姚彩云，宋志军，李汉浠，黄 健，王 硕

（西南濒危药材资源开发国家工程实验室 广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023）

忍冬科忍冬属(Lonicera)植物约有200种，其中许多品种的花或花蕾在中国民间作为金银花入药，其藤茎做为忍冬藤入药，具有抗炎解热、抗菌和抗病毒等功效。《中华人民共和国药典》2010年版规定忍冬科忍冬属植物忍冬（Lonicera japonicaThunb.）的干燥花蕾或带初开的花为金银花（Flos Lonicerae）的唯一来源；山银花却属于多基源中药，红腺忍冬（L.hypoglaucaMiq）为山银花的基源植物之一。[1]金银花和山银花具有相同的药理药效，其药性甘，寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒，疏散风热药效。用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热。[1]金银花的化学成分研究比较深入，主要有绿原酸（chlorogenic acid）、异绿原酸（isochlorogenic acid）、咖啡酸（caffeic acid）、木犀草素(luteolin)、芳樟醇(linalool)、双花醇及环烯醚萜苷等成分，[2-4]但是山银花的化学成分研究报道不多，亟待加强研究。

红腺忍冬（Lonicera hypoglaucaMiq.），又名毛柱忍冬，[5]分布于越南北部以及中国大陆的东南西南一带，在广西有广泛的栽培。在广西民间常作为山银花入药，主要用于清热解毒，抗感冒，解暑。贺清辉等对红腺忍冬藤茎的化学成分有过报道，[6-7]但是其花的化学成分未见报道。为了促进该植物开发利用，探索其活性物质基础，我们对采自广西马山县古蔺镇的红腺忍冬花及花蕾进行了化学成分的研究，从中分离鉴定了6个化合物。

1 实验部分

1.1 材料来源

植物来源，采自广西马山县红腺忍冬种植基地的红腺忍冬（Lonicera hypoglaucaMiq）花蕾及初开的花，经广西药用植物园吴庆华教授鉴定为红腺忍冬，其标本（GXMI 024673）保存在广西壮族自治区中医药研究所。

1.2 仪器及试剂

Sephadex LH-20凝胶(Pharmacia公司)；薄层层析(GF254)和柱层析硅胶(160～200和200～300目)为青岛海洋化工厂产品。实验中所用到的石油醚、甲醇、丙酮、氯仿等溶剂均为AR级，为天津富宇化工有限公司产品。

600兆核磁共振仪（Varian-600 MHz NMR Spectrometer）、液-质联用仪(Varian 320-MS)、分析型高效液相色谱仪(Varian 210)、制备型液相色谱仪（Varian Preparative HPLC 218）、旋转薄膜蒸发仪（N-1100D-WD）。

1.3 提取与分离

粉碎后的干燥药材1kg通过85%乙醇提取浓缩，得到乙醇提取物（82g），乙醇提取物分散在热水（含乙醇20%）中，经石油醚萃取除脂后，以乙酸乙酯萃取得到27g提取物。乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(50：1～1：1)梯度洗脱，TLC检测合并相似部位得到五部分。第一部分主要为低极性脂肪酸等，弃去。第二部分经LH-20凝胶柱层析甲醇洗脱，再结合ODS-C18反相制备HPLC或硅胶Flash柱层析，最后经重结晶分离纯化，得到化合物3(12mg)、4(8mg)；第三部分经反相柱层析，以甲醇-水（5%～95%）梯度洗脱，结合小LH-20凝胶柱层析得到化合物1(23mg)和2(18mg)；第四部分经LH-20凝胶柱层析以甲醇洗脱，后经甲醇溶解，浓缩，冷冻结晶，得到化合物5；（12mg）第五部分经LH-20凝胶柱层析甲醇洗脱，TLC检测合并后，经制备高效液相色谱，得到化合物6（5mg）.

2 结果与讨论

2.1 化合物1：豆甾醇

化合物1，白色针状晶体（石油醚-乙酸乙酯），易溶于氯仿、二氯甲烷，紫外不显色，硫酸乙醇溶液中加热显褐红色；mp 167～169℃.核磁数据与彭树林等[8]报道的豆甾醇数据基本一致，经分析HPLC（varian 210）测定，与豆甾醇的标准品具有相同的保留时间。色谱条件：色谱柱，ODSC-18液相色谱柱，4.6mm×250mm，5μm.流动相：甲醇，流速：0.7ml.min-1.柱温：25℃.紫外检测波长：210nm.故鉴定为豆甾醇（stigmasterol），波谱数据归属如下。

1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δH：3.53(1H，m，H-3)，5.36(1H，d，J=4.65 Hz，H-6)，0.71(3H，s，H-18)，0.93(3H，s，H-19)，1.02(3H，s，H-21)，5.16(1H，dd，J=15.15，8.65 Hz，H-22)，5.02(1H，dd，J=15.1，8.75 Hz，H-23)，0.83(3H，s，H-26)，0.81(3H，s，H-27)，0.85(3H，d，J=1.4 Hz，H-29).

13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δC：37.3(C-1)，29.3(C-2)，71.9(C-3)，39.9(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，32.0(C-7)，31.9(C-8)，50.2(C-9)，36.6(C-10)，21.1(C-11)，39.8(C-12)，42.3(C-13)，56.0(C-14)，24.4(C-15)，28.9(C-16)，56.9(C-17)，12.0(C-18)，19.4(C-19)，40.5(C-20)，21.2(C-21)，138.3(C-22)，129.4(C-23)，51.3(C-24)，31.7(C-25)，19.0(C-26)，21.0(C-27)，25.4(C-28)，12.2(C-29).

2.2 化合物2：反式阿魏酸

化合物2为无色针晶，TLC(GF254)紫外灯（254 nm）下显深兰色荧光，喷硫酸香草醛乙醇显色剂显黄色斑点。1H-NMR显示它有一个ABX自旋耦合系统，及一个反式双键，一个甲氧基。低场显示有一个活波氢，推测该化合物为4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸或3-羟基-4-甲氧基苯丙烯酸，与反式阿魏酸标准品在多种溶剂系统薄层层析其Rf值均相同；经分析型HPLC（varian 210）检测，与反式阿魏酸标准品具有相同的保留时间，色谱条件：色谱柱，ODSC-18液相色谱柱，4.6mm×250mm，5μm.甲醇-水-冰乙酸（25∶75∶0.75）（v：v：v），pH=3；流速1.0 mL.min-1，检测波长：320nm.因此将其鉴定为反式阿魏酸（trans-ferulic acid）.[9]

1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)δH：3.80(3H，s，OCH3)，6.22(1H，d，J=16.1 Hz，H-8)，6.95(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，7.05(1H，s，H-2)，7.00(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，7.53(1H，d，J=16.1 Hz，H-7).

2.3 化合物3：3，3'-二甲氧基鞣花酸

化合物3为浅黄色粉末，溶于丙酮、甲醇、四氢呋喃等有机溶剂，ESI-MSm/z：329.3[M-H]—.1H及13C-NMR数据与苏志恒等报道的3，3'-二甲氧基鞣花酸数据基本一致，[10]故鉴定为3，3'-二甲氧基鞣花酸。

其波谱数据归属如下。

1H-NMR(CD3COCD3，600 MHz)δH：7.65(2H，s，H-5，5)，4.09(6H，s，3，3'-OCH3).

1C-NMR(CD3COCD3，150 MHz)δC：109.3(C-5，5)，112.7(C-1，1)，115.0(C-6，6)，141.6(C-3，3)，144.7(C-2，2)，153.2(C-4，4)，159.4(C-7，7)，61.9(3，3'-OCH3).

2.4 化合物4：灰毡毛忍冬皂苷乙

化合物4，白色粉末，mp 229～231℃；硫酸-香草醛显紫红色；ESI-MS提示分子量为1398；与灰毡毛忍冬皂苷乙的标准品（购自中检所）在正相及反相TLC中的Rf值一致，1H-NMR主要数据特征与文献[6]报道的灰毡毛忍冬皂苷乙（macranthoidin B）一致，水解后得到的苷元经13C-NMR证明为灰毡毛忍冬皂苷乙的苷元，[11]故鉴定为灰毡毛忍冬皂苷乙。

ESI-MS m/z 1421.5[M+Na]+，1397.6[M-H]—

1H-NMR(CD3OD，600MHz)δH：0.72，0.83，0.90，0.92，0.97，1.15(s，6×CH3)，1.26(3H，d，J=6.0 Hz，Rha-Me)，4.12(1H，m，H-3)，5.34(1H，m，H-12).

水解后得到的苷元的13C-NMR(DMSO-d6，150MHz)数据δC：39.4(C-1)，26.0(C-2)，80.7(C-3)，43.2(C-4)，47.1(C-5)，18.1(C-6)，32.7(C-7)，38.6(C-8)，47.8(C-9)， 36.6(C-10)， 23.2(C-11)， 123.3(C-12)，143.6(C-13)，41.7(C-14)，29.8(C-15)，23.4(C-16)，46.7(C-17)，41.3(C-18)， 45.8(C-19)，30.3(C-20)，33.6(C-21)，32.5(C-22)，63.6(C-23)，13.7(C-24)，15.8(C-25)，17.2(C-26)，25.8(C-27)，176.4(C-28)，32.4(C-29)，22.8(C-30).

2.5 化合物5：马钱子苷

化合物5，白色立方结晶(甲醇)，薄层层析中，硫酸-香草醛显色后呈紫色斑点。质谱提示其分子量为390，mp 220-222℃.1H-NMR及13C-NMR数据与文献报道的马钱子苷（Loganin）一致，[11-12]故鉴定为马钱子苷。

ESI-MSm/z，[M+H]+=391，[M-H]—=389

1H-NMR(600 MHz，in CD3OD+CDCl3)： 7.49(1H，s，H-3)，5.16(1H，d，J=4.8，H-1)，4.61(1H，d，J=7.8，H-1')，3.05(1H，q，J=8.4，H-5)，2.19(1H，ddd，J=13.8，7.8，1.2，H-6a)，1.59(1H，ddd，J=13.8，7.8，2.4，H-6b)，4.13(1H，brt，J=4.2，H-7)，1.82(1H，m，H-8)，2，02(1H，td，J=9.0，4.8，H-9)，1.04(3H，d，J=7.2，H-10)，3.21(1H，t，J=8.4，H-2')，3.84(1H，dd，J=12.0，2.4，H-6'a)，3.69(1H，dd，J=12.0，5.4，H-6'b)，3.33(1H，dd，J=9.6，7.2，H-4')，3.37(1H，m，H-5').

13C-NMR(151 MHz，CD3OD and CDCl3)δC(ppm)：169.16(C-11)，151.63(C-3)，113.42(C-4)，99.44(C-1')，97.17(C-1)，77.36(C-5')，77.25(C-3')，74.50(C-2')，73.96(C-7)，70.83(C-4')，62.24(C-6')，51.72(-OCH3)，45.81(C-9)，42.06(C-6)，41.46(C-8)，31.44(C-5)，13.23(C-10).

2.6 化合物6：山柰酚

化合物6为黄色固体。质谱提示该化合物的分子量为286.1H-NMR中δH12.27（1H，brs），提示含有5-OH；δH8.12（2H，d，J=8.4Hz）与δH6.87（2H，d，J=9.0Hz）提示为B环上的AA'BB'偶合系统；δH6.35（1H，d，J=1.8 Hz）与δH6.14（1H，d，J=2.0 Hz）提示为A环上的间位取代氢。1H-NMR（600MHz，THF）和13C-NMR（150MHz，THF）数据如下。波谱数据与文献报道的山奈酚一致，[13]故鉴定为山柰酚。

ESI-MSm/z287[M+H]+，285[M-H]

1H-NMR(THF)数据 （δH，ppm）：9.46(1H，s，3-OH)，12.27(1H，s，5-OH)，6.14(1H，d，J=1.8，H-6)，6.35(1H，d，J=1.8，H-8)，8.12(2H，d，J=8.4，H-2'，6')，6.87(2H，d，J=8.4，3'，5').

13C-NMR(THF)数据（δC，ppm）：146.9(C-2)，134.7(C-3)，176.8(C-4)，157.8(C-5)，99.0(C-6)，165.1(C-7)，94.0(C-8)，162.7(C-9)，103.4(C-10)，123.5(C-1')，130.2(C-2'，6')，160.3(C-4')，116.1(C-3'，5').

以上化合物中的灰毡毛忍冬皂苷乙（4）、马钱子苷（5）及山柰酚（6）在忍冬属植物中多有报道。而豆甾醇（1）反式阿魏酸（2）及3，3'-二甲氧基鞣花酸（3）为首次在该属植物报道。阿魏酸具有镇痛，缓解血管痉挛等作用，[14]山柰酚具有抗菌，抗炎、抗氧化、解痉、抗溃疡、利胆利尿剂、止咳等活性，马钱子苷对非持异性免疫功能有增强作用，具有良好的抗炎、抗菌、镇咳及祛痰等药效，灰毡毛忍冬皂苷乙作为药典中山银花的指标成分，有消炎及的抗癌作用。鞣花酸类成分在大量体外组织及小动物模型中都具有抗增生和抗氧化的活性。[15]

这些化学成分基本反映了红腺忍冬基源山银花的物质基础，为其活性成分的研究提供参考。

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