曲秦，李宗霖，麻纪斌，陈雁，翟帆

(1.陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075;2.西安市第五医院，陕西 西安 710082)

对胍基苯甲酸盐酸盐是一种常用的医药工业中间体，为顶体蛋白酶的抑制剂［1］，用于合成抗胰腺炎药物甲磺酸卡莫司他和萘莫司他，以及合成许多其他蛋白酶抑制剂。它们所含的胍基具有很强的生理活性，可在配基与受体及酶与底物间通过氢键作用形成特殊的相互作用，因此近些年对胍基化合物的研究日益深入。对胍基苯甲酸盐酸盐在抗生育领域有广泛的应用前景，有望发展成为避孕药系列产品［2］。

对胍基苯甲酸化学性质稳定，可溶性差，常以盐酸盐的形式用于药物合成［3］。在对胍基苯甲酸盐酸盐合成中可能引入副产物及未反应完全的反应物，作为中间产品的控制需要提供准确的检测方法。

本文采用HPLC［4］法测定对胍基苯甲酸盐酸盐含量，具有操作方便、测定结果准确可靠、检出限好等优点。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

对胍基苯甲酸盐酸盐对照品和样品均为自制;纯净水;乙腈，色谱纯;醋酸，分析纯。

Ag135 电子天平;Waters 高效液相色谱仪;PHS-3C 型精密pH 计;KQ-300VDE 型双频数控超声波清洗器。

1.2 溶液配制

1.2.1 对照品溶液制备精密称取对胍基苯甲酸盐酸盐对照品20.0 mg，置25 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 mL 至新的10 mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.2 供试品溶液制备精密称取对胍基苯甲酸盐酸盐供试品10.0 mg，置50 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 mL 至新的10 mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1.3 色谱条件

色谱柱为反相C18柱(250 mm ×4.6 mm);流动相为醋酸盐缓冲液(pH =3.0)∶乙腈=70 ∶30(V/V);检测波长251 nm;流速0.5 mL/min;进样量20 μL，柱温为30 ℃。理论板数按对胍基苯甲酸盐酸盐峰计算不低于2 000。主峰与杂质峰的分离度＞1.5。

1.4 标准曲线的制备

精密称取干燥至恒重的对胍基苯甲酸盐酸盐对照品100 mg，置50 mL 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取0. 5，1. 0，2. 0，3. 0，4.0，5.0，6.0 mL 分别置于10 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，分别取供试品溶液各20 μL 进样，以峰面积对浓度作标准曲线，见图1。

图1 对胍基苯甲酸盐酸盐标准曲线Fig.1 Standard curve of 4-guanidinobenzoic acid hydrochloride

以峰面积对浓度作线性回归，得回归方程y =7.346x + 2. 502 9，R2= 0. 999 3。可见在2 ～30 μg/mL 范围内，峰面积与浓度线性关系良好。

2 结果与讨论

2.1 精密度实验

精密量取对胍基苯甲酸盐酸盐对照品溶液，按上述色谱条件，分别重复测定5 次，结果见表1。

表1 精密度实验结果Table 1 Results of precision experiment

由表1 可知，对胍基苯甲酸盐酸盐峰面积的RSD 值为1.35%，表明仪器精密度良好。

2.2 重现性实验

精密称取同一批样品5 份，按供试品溶液制备方法平行处理并测定，结果见表2。

表2 重现性实验结果Table 2 Results of reproducibility experiment

由表2 可知，对胍基苯甲酸盐酸盐峰面积的RSD 值为1.52 %，表明本方法重复性良好。

2.3 稳定性实验

精密称取同一批样品制成供试液，分别于0，2，4，8，12 h 测定峰面积，结果见表3。

表3 稳定性实验结果Table 3 Results of stability experiment

由表3 可知，对胍基苯甲酸盐酸盐峰面积的RSD 值为2.44%，说明供试液在12 h 内稳定性良好。

2.4 加样回收率实验

精密称取已知含量(96.97%)的同一批对胍基苯甲酸盐酸盐样品9 份，每份约20 mg，分别精密加入一定量的对照品制备供试品溶液，按色谱条件测定，计算回收率，结果见表4。由表4 可知，回收率为99.45%，RSD=1.32%，表明加样回收结果良好。

表4 回收率实验结果(n=9)Table 4 Results of recovery experiment (n=9)

2.5 样品测定

取对胍基苯甲酸盐酸盐对照品及3 批次样品进行测定，按外标法以峰面积计算含量，见图2、图3。

图2 对胍基苯甲酸盐酸盐对照品色谱图Fig.2 HPLC chromatograph of reference of 4-guanidinobenzoic acid hydrochloride

图3 对胍基苯甲酸盐酸盐样品色谱图Fig.3 HPLC chromatograph of sample of 4-guanidinobenzoic acid hydrochloride

由图3 可知，3 批样品的含量分别为95.1%，96.5%，95.7%。

3 结论

采用HPLC 方法检测对胍基苯甲酸盐酸盐的含量，保留时间为4.688 min，与杂质峰的分离度大于1.5，分离度良好，杂质对对胍基苯甲酸盐酸盐的质量检测无干扰。在含量2 ～30 μg/mL 内，线性关系很好，精密度、重现性和稳定性良好，具有良好的准确度和重现性。适用于对胍基苯甲酸盐酸盐工业生产的质量控制。

［1］ 赵亚南，纪亚忠，吕加国，等. 顶体蛋白酶抑制剂4-胍基苯甲酸盐对人精子功能的影响［J］. 第二军医大学学报，2000，21(12):1149-1151.

［2］ 袁德祥，刁筱辉.4-羰基乙氧苯基-4-胍基苯甲酸酯盐酸盐对人精子顶体蛋白酶活性的影响［J］. 生殖医学杂志，1992，1(1):38-42.

［3］ 赵煜松，曾海霞. 对胍基苯甲酸盐酸盐质量标准研究［J］.河北化工，2012，35(1):26-28.

［4］ 国家药典委员会.中国药典:二部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.