饶 毅，张五萍，魏惠珍，高 萌，金浩鑫，王跃生

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006;2.江西省人民医院，江西南昌 330006;3.江西中医药大学，江西南昌 330006;4.中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

麻杏石甘汤源自汉代张仲景的《伤寒论》，由麻黄、杏仁、石膏、炙甘草四味药组成。煎煮方法为:“上四味，以水七升，煮麻黄，减二升，去上沫，纳诸药，煮取二升，去滓。”即麻黄先煎。石膏为矿物质药，质重、坚硬、难以煎出药味的药物应先煎［1］，《中国药典》中亦规定石膏的用法为先煎［2］。《中国药典》2010年版中记载小儿清热口服液采用麻黄石膏先煎。目前对麻杏石甘汤先煎的合理性及必要性存在较大争议［3-7］，因此对目前存在的3种煎煮方法 (麻黄先煎、石膏先煎、麻黄石膏先煎)的合理性进行研究。麻黄碱、伪麻黄碱、甘草苷、甘草酸、苦杏仁苷、钙及金属元素为麻杏石甘汤主要药效成分［9-10］。本实验通过固定汤剂煎煮时间，以合煎为参照，汤剂中除Ca外的金属元素含有量较低，Mg、Zn、Mn、V含有量最高，研究通过测定各药效成分及这几种金属元素的量，从化学成分的角度考察确定最优的煎煮方法，为麻杏石甘汤临床用煎煮方式提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters2695-2996高效液相色谱仪(PDA检测器);Agilent 1100高效液相色谱仪(DAD检测器);Optima-5300DV型等离子体发射光谱仪 (美国PerkinElmer公司);Millipore-Q纯水器 (美国MILLIPORE公司);KDM型调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)。

1.2 材料 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸均由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。生麻黄、生石膏、炙甘草饮片购于北京市双桥燕京饮片厂，苦杏仁购于江中(武宁)中药饮片有限公司，经江西中医学院付晓梅教授鉴定。

Ca(钙)、Mg(镁)、Zn(锌)、Mn(锰)、V(钒)标准液，国家标准物质研究中心提供，100 μg/mL，临用时用1%HNO3(体积分数)配制成应用液。

甲醇、乙腈为色谱纯，高氯酸、硝酸为优级纯，氨水、乙醚、磷酸为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 汤剂的煎煮方法

2.1.1 麻黄先煎 称取麻黄24 g，加水1344 mL，开始煎煮，待沸腾后，调整煎煮火候至文火煎煮30 min后，再加入苦杏仁24 g、甘草24 g、石膏96 g，文火继续煎煮40 min，纱布滤过，即得。

2.1.2 石膏先煎 称取石膏96 g，加水1344 mL，开始煎煮，待沸腾后，调整煎煮火候至文火煎煮30 min后，再加入麻黄24 g、苦杏仁24 g、甘草24 g，文火继续煎煮40 min，纱布滤过，即得。

2.1.3 麻黄石膏先煎 称取麻黄24 g、石膏96 g，加水1344 mL，开始煎煮，待沸腾后，调整煎煮火候至文火煎煮30 min后，再加入苦杏仁24 g，甘草24 g，文火继续煎煮40 min，纱布滤过，即得。

2.1.4 合煎 称取麻黄24 g、苦杏仁24 g、甘草24 g、石膏96 g，加水1344 mL，开始煎煮，待沸腾后，调整煎煮火候至文火煎煮40 min，纱布滤过，即得。

2.2 麻杏石甘汤中麻黄碱、伪麻黄碱测定

2.2.1 供试品溶液的制备 精密量取麻杏石甘汤10 mL至50 mL量瓶中，加甲醇35 mL，超声30 min，放冷后，用甲醇定容至刻度，以0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密称取麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含0.051 mg麻黄碱、0.0454 mg伪麻黄碱的溶液。

2.2.3 方法学考察 对麻黄碱、伪麻黄碱进行了方法学指标考察，结果麻黄碱回归方程为y=25330x－1586，r=0.9998，伪麻黄碱回归方程为y=16525x－532.18，r=0.9999;线性范围分别为0.0510 ～2.040 μg、0.0454 ～1.8160 μg;精密度试验两者的RSD分别为0.57%、1.08%;重复性试验RSD分别为1.94%、1.24%;稳定性试验RSD分别为0.76%、0.74%;平均回收率分别为99.60%、99.03%，RSD分别为1.27%、1.96%。

2.2.4 样品测定 流动相为乙腈-0.1%磷酸(5∶95)，检测波长207 nm，柱温为室温;体积流量1 mL/min;进样体积10 μL。色谱图见图1。

图1 麻杏石甘汤中麻黄碱、伪麻黄碱测定色谱图Fig.1 Chromatograms of ephedrine and pseudoephedrine

2.3 麻杏石甘汤中苦杏仁苷测定

2.3.1 供试品的制备 精密量取煎煮液5 mL，加氨水5 mL，涡旋混合1 min，超速离心 (12000 r/min，3 min)后取上清液以乙醚洗涤2次 (每次10 mL)，弃去醚层，将水层置氮气流下吹干，残渣加甲醇1 mL溶解，超速离心后取上清液，即得。

2.3.2 对照品的配制 精密称取苦杏仁苷对照品适量，用甲醇配制为每1 mL含0.0431 mg苦杏仁苷的溶液。

2.3.3 方法学考察 对苦杏仁苷进行了方法学指标考察，结果苦杏仁苷回归方程为y=28837x－1305，r=0.9999，线性范围分别为0.0431～1.724 μg;精密度试验RSD为1.06%;重复性试验RSD为1.37%;稳定性试验RSD为0.83%;平均回收率为98.75%，RSD为2.97%。

2.3.4 样品测定 流动相为甲醇-水 (20∶80)，检测波长207nm;柱温为室温;体积流量1 mL/min;进样体积10 μL。色谱图见图2。

图2 麻杏石甘汤中苦杏仁苷测定色谱图Fig.2 Chromatograms of amygdalin

2.4 麻杏石甘汤中甘草苷、甘草酸测定

2.4.1 供试品的制备 同麻黄碱、伪麻黄碱供试品的制备。

2.4.2 对照品的配制 称取甘草苷、甘草酸对照品适量，加70%乙醇制成每1 mL含0.02032 mg甘草苷、0.08445 mg甘草酸对照品溶液 (甘草酸对照品质量浓度=甘草酸铵对照品质量浓度/1.0207)。

2.4.3 方法学考察 对甘草苷、甘草酸进行了方法学指标考察，结果甘草苷回归方程为y=44043x+11448，r=0.9998，甘草酸为 y=137754x+466.33，r=0.9998，线性范围分别为0.0203 ～0.8128 μg、0.0845～3.37804 μg;精密度试验 RSD分别为1.29%、2.01%;重复性试验RSD分别为2.54%、2.89%;稳定性试验RSD分别为1.09%、0.74%;平均回收率分别为99.29%、100.75%，RSD分别为2.54%、2.86%。

2.4.4 样品测定 流动相为乙腈-0.1%磷酸，进行梯度洗脱 ［0 min，乙腈-0.1%磷酸 (18∶82);10 min，乙腈-0.1%磷酸 (18∶82);40 min，乙腈-0.1%磷酸 (40∶60);60 min，乙腈-0.1%磷酸(40∶60)］;检测波长237 nm;柱温为室温;体积流量1 mL/min;进样体积10 μL。色谱图如图3。

图3 麻杏石甘汤中甘草苷、甘草酸测定色谱图Fig.3 Chromatograms of liquiritin and glycyrrhetinic acid

2.5 麻杏石甘汤中金属元素测定

2.5.1 供试品的制备 精密量取麻杏石甘汤水煎液5 mL，加入硝酸-高氯酸 (4∶1)混合酸10 mL，电热套加热蒸发至无白烟，液体应澄清，冷却后用2%硝酸定容至25 mL。平行制备空白溶液，待测(所使用的玻璃仪器均在10%硝酸浸泡过夜，并用超纯水清洗)。

2.5.2 样品测定 采用ICP-AES，Ca分析波长为317.933 nm;Mg为279.077 nm;Zn为213.857 nm;Mn为257.610 nm;V为290.880 nm。对标准溶液进行测试，化学工作站自动绘制校正曲线，确认后进行样品测定。将测定值代入标准曲线中进行计算，求得待测液浓度。

2.5.3 方法学考察 对各元素进行了方法学指标考察，将Ca、Mg元素的标准贮备液配制成一系列混合标准溶液，质量浓度分别为0、0.1、1、10、20、50、100 mg/L;Zn、Mn、V元素的标准贮备液配制成一系列混合标准溶液，质量浓度分别0、0.1、1、5、10 mg/L。在选定的仪器操作下对标准工作液进行测定，工作站自动绘制工作曲线，得到各元素回归方程Ca y=12936x+3139.4，r=0.9999;Mg y=1784.7x+1417.4，r=0.9995;Zn y=3439.2x+566.29，r=0.9993;Mn y=160223x+15561，r=0.9994;V y=17409x+1762.7，r=0.9994;精密度试验RSD分别为0.78%、1.82%、0.94%、0.95%、0.95%;重复性试验RSD分别为1.72%、1.07%、2.73%、3.93%、2.06%;平均回收率分别为94.50%、95.63%、95.83%、94.44%、98.18%，RSD分别为 1.98%、1.02%、3.88%、4.56%、2.94%。

2.6 统计分析 应用SPSS 13.0统计软件对实验数据进行统计学处理。采用单因素方差分析(One-way ANOVA)对各组数据与合煎进行组组间分析比较，数据以均数 ±标准差 ()表示。

2.7 样品测定结果 见表1～2。

表1 不同煎煮方式中各药效成分的量 (n=3)Tab.1 Active components amount of different herbs decocted first(n=3)

表2 不同煎煮方式中5种元素的量 (n=3)Tab.2 Five trace elements’content of different herbs decoted first(n=3)

3 讨论

3.1 麻黄的药效成分之一伪麻黄碱难溶于水［11］，先煎有利于伪麻黄碱的溶出［6］。通过对4种煎煮方法的比较得到:麻黄先煎与麻黄石膏先煎，都有利于麻黄碱、伪麻黄碱成分的溶出。前3种煎煮方法与合煎相比，对甘草苷、甘草酸、苦杏仁苷的溶出量影响不大。

3.2 ICP-AES［12］具有多元素同时测定、速度快及线性范围宽等优点，是中药金属元素通常使用的检测方法。从表2可见，麻黄石膏先煎中金属元素量最高，表示麻黄石膏先煎最有利于金属元素的溶出，可能由于麻黄石膏先煎有利于麻黄碱与Zn2+、Mn2+等金属离子形成了金属络合物，从而增加了5种元素的溶出量［13］。

3.3 本实验结果表明麻黄石膏先煎有利于麻黄碱、伪麻黄碱的及金属元素的溶出。由于各元素来源广泛，含有量较低，造成研究较为困难，特别是体内研究本体干扰大。整体而言，目前对各元素在中药中发挥的作用研究偏少，造成各元素发挥的具体作用机制尚不明确。本实验从化学成分量的角度分析了麻黄石膏先煎的合理性，为研究麻杏石甘汤中无机元素与疗效之间的内在联系提供参考，为麻杏石甘汤临床使用提供参考依据。

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