李 梅，王 静（重庆市公共卫生医疗救治中心检验科 400036）

在全球范围内，获得性免疫缺陷综合征（AIDS）病例及其所致的死亡不断增加，已经成为十大主要死因之一。控制HIV／AIDS流行是目前世界各国面临的一项十分重要的任务［1］。人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV－1）属于单股正链核糖核酸（RNA）逆转录病毒科慢病毒亚科，是艾滋病的主要病原体，主要传播途径为性传播、血液传播和母婴传播。HIV抗体检测是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。细胞培养（病毒分离）、P24抗原检测、定量核酸检测（也称HIV病毒载量检测）可作为辅助手段使用。定量核酸检测可测定外周血的病毒含量，相对于其他辅助手段更敏感、便捷，可用于早期HIV－1感染辅助诊断，也广泛用于研究HIV的感染过程、随防HIV的疾病进展和药物疗效的评价。

尽管已有HIV－1核酸定量检测试剂盒获得国家批文并用于临床检验，但国产试剂盒在检验的灵敏度和结果的一致性跟进口试剂仍存在差距，开发高灵敏度和准确性的试剂盒值得深入开展。本研究拟对一种新开发的HIV－1核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光探针法）进行临床评价，比较其和已被SFDA批准的同类检测试剂的灵敏度和检验结果一致性。

1 材料与方法

1．1 材料 本研究选取了本实验室收集的不同 HIV感染状态样本共247例，其中包括207例HIV－1感染者样本，干扰组样本32例，健康者样本8例。

1．2 试剂与仪器

1．2．1 被评估试剂 为国内正在研制的一种HIV－1核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光探针法，后面简称考核试剂），实验主要仪器有QIAcube全自动核酸纯化仪和Rotor－Gene Q实时荧光定量PCR分析仪。检测线性范围：5．0×102～1．0×107copy／mL。

1．2．2 对照试剂 为已被SFDA批准并已在临床试用的该公司生产的“HIV－1核酸定量检测试剂盒（RT－PCR－荧光探针法）”，检测线性范围为5．0×102～1．0×106copy／mL。

1．2．3 复核试剂 为“HIV－1型核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光法）COBAS®AmpliPrep／COBAS®TaqMan®HIV－1Test，version 2．0”（美国 Roche Molecular Systems，Inc，批号：R00002），检测线性范围为20～1．0×107HIV RNA copy／mL。

1．3 研究方法 用考核试剂和对照试剂同时检测血液样本，比较两试剂的结果一致性。若检测结果不符合（阴阳性不符、定量值在线性范围内且定量结果lg值差大于1的样本），则该样本进一步用复核试剂检测，并以复核检测结果为标准。所有检测严格按照试剂盒的说明书标准步骤进行。

1．4 统计学方法 采用Excel和SPSS11．0软件进行统计分析，两种方法检测结果的一致性比较采用Kappa检验，并计算Youden指数、以1－Specificity的值为横坐标，以Sensitivity值为纵坐标绘制ROC曲线。使用Bland－Altman模型评价考核试剂与对照试剂定量检测结果的一致性。检验水准α＝0．05。

2 结 果

2．1 考核试剂与对照试剂检测结果对比 如表1所示，考核试剂与对照试剂检测结果239例阴阳性一致，8例阴阳性结果不一致：均为考核试剂检测为阳性、但定量值均低于考核试剂定量线性范围下限（≤5．0×102copy／mL），而对照试剂检测为阴性。两种试剂检测的阳性符合率为100．00%，阴性符合率为84．62%，阳性预期值PPV为96．06%，阴性预期值NPV为100．00%，一致率为96．76%。

表1 考核试剂与对照试剂盒检测结果比较（n）

247 例样本中，除上述8例阴阳性结果不一致外，尚有6例样本其考核试剂与对照试剂定量结果均处于线性范围但其对数值差大于1。这14例不符样本经复核试剂的复检结果显示：8例阴阳性不符样本经复检后均为阳性，但其病毒量均小于或等于5．0×102copy／mL；6例考核试剂与对照试剂定量检测结果对数值差大于1的样本经复核试剂复检后，定量结果均与复核试剂结果接近，定量结果对数值差小于1。对14例考核试剂与对照试剂不符样本用复核试剂进一步确认后，考核试剂盒与对照试剂／复核试剂检测性能比较如下，见表2。考核试剂与复核试剂的阳性符合率、阴性符合率、阳性预期值、阴性预期值和一致率均达到100．00%。

表2 考核试剂与对照试剂／复核试剂结果比较（n）

对247例样本考核考核试剂盒与对照试剂／复核试剂检测结果进行统计分析，其Kappa值为1．0、Youden指数为1．0、ROC曲线如图1所示，ROC曲线下面积为1．0。

图1 考核试剂检测结果的ROC曲线

2．2 定量相关性、定量准确性及一致性 选择考核试剂盒与对照试剂定量线性范围内（不剔除高于定量范围上限样本）177例样本检测结果进行定量相关性、定量准确性及一致性统计分析。统计分析表明，考核试剂与对照试剂／复核试剂的相关系数为：r＝0．967 1（P＜0．05，图2）。以考核试剂与对照试剂定量值对数值均值为横坐标、差值为纵坐标做散点图（经复核样本用复核试剂检测结果为标准进行统计分析），结果见图3。Bland－Altman模型显示其一致性界限LoA及其95%置信区间为：－0．481（－0．513 ～ －0．449）～ 0．501（0．469～0．533）；经统计95%的差值位于一致性界限以内，且LoA不超过专业上可接受的界限值：1lg。

图2 考核试剂与对照试剂／复核试剂定量相关性

图3 考核试剂盒Bland－Altman模式一致性分析图

3 讨 论

艾滋病作为一种严重危害人类健康的疾病，目前尚无有效的预防性疫苗，因此，其防控尤为重要［2］。其病原体HIV感染的相关检测主要包括HIV抗体检测、HIV抗原检测、HIV核酸检测、HIV－1耐药性检测、CD4＋／CD8＋淋巴细胞检测等［3］。对HIV感染者及艾滋病患者进行HIV病毒载量检测是评价疾病进展、确定治疗开始时间、监测高效抗反转录病毒治疗疗效的重要指标，在婴儿早期诊断及感染窗口期诊断中具有重要的辅助诊断价值［4］。病毒载量定点水平大于或等于104copy／mL者快速发展为艾滋病的危险性增加10．8倍［5］。

本次研究共检测247例样本，233例考核试剂与对照试剂检测结果一致、14例检测结果不一致者经复核试剂检测确认后，均与考核试剂检测结果一致，显示考核试剂具有较好的检测敏感性和准确性，检测性能优于对照试剂，可接近进口的国际公认试剂的水平。本研究表明，艾滋病患者样本定性和定量检测结果的不一致时，应考虑不同种试剂的有效定量检测范围和其检测灵敏度。有报道表明，经过抗病毒治疗2～8周后，艾滋病患者样本血浆中病毒载量降低约10倍，16～24周后会降低到测不出的程度［6－7］。在病毒载量较低时，不同试剂盒加样量的不同会直接导致检测敏感性的差异［8］。对治疗后病毒量较低或者检测不出的标本，应结合临床采用各种检测手段监测。

经临床研究表明，被评估的HIV－1核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光探针法）与已经上市的国内外同类产品在人血浆或血清样本中的HIV－1RNA的定量测定功能上具有等效性，可用于人类免疫缺陷病毒的早期诊断、疑难样本的辅助诊断、艾滋病的病程监控及预测、以及指导抗病毒治疗及疗效判定。

［1］尚红．中国艾滋病流行和检测及治疗现状与发展趋势［J］．中华检验医学杂志，2008，31（10）：1088－1090．

［2］ 张宏萍．三种方法筛查HIV抗体的比较［J］．上海预防医学，2012，24（3）：155－159．

［3］ 董雪，赵曦，里天初，等．中国三版艾滋病检测技术工作规范的对比分析［J］．中国艾滋病性病，2010，16（6）：595－598．

［4］ 彭巧丽，李美忠，蒋强，等．不同HIV－1病毒载量定量检测方法的比较研究［J］．中国艾滋病性病，2011，17（1）：4－7．

［5］ 李敬云．HIV早期感染诊断方法与应用［J］．传染病信息，2007，20（6）：352－356．

［6］ 王夏，唐力，刘满清，等．武汉市艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗效果分析［J］．中华疾病控制杂志，2010，14（3）：212－214．

［7］ 彭瑾瑜，贺建梅，邹潇白，等．接受抗病毒药物治疗艾滋病患者体内病毒数量变化研究［J］．中实用预防医学，2010，17（4）：644－646．

［8］ 李繁，蒋岩，王天怡，等．某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估［J］．中华疾病控制杂志，2013，17（7）：605－608．