石蔚华 陈蓝 曹琦蕾 张丽萍 林芳 邓同乐

摘 要：在一般生药学教学中，显微观察是一种用以鉴定生药真伪和纯度的一种重要方法，通常是制作临时显微玻片进行观察鉴定，但是临时玻片存在长时间观察液体干燥而影响观察效果的问题。因此，该文通过探索，寻找可以长时间观察并不影响观察效果的新的制备方法，并且与临时玻片进行比较。

关键词：中药材粉末 显微观察玻片 制备方案

中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）06（c）-0231-01

中药材粉末显微鉴定是利用显微镜来观察生药的组织碎片、细胞形状及内含物的特征，用以鉴定生药的真伪和纯度的一种重要方法，同时通过显微观察药材特有的细胞、内含物等是保证临床用药安全有效的关键环节[1]。通过观察玻片标本，可以验证已学知识，加深理解，便于记忆，提高学习效果。玻片标本按保存时间分为临时玻片标本和永久玻片标本[2]。该文通过摸索制作粉末永久性玻片，可以长时间观察不影响观察效果，对生药学教学有一定的帮助。在实验中选用大黄作为药材进行制作显微玻片。大黄草酸钙簇晶大，直径60～140 μm，草酸钙结晶的解剖学特征比较稳定，且已广泛用于生药学的鉴定研究，特别是对粉末类药材的鉴定具有十分重要的意义[3]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验中药材 大黄（购于杭州九洲大药房连锁有限公司）

1.1.2 仪器设备 打粉机，40目网筛，倒置生物显微镜（Nikon eclipse TS100），镊子，大头针，滤纸，载玻片，盖玻片，药匙，胶头滴管。

1.1.3 试剂 无水乙醇，二甲苯，甘油，中性树脂，水合氯醛试液（制作方法：取水合氯醛50 g，加水15 mL与甘油10 mL使溶解[4]。

1.2 方法

1.2.1 粉末的制备 先将购得的大黄放置打粉机，打粉1～2 min，将打好的粉末过40目网筛[5]，得到的粉末装于玻璃瓶，贴好标签。

1.2.2 观察粉末制备 将经上述所得的粉末一小勺药匙置于滤纸，滴加2滴无水乙醇，浸没粉末，等待至微干，可用吹风机吹干。然后再滴加2滴二甲苯溶液，浸没粉末，等待至干，可用吹风机吹干。

1.2.3 试验组观察玻片制备 将经上述操作的粉末移至载玻片，滴加3滴中性树脂，要求完全浸润粉末，用大头针将粉末与中性树脂搅拌并推平。然后直接加盖玻片，要求盖玻片置中，且不能多次改变位置。等待完全干透，大概1w左右，显微镜观察，贴标签。

1.2.4 对照组观察玻片试验

对照组包括：对照组A为水合氯醛的临时观察片，取制得的少量大黄粉末置于载玻片，滴加2至3滴现配制的水合氯醛试液，浸没粉末，然后直接加盖玻片观察。

对照组B为取少量制得的大黄粉末置于滤纸，滴加2至3滴水合氯醛试液，浸没粉末，等待至微干。与1.2.3步骤相同，显微镜观察。

2 结果与分析

2.1 观察的结果 在显微镜（×400）进行观察

新制备的玻片显微观察草酸钙簇晶均清晰可见，对照组A的清晰度较高，且视野颜色较深，对照组B视野颜色较浅，且与实验制备方法所的的玻片存在有少量气泡。

2.2 实验放置1w后观察

对照组A明显失水，完全丧失观察效果。对照组B放视野仍清楚，但是有少量气泡，1w后气泡减少量少。试验组放置视野仍清楚，气泡明显不存在。

3 结语

对照组A所得的临时玻片，观察清楚，但是长时间后失水丧失观察效果，因此适合较短时间观察，不易保存。对照组B采用水合氯醛浸润，干燥，中性树脂封片，观察效果较好，但是存在水合氯醛干燥时间较长，会产生明显有刺激性气味，干燥不彻底则与树脂封片造成糊化，影响观察。

试验组所采用的先用无水乙醇浸润，干燥，然后二甲苯浸润，干燥，最后中心树脂封片，虽然操作较复杂，但是干燥时间快且方便，不会产生糊化现象。另外，制备初期仍有气泡產生，但由于无水乙醇有很强的消泡作用，静置一段时间后，气泡会明显消失，有利于玻片的观察。二甲苯是很好的溶剂，具有透化作用，增强中性树脂封片作用。二甲苯为无色透明液体，具有一定的毒性和致癌性。实验操作时注意的安全防范和通风操作。

该文的制备方法适用于其他中药材，具有普遍意义。因此可用本文制备方法用于中药材粉末显微观察，方便长时间显微观察，不影响观察效果。

参考文献

[1] 周佐林，谭华芬.253种中药材粉末显微鉴别主要特征[J].时珍国药研究，1997，8（4）.

[2] 冯玉桦.玻片标本的种类和制作[J].生物学教学，2004，29（5）.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：第二部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[4] 王皎，张顺贞.草酸钙结晶石细胞及分泌组织在中药鉴定中的应用[J].云南中医中药杂志，2007，28（8）.

[5] 王桂香.生药粉末显微鉴定的实用技术[J].卫生职业教育，2008，22（26）.