王宏

全自动加样器阳性拖带现象的分析

王宏

目的 通过倍比稀释, 确定区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度范围。方法 用HAMILTON Microlab AT Plus 2 全自动加样器对经倍比稀释的anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)加样, 进行ELISA检测, 通过对引起阳性拖带现象的强阳性标本临界滴度和不引起阳性拖带的普通阳性标本临界滴度的比较, 找到能区别两者的临界滴度范围。结果 区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度范围为1:2048~1:4096。结论 能够区别anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)的临界滴度是存在的, 并可通过将疑似阳性拖带的标本按照临界滴度倍比稀释后所得结果来快速判断是否是阳性拖带, 这在血液检测工作中具有一定的实际意义。

全自动加样器；阳性拖带；酶联免疫吸附试验；倍比稀释；临界滴度

1 材料与方法

1.1 标本来源 2012年8月~11月长春地区无偿献血者。

1.2 试剂 丙肝抗体ELISA检测试剂盒(厦门新创, 批号201206065815), 试剂批件合格, 并在有效期内使用。

1.3 仪器 HAMILTON Microlab AT Plus 2 全自动加样器, HAMILTON Microlab FAME全自动酶免处理系统。

1.4 方法

1.4.1 倍比稀释 对anti-HCV强阳性标本和普通阳性标本(不发生阳性拖带)进行1:2、1:4、1:8、1:16倍比稀释。

1.4.2 加样

1.4.2.1 强阳性标本的加样 根据检测项目和试剂说明书的要求, HAMILTON Microlab AT Plus 2控制微机上编制加样程序, 由加样器自动加样。在强阳性标本所在行的下一行每个孔内加入2 ml正常标本。

1.4.2.2 普通阳性标本的加样 同1.4.2.1。

1.4.3 酶免反应 将加完样的酶标板放入Microlab FAME,自动进行ELISA检测并判读结果。

2 结果

在对血液的酶联免疫检验中, 用电脑控制的全自动加样系统来处理样本, 可以快速、准确及分配一致性的处理大量样本, 避免了人工加样的误差。但因使用非一次性加样针,在加样过程中遇到高浓度抗原、抗体标本, 可能会出现对其后几孔的连续污染, 即阳性拖带现象。现通过倍比稀释不同浓度标本并用ELISA检测的方法对此现象进行分析如下, 具体见1。

2.1 引起阳性拖带的强阳性标本和其下一行正常标本的实验结果, 三个强阳性标本造成了不同程度的阳性拖带现象。

表1 强阳性、普通阳性与被拖带标本进一步倍比稀释所得的OD值

2.2 不引起阳性拖带的普通阳性标本的实验结果, 在相同滴度条件下, 强阳性标本的OD值大于普通阳性标本, 这说明能引起阳性拖带现象的标本所含的anti-HCV含量高于不引起拖带的标本。进一步对强阳性标本和普通阳性标本进行倍比稀释实验结果, 在同样两个相邻滴度间, 强阳性标本OD值的下降幅度大于普通阳性标本。

2.3 对10个不同滴度的强阳性标本和普通阳性标本的OD值进行秩和检验, 实验结果可以看出, 在滴度为1:2048~1:4096之间, 6

3 讨论

如果在对血液标本的检测中将因拖带污染而形成的假反应性标本误判为反应性不但会造成宝贵血液资源的浪费, 同时还会给献血者带来巨大的心理压力, 对广大自愿者的积极性带来巨大的负面影响。因此设法减少甚至避免阳性拖带现象的发生成为了一个值得让检验人员关心的问题［1］。找到造成阳性拖带的强阳性标本和不同阳性标本的区别方法, 不仅能够有效地减少再检次数, 节约试剂, 还能做到能迅速判断拖带现象并减少因拖带导致的误检。

能引起阳性拖带现象的anti-HCV标本和通常的阳性标本相比, 含有更高浓度的抗体, 因此这些标本能对下一行的标本形成拖带污染。而其在经过倍比稀释后, 所含抗体浓度下降的趋势和普通阳性标本也有不同［2］。在起初的几个滴度下, 强阳性标本所含抗体浓度下降比普通阳性标本更为明显。而随着稀释倍数的增大, 两者的OD值开始相对的逐渐接近,当达到能区别它们的临界滴度时, 强阳性标本和普通阳性标本的OD值最为接近。继续稀释, 当滴度超过这个临界滴度时, 由于普通阳性标本所含抗体浓度已达到阴性值, OD值有了较大的下降。因此通过这些可以大致确定临界滴度的范围。

同时本试验有很多不足之处, 如引起拖带的强阳性标本量少, 统计学计算结果与真实情况相比难免有些误差, 在今后的学习研究中要尽量减少这种情况。

［1］ 闫晓鹏,李雪英,王文莉.ELISA检测中全自动加样引起拖带污染现象的原因分析及对策.中国现代药物应用, 2011, 5(13): 136-137.

［2］ 张国强,徐力东,毛秀军.抗-HCV阳性标本隔批拖带引起S/ CO值升高结果分析,中国输血杂志, 2011, 24(6):511-512.

130000 长春市中心血站