黄 佳 潘 玫

葡萄胎是种良性疾病，但10%～20%可以发生恶变，成为侵蚀性葡萄胎或绒癌[1]。虽然妊娠滋养细胞肿瘤对化疗敏感，治疗效果较好，但现在发现耐药以及复发的患者治疗效果较差，这也是现今治疗妊娠滋养细胞肿瘤的难点。RECK(reversion-inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)，即伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白，被认为是新发现的1种抑癌基因，广泛存在于正常组织中，而在肿瘤组织中的表达低。我们通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RECK mRNA的表达情况，探讨RECK在葡萄胎恶变中所起的作用，以期望找到葡萄胎恶变的敏感标记物。

1 资料与方法

1.1 标本来源

标本来自江西省妇幼保健院2003年1月-2008年1月因葡萄胎住院首次清宫标本48例，患者年龄20～43岁，其中通过随诊过程中确诊为恶性葡萄胎24例、未恶变葡萄胎24例。收集同期在本院门诊行人工流产术的健康妇女早孕绒毛组织标本20例，年龄20～40岁。

1.2 实验步聚

恶变的葡萄胎组织，未恶变的葡萄胎组织及正常早孕绒毛组织均在液氮中保存。取0.5 g 组织，应用TAKARA 公司的RT-PCR 试剂盒。25 μl 体系：H2O 16.5 μl；10× buffer 2.5 μl；MgCl23 μl；dNTP 0.5 μl；引物(+) 0.5 μl；引物(-) 0.5 μl；Taq 酶 0.5 μl；cDNA 1 μl。反应条件：94 ℃,30 s;57 ℃,30 s;72 ℃,30 s。共30个循环。引物设计见参考文献[1]及国际互联网cDNA 文库。RECK 基因(477 bp)： 上游引物：5'-CCTCAGTGAGCACAGTTCAGA-3'，下游引物：5'-GCAGCACACACACTGCTGTA-3'，管家基因GAPDH(346 bp)用于内对照。2%琼脂糖凝胶电泳后，采用生物图像分析仪检测密度。将目的基因的亮度值与同一标本的管家基因GAPDH 的亮度值作比，求出其相对表达量。比较恶变的葡萄胎组织，未恶变的葡萄组织及正常早孕绒毛组织目的基因相对表达量有无区别。

1.3 统计学方法

2 结果

RECK mRNA 在恶变葡萄胎组织中的表达水平(0.326±0.031)明显低于未恶变葡萄胎组织中的表达水平(0.436±0.053)和正常早孕绒毛组织中的表达水平(0.453±0.025)(P<0.01)，而在未恶变葡萄胎组织和正常绒毛组织中RCEK mRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

在正常妊娠早期，滋养细胞侵袭母体的特征与恶性肿瘤细胞非常类似，但有一个自限性。而变成肿瘤的滋养细胞却在母体内不断造成破坏,甚至导致母体死亡。研究表明,RECK的抑癌作用主要是通过抑制肿瘤血管生成，并且与抑制基质金属蛋白酶(MMP)家族密切相关[2]。RECK在早孕胎盘的表达最低，足月妊娠时表达最高，这与妊娠过程中滋养细胞侵蚀能力正好相反，说明RECK可能起了抑制滋养细胞侵蚀能力的作用。此外还有研究表明RECK过表达,可明显减少早孕绒毛外滋养细胞侵袭能力[3]。我们先前的研究也表明在葡萄胎中RECK与MMP的表达呈负相关[4]。但是仅依靠定性的方式只能提示差异，只能说明葡萄胎恶变的可能。因此本研究开始定量测定RECKmRNA的表达水平，发现在恶性葡萄胎组织中的表达水平明显低于未恶变葡萄胎组织，与我们先前的研究相一致。所以我们推测在葡萄胎的恶变过程中，RECK表达减少起到了一定的作用。当然我们还需要更多的样本数量以及更精确的定量方法，以便找出1个定量参考范围应用于临床诊断。

[1] 丰有吉，沈 铿，马 丁，等.妇产科学(供八年制及七年制临床医学等专业用)〔M〕.北京：人民卫生出版社,2005：351-355.

[2] 郭君红,邹 丽.调控RECK 基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2 活化及细胞侵袭力的影响〔J〕.华中科技大学学报(医学版),2007,36(4):495-499.

[3] Oh J,Takahashi R,Kondo S,et al.The membrane-anchored MMP inhibitor RECK is a key regulator of extracellular matrix integrity and angiogenesis〔J〕.Cell，2001,107(6):789-800.

[4] 黄 佳，潘 玫.RECK、MMP-2在葡萄胎组织中的表达及其意义〔J〕.南昌大学学报(医学版)，2010,50(5)：20-22.