文∕刘 琴 成玉梅 周亚平 张利坤 李 春 施开平

（1云南省昆明市动物卫生监督所；2云南省昆明市奶业协会）

近年来，我国奶牛生产性能（DHI）测定工作不断深入，参测牛只数量每年呈上升的趋势，这一方面是由于国家对该项工作的重视，不断加大投入；另一方面是奶牛场（奶农）对DHI测定工作的重要性认识不断加强，自觉参加测定。DHI测定工作的意义不仅体现在全国层面上种公牛的选育上，而且体现在为奶牛场奶牛饲养管理提供理论依据和数据支撑，因此数据的准确性意义重大。云南省昆明市自2009年开展DHI测定工作以来，参测奶牛累计达到3 万余头，成效显著。但是由于奶牛场分布较广，送样时间较长，数据的准确性会受到样品保存条件（温度）和时间的影响。为探讨生鲜乳样品保存条件对DHI测定结果的影响，为DHI采样工作提供依据，昆明市动物卫生监督所与昆明市奶业协会通过对样品在常温和冷藏条件下连续测定，研究了不同保存条件和时间对DHI测定结果的影响。具体结果如下。

1 仪器和材料

1.1 仪器

CombiFoss™ FT+牛奶体细胞成分联机分析仪（FOSS中国），水浴锅（北京中兴）。

1.2 样品采集与处理

在昆明市晋宁县6 个奶牛场共采集6 份样品，每份样品1 000 mL，加入防腐剂（每50 mL加入1 粒专用防腐剂，其主要成分为溴硝基丙二醇）。样品采集后分成2 份，1 份存于4 ℃，1 份存于常温。测定前水浴至42 ℃，分别检测脂肪含量、蛋白质含量、乳糖含量、体细胞数、尿素氮值，连续测定7或8 天。

2 方法

2.1 仪器校准

脂肪含量、蛋白质含量、乳糖含量采用全国畜牧总站DHI标准物质制备实验室提供的标准品定标，每月1 次，每次检测前清洗调零，并用校核样检测；体细胞数用FOSS中国的FMA校核；尿素氮自校准。

2.2 样品测定

样品42 ℃水浴加热25～30 min，测定脂肪含量、蛋白质含量、乳糖含量、体细胞数、尿素氮值5 个指标。常温保存的样品连续测定7 天，冷藏保存的样品连续测定8 天。

2.3 数据分析

用EXCEL 2007 进行数据处理，用SPSS 16.0 进行配对T检验，以0.05为显著性判定标准。

3 结果

3.1 保存条件对脂肪含量的影响

不同保存条件对脂肪含量的影响均不明显。6 个样品连续测定7 天脂肪含量情况见表1、表2，连续测定值与第1天测定结果的T值见表3。从表3可以看出，2 种保存条件连续测定结果与第1天的T值均大于0.05，表明差异不显著。常温条件下，脂肪含量的变化幅度较大，6 个样品7 天的测定值，与第一天的绝对差均值为-0.03～0.06；而冷藏条件下，连续测定8 天，绝对差均值为-0.01～0.02，差异很小。

3.2 保存条件对蛋白质含量的影响

不同保存条件下蛋白质含量的情况见表4、表5，T值见表6。可以看出，常温保存条件下，T值均大于0.05，但检测值绝对差较大，如1号样品第7天与第1天的差值达到0.09 个百分点，4号样品第6天与第1天的差值较大，达到0.23 个百分点。而在冷藏条件下，第4天、第6天的结果与第1天有显著差异，T值分别为0.025和0.01，而其它日期的T值均大于0.05，但绝对差值较小，均在-0.01～0.03 个百分点以内。常温保存条件下，在4 天之内，6 个样品的绝对差均值在0.03 个百分点以内，而第5天之后，样品的绝对差均值都超过了0.04 个百分点。

表1 常温条件下连续7 天测定的脂肪含量 单位：%

表2 4 ℃冷藏条件下连续8 天测定的脂肪含量 单位：%

表3 保存条件对脂肪含量的影响（T值）

表4 常温条件下连续7 天测定的蛋白质含量 单位：%

表5 4 ℃冷藏条件下连续8 天测定的蛋白质含量 单位：%

表6 保存条件对蛋白质含量的影响（T值）

3.3 保存条件对乳糖含量的影响

不同保存条件下乳糖含量的情况见表7、表8，T值见表9。常温保存条件下，T值均大于0.05，差异不显著，但从数值上来看，乳糖含量差异较大，且呈降低的趋势。如1号样品第1天与第3天相差0.06 个百分点，与第7天相差0.14 个百分点；而4号样品第1天与第2天相差达到0.1 个百分点，与第6天相差0.45 个百分点，这可能与样品本身有关。在冷藏条件下，乳糖含量值变化较小，6 个样品连续测定8 天，检测值与第1天的绝对差均值在-0.01～0.02 个百分点。上述数据说明，冷藏条件下，乳糖含量值较稳定。

3.4 保存条件对体细胞数的影响

保存条件对体细胞数的影响较大，结果见表10、表11，T值见表12。常温条件下，在前3 天之内，6 个样品体细胞数绝对差均值在10 万个/mL以内；第4天以后，绝对差均值则超过了10 万个/mL；第5天后，体细胞数与第1天的结果差异极显著（T值小于0.05），体细胞数随保存时间的延长持续下降，在第7天时下降幅度接近50%。而在冷藏条件下，体细胞数相对稳定，在试验期内T值均大于0.05，表明差异不显著；连续测定8 天，6 个样品绝对差值都在15 万个/mL以内，而绝对差均值在4 万个/mL以内。

表7 常温条件下连续7 天测定的乳糖含量 单位：%

表8 冷藏条件下连续8 天测定的乳糖含量

表9 保存条件对乳糖含量的影响（T值）

表10 常温条件下连续7 天测定的体细胞数 单位：万个/mL

表11 冷藏条件下连续8 天测定的体细胞数 单位：万个/mL

表12 保存条件对体细胞数的影响（T值）

3.5 保存条件对尿素氮的影响

保存条件对尿素氮的影响见表13、表14，T值见表15。常温条件下，T值均大于0.05，表明差异不显著，但是尿素氮值忽高忽低，差异较大（1号和5号样品第1天和第3天差异达到1.4 mg/100 mL，6号样品第1天和第3天的差异达到2.5 mg/100 mL）。而冷藏条件下，第1天和第4天，第1天和第7天尿素氮测定值的T值均小于0.05，表明差异显著，但规律性不强。总体上来说，不论是常温或是冷藏条件，尿素氮指标值均不稳定，采样后要及时检测。

4 讨论

4.1 脂肪含量

常温保存时，样品脂肪含量在第2天升高，6 个样品绝对差均值最高达到0.06 个百分点，然后脂肪含量检测值逐渐下降，但规律性不强，差异不显著，可能是样品本身的问题所致。冷藏保存对样品脂肪含量的影响不大，7 天之内对检测结果的影响在0.02 个百分点之内。

4.2 蛋白质含量

常温保存情况下，连续测定7 天，样品的蛋白质含量与第1天的T值都在0.05以上；第5天时，6 个样品的绝对差均值为0.06 个百分点，说明保存期超过5 天时，差异较大。而冷藏保存条件下，第4天、第6天的结果与第1天有显著差异，T值分别为0.025和0.01，但由于第5天、第7天和第8天的差异不显著，连续测定8天，绝对差均值都在0.03 个百分点以内，说明差异可以忽略不计。

表13 常温条件下连续7 天测定的尿素氮值 单位：mg/100 mL

表14 冷藏条件下连续测定8 天的尿素氮值 单位：mg/100 mL

表15 保存条件对尿素氮的影响（T值）

4.3 乳糖含量

常温保存时，连续测定7 天乳糖含量T值都在0.05以上，但是第5天之后6 个样品的绝对差均值达到0.05 个百分点。而冷藏保存条件下，虽然在第3天时差异极显著（T值为0.01），但随后的几天内，T值均大于0.05，连续测定8 天，6 个样品绝对差均值都在0.02 个百分点以内，说明差异主要来自样品本身。

4.4 体细胞数

常温保存时，在第2天和第3天，测定的体细胞数的绝对差均值在10 万个/mL以内，第4 天后，6 个样品的绝对差均值都在10 万个/mL以上，且在第5天后检测值的T值都小于0.05，说明体细胞数变化显著。而冷藏条件下，连续测定8 天，6 个样品的绝对差均值都在5 万个/mL以内，说明冷藏条件下样品可以保存7天以上。

4.5 尿素氮

不论是常温或冷藏保存，尿素氮测定值均不稳定，规律性不强，忽高忽低，原因尚不明确。常温条件下，保存至第7天，尿素氮测定值的绝对差均值超过了2.0 mg/mL；冷藏条件下，保存至第8天，尿素氮测定值的绝对差均值也达到了2.0 mg/mL。

5 结论

5.1 常温保存条件下，样品稳定性不如冷藏条件保存，因此样品采集后应尽量冷藏保存。检测脂肪含量、蛋白质含量、乳糖含量时，如果常温保存，最好在4 天之内测定完毕，如果需要长途运输，要有冷链措施；如果冷藏保存，至少可以保存8 天以上。

5.2 保存条件对体细胞数的影响较大。常温条件下，随时间的延长，体细胞数下降，冷藏条件下也如此，但下降幅度较小。检测体细胞数时，常温保存样品要在3天之内检测，冷藏条件下可以保存至少7 天。

5.3 测定尿素氮时，由于其很不稳定，样品采集以后最好能在2 天内测定完毕；超过3 天，尿素氮指标变化可能会较大，导致结果不准确。C