吴干斌，周建华，刘科兰

郑州大学第二附属医院药学部 郑州 450014

河南汉族冠心病患者CYP2C19基因多态性分布

吴干斌△，周建华，刘科兰

郑州大学第二附属医院药学部 郑州 450014

△男，1967年9月生，硕士，副主任药师，研究方向：临床药学，E-mail:wganbin521@sina.com

CYP2C19；基因多态性；氯吡格雷；河南省；冠心病

目的：研究河南冠心病患者氯吡格雷代谢相关基因CYP2C19基因多态性的分布。方法采用PCR-RFLP技术检测600名来自河南的冠心病患者CYP2C19的基因型。结果CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。结论河南省人群CYP2C19基因多态性的分布与全国其他地区基本一致。

冠心病患者在进行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后多服用氯吡格雷和阿司匹林。已有研究[1]表明这一处理可降低心血管事件的发生率以及支架内血栓形成的风险,但在术后长期随访中发现部分患者仍有血栓性事件的发生，即氯吡格雷抵抗现象[2-4]。已发现氯吡格雷抵抗与CYP2C19基因的多态性有关[5]。CYP2C19是一种重要的药物代谢酶,参与多种药物的体内代谢，是CYP2C超家族成员之一,主要参与氯吡格雷、奥美拉唑、丙戊酸、苯妥英等药物的代谢;CYP2C19具有遗传多态性且在不同人群中具有较大的差异,这种多态性是由于该酶的编码基因发生突变而导致酶的活性异常,引起不同人群、不同个体对药物的代谢能力下降或增强,影响相关药物的体内代谢及疗效[6-7]。作者对河南地区无血缘关系、拟行PCI的600份汉族冠心病患者的血样进行CYP2C19基因型检测和分析，为临床医师使用氯吡格雷类药物提供参考。

1 对象与方法

1.1研究对象郑州大学第二附属医院2012年12月至2013年7月诊断为冠心病、拟行PCI手术的600名河南地区、无血缘关系的患者。所有患者均否认家族遗传病病史，汉族，年龄35～74岁，男415例，女185例。

1.2试验仪器与试剂全自动杂交仪(上海百傲科技有限公司，型号BR526-24)，生物芯片识别仪(上海百傲科技有限公司，型号BE-2.0)，PCR仪(美国AB公司，型号ABI9902)，高速离心机(德国Eppendorf公司，型号5424R),医用冷藏箱(青岛海尔公司，型号HYC-260),DNA提取试剂盒、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、内切酶及蛋白酶K等(上海百傲科技有限公司)。

1.3PCR-RFLP取1 mL EDTA抗凝外周血,提取DNA。根据基因数据库中SNP的序列信息，由上海百傲科技有限公司提供设计软件及试剂进行在线扩增。PCR反应总体系为25 μL，基因组DNA为5 μL，引物、Taq DNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP、内切酶等共计20 μL。反应条件：95 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环； 72 ℃延伸5 min，结束扩增。取扩增产物10 μL加入到180 μL杂交缓冲液中，并依次加入抗体等试剂进行在线杂交、显色，确定芯片基因型。

1.4检测基因分型采用上海百傲科技有限公司提供的分型系统将PCR扩增产物严格按照其提供的标准操作流程进行相关操作，通过杂交仪采用单碱基延伸结合微阵列芯片法对位点进行检测，最后通过扫描仪读出相对应的基因型。根据上海百傲科技有限公司的分型标准将该等位基因的野生纯合子定义为*1/*1型，单突变型定义为*1/*2型和*1/*3型，突变纯合子定义为*2/*2型和*3/*3型，双突变杂合子定义为*2/*3型。另将*1/*1型定义为强代谢型，*1/*2和*1/*3型定义为中间代谢性，*2/*2、*2/*3和*3/*3型定义为弱代谢型。

1.5数据处理将所获数据作Hardy-Weinberg平衡检验，采用χ2检验比较不同性别间各基因型分布的差异，检验水准α=0.05。

2 结果

通过计算检测符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.141，P=0.372)。各种基因型生物芯片识别图见图1。CYP2C19*1/*1占42.6%、CYP2C19*1/*2占40.9%、CYP2C19*1/*3占6.5%、CYP2C19*2/*2占7.2%、CYP2C19*2/*3占2.5%、CYP2C19*3/*3占0.3%。不同性别各基因型的分布频率见表1。由表1可知，不同性别间各等位基因的频率差异无统计学意义(χ2=2.952，P=0.064)。不同性别各代谢型基因的频率分布见表2。由表2可知，不同性别间各代谢型基因的频率差异无统计学意义(χ2=2.693，P=0.157)。

图1 基因型生物芯片识别图

表2 各代谢型基因的频率分布 例

3 讨论

目前，阿司匹林联合氯吡格雷已成为PCI术后抗血小板聚集、溶栓治疗的基石。但由于阿司匹林抵抗和氯吡格雷抵抗的存在，仍有一部分患者在术后一段时间内会发生心肌梗死、猝死等不良心血管事件[8]。

随着药物基因组学的发展，药物代谢酶的基因多态性研究在临床中的指导意义越来越大,基因导向个体化治疗已在临床应用。研究[5]表明，氯吡格雷抵抗与体内CYP2C19基因的多态性有关。CYP2C19基因所编码的蛋白酶位于肝微粒体内。现已发现CYP2C19*1～CYP2C19*25等多个等位基因，编码正常酶活性的基因是CYP2C19*1，而突变等位基因或是影响酶的催化活性或是影响酶蛋白的表达,CYP2C19*2和CYP2C19*3为CYP2C19最常见的酶缺陷型突变等位基因,可解释99%的东方人弱代谢者及88%的白种人弱代谢者[9]。1994年，de Morais等[10]发现了CYP2C19两个等位基因的突变位点，分别命名为CYP2C19外显子5突变型和CYP2C19外显子4突变型。

该研究结果显示，河南地区拟行PCI的冠心病患者中，CYP2C19*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3和*3/*3型的分布频率分别为42.6%、40.9%、6.5%、7.2%、2.5%和0.3%，并且各个基因型在不同性别间差异无统计学意义。强代谢型(野生纯合子)占42.6%，而中代谢型(单突变)和弱代谢型(双突变)占57.4%，也就是说在河南地区的患者中有近60%的人会存或轻或重的氯吡格雷抵抗现象，这比相关文献[11]报道的50.6%高，与另一文献[12]报道的54.3%较为接近；其中单突变频率达到了47.4%，与文献[13]报道的44.0%比较接近；双突变占10.0%，与文献[11,14]报道的11.6%和11%很接近。此外，该研究结果还显示CYP2C19基因型中弱代谢型占10%，低于蒙古族(33.3%)、黎族(15%)、独龙族(11.2%)及布依族(10.2%),但高于苗族(9.2%)、土族(9.0%)以及维吾尔族(4.17%)等[15]，考虑是地理环境的差异或样本量较少所致。

总之，CYP2C19基因多态性在河南地区人群中分布比较普遍，且突变率较高。因此作者建议河南地区的医务工作者在对相关患者进行治疗时要重视该酶的基因分型，可以在允许的条件下进行CYP2C19基因分型的检测，参考检测结果进行治疗用药的选择和剂量的增减，达到个体化用药的目的，以降低术后心血管事件的发生概率，提高患者的生活质量。同时建议地方政府和国家相关部门尽快建立相应的基因型数据库以及基因多态性与药物代谢的关系库，以便广大医护人员利用资源更好地为患者服务，真正为患者做到“量体裁衣”，个体化给药。

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(2013-08-27收稿 责任编辑徐春燕)

Distribution of CYP2C19 genetic polymorphism in patients of Han nationality with coronary artery disease from Henan Province

WUGanbin,ZHOUJianhua,LIUKelan

DepartmentofPharmacy，theSecondAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014

CYP2C19；genetic polymorphism；clopidogrel；Henan Province；coronary artery disease

Aim: To survey the genetic polymorphism of CYP2C19 gene in the patients with coronary artery disease from Henan Province. Methods: The CYP2C19 genotypes of 600 patients with coronary artery disease from Henan Province were determined by PCR-RFLP. Results: The frequencies of CYP2C19*1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and *3/*3 were 42.6%,40.9%,6.5%,7.2%,2.5% and 0.3%,respectively. Conclusion: There are no significant differences in the distribution of CYP2C19 polymorphism between Henan and other areas of China.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.04.036

R969.1