对其他药物无交叉反应，特异性较好，对实际样品检测结果与LCMS/MS法检测结果一致。胶体金免疫层析方法具有操作简便、快速、直观的特点，可作为筛选法对样品进行现场快速筛查。

8 结语

兽药残留与食品安全和人类健康密切相关，故加强其检测技术的研究与推广应用至关重要。免疫学技术检测快速、操作简单、通量高，特别适合于基层现场的快速筛查。进一步提高检测的特异性和灵敏度，实现多种成分的同时检测将是免疫学快速检测技术的发展趋势。相信随着免疫学技术的进一步发展以及在药物残留检测方面的不断应用，兽药残留免疫学检测技术将具有更加广阔的开发与应用前景，为食品安全和人类健康保驾护航。

[1] 王鹤佳，刘智宏，汪霞，等. 酶联免疫法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留[J].2014，48（3）：59-61.

[2] 周浩，李俊霞，杨红，等. 蜂蜜中四环素类抗生素的放射免疫法检测[J]. 食品研究与开发，2012，33（11）：160-162.

[3] 李孝君，李兰，马洁，等. 电化学免疫法测定鸡肉组织中青霉素[J].应用化学，2009，26（6）：716-720.

[4] 马玲，韦建兴，陆忠础，等. 磺胺二甲嘧啶间接竞争化学发光酶免疫分析法的建立及应用[J]. 中国食品卫生杂志，2014，26（5）：455-460.

[5] 李丽华，白瑞樱，孙远明，等. 环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法的建立与应用[J]. 食品科学，2012，33（8）：216-220.

[6] 杨杰，刘娜，刘琪，等. 量子点荧光免疫法快速测定氧氟沙星[J].上海交通大学学报，2010，28（6）：541-545.

[7] 赵正苗，罗晓琴，汪善良，等. 应用胶体金免疫层析法检测动物组织中呋喃西林代谢物的残留[J].上海畜牧兽医通讯，2012（5）：4-5.

张华成（1976-），男，浙江浦江人，汉族，本科，研究方向:兽医兽药。