张俊毅，董彩凤

（1.赤峰学院医学院病理教研室；2.赤峰学院附属医院呼吸内科，内蒙古 赤峰 024000）

Delta-catenin和Rac1蛋白在肺癌组织中共表达的临床意义

张俊毅1，董彩凤2

（1.赤峰学院医学院病理教研室；2.赤峰学院附属医院呼吸内科，内蒙古 赤峰 024000）

张俊毅，男，汉族，1977年3月出生于内蒙古乌兰察布市商都县。2000年毕业于内蒙古医科大学临床医学专业，2003-2006年于河北医科大学攻读病理学硕士学位，2007-2010年于中国医科大学攻读病理学博士学位，2012年9月进入汕头大学医学院基础医学博士后流动站从事博士后科研工作。现任赤峰学院医学院副教授，呼吸内科副主任医师。

目的：探讨Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌组织中是否存在共表达及其临床意义.方法：用免疫组化方法检测60例非小细胞肺癌标本中Delta-catenin和Racl蛋白的表达，并分析它们表达的相关性及其与患者临床病理因素之间的关系.结果：Delta-catenin在肺癌组织中的阳性表达率为65.0%(39/60)，明显高于正常肺组织的表达（0%，0/20）；而Racl的阳性表达率为61.7%(37/60)，也显著高于正常肺组织的表达（0%，0/20）.此外，Delta-catenin的阳性表达和Racl的阳性表达具有明显的相关性（P＜0.05）.与高分化、低pTNM分期和无淋巴结转移的病例相比，Delta-catenin和Racl的共表达率在低分化、高pTNM分期和有淋巴结转移的病例中显著增高（P＜0.05或0.01）.Delta-catenin和Racl共表达患者的术后生存时间也明显短于非共表达的患者（P＜0.05）.结论：Delta-catenin和Racl在肺癌组织中的共表达与患者的不良预后显著相关.

Delta-catenin；Racl；非小细胞肺癌

有报道揭示Delta-catenin的高表达与肿瘤的侵袭转移等恶性行为密切相关[1]，而细胞突起的形成和数量是肿瘤细胞具备侵袭转移能力的重要形态学标志，且研究也发现Delta-catenin的表达能够促进细胞突起的形成[2-3]，而细胞突起的形成常常与细胞骨架的装配有关，并且小GTP酶（如Racl）是细胞骨架装配的重要调节因子[4-5]，因此笔者推测Delta-catenin促进肿瘤细胞的侵袭转移很可能是通过调节小GTP酶的活性、进而影响细胞骨架的装配而实现的.新近的报道虽然也揭示了在肺癌细胞系中Delta-catenin通过调节小GTP酶的活性而促进瘤细胞的侵袭转移[6]，然而在肺癌组织中Delta -catenin与小GTP酶是否存在共表达及其与患者的临床病理因素及预后是否相关并不清楚.

本研究应用免疫组化方法对60例非小细胞肺癌标本中Delta-catenin和Racl蛋白的表达情况进行了检测，并分析了它们的共表达与患者临床病理因素及预后的关系.

1 材料与方法

1.1 组织标本与病人资料

60例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织标本选自赤峰学院附属医院病理科2004～2009年的存档蜡块.患者术前未接受放化疗.其中男性38例，女性22例，平均年龄56岁.根据世界卫生组织（WHO）2004年肺肿瘤组织学分类标准[7]：鳞癌26例，腺癌34例.高分化19例，中分化26例，低分化15例.按照国际抗癌联盟（UICC）的肿瘤pTNM分期标准[8]：Ⅰ期16例，Ⅱ期28例，Ⅲ期13例，Ⅳ期3例.我们对所有患者进行了术后随访，生存时间是从手术日期到死亡（由于复发或转移所引起）或末次随访日期为止.以上所有标本的使用均征得了赤峰学院附属医院医学伦理委员会的同意且患者本人或家属知情.

1.2 免疫组织化学染色与结果判定

标本制成4μm连续切片，采用SP免疫组织化学方法进行染色.小鼠抗人单克隆抗体Deltacatenin(美国Santa Cruz公司)、Racl(美国pierce公司)的稀释度均为l:100.SP染色试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新生物技术公司.PBS代替一抗做阴性对照.

计数400个肿瘤细胞并统计阳性染色细胞所占的百分数.参照文献描述的Delta-catenin评分标准[1]：免疫染色的强度（0=negative,1=weak,2= moderate,3=strong），免疫染色的阳性细胞数（0=absent,1=1～25%，2=26～50%，3=51～75%，4=≥76%），标本的最终评分为两项评分的乘积.为了便于统计，将评分结果分为两组：阴性表达定义为＜2，阳性表达定义为≥2.Rac1的评分标准参照文献[9]：阳性细胞数≤25%为(+)，26-75%为(++)，≥76%为(+++).(-)～(+)定义为正常表达，(++)～(+++)为过表达.Delta-catenin阳性表达和Rac1过表达被定义为共表达.

1.3 统计分析

应用SPSS for Windows 13.0统计软件进行数据分析.免疫组化结果采用Pearson's Chi-Square检验.患者生存分析采用Kaplan-Meier法，Log-Rank检验患者生存率的差别.P＜0.05被认为有统计学差异.

2 结果

2.1 Delta-catenin和Racl蛋白的表达在肺癌组织中显著增高，且它们的表达具有明显相关性

表1 Delta-catenin和Racl在肺癌组织中表达的相关性

图1 Delta-catenin在正常气道上皮细胞(A)中呈阴性表达，而在肺鳞癌（B）和肺腺癌（C）中呈阳性表达；相似地，Racl在正常气道上皮细胞(D)中也呈阴性表达，而在肺鳞癌（B）和肺腺癌（C）中呈阳性表达.SP免疫组化法

Delta-catenin在正常肺组织中为阴性表达（0/20，图1），在60例肺癌病例中有39例阳性表达，阳性率为65.0%(39/60).Racl在肺癌组织中的过表达率为61.7%(37/60)，而它们在正常肺组织中均为阴性表达(0/20).Delta-catenin和Racl均为阳性表达（共表达）的病例有26例，占病例总数的43.3%（26/60），而非共表达的患者占总数的56.7%（34/60）.此外，Delta-catenin的阳性表达和Racl的过表达存在明显的相关性(p<0.05；表1).

2.2 Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌组织中的共表达与患者的不良预后显著相关

在Delta-catenin和Racl共表达的26例病例中（表2）：低分化有10例，占低分化病例总数的66.7%（10/15），明显高于高-中分化的35.6%（16/45，p＜0.05）；III-IV期的共表达病例为11例，占68.8%（11/16），显著高于I-II期的34.1%（15/44，p＜0.01）；有淋巴结转移的共表达病例为17例，占60.7%（17/28），也明显高于无淋巴结转移病例的28.1%（9/32，p＜0.01）.然而，共表达与患者的年龄、性别和组织类型没有明显关联（p＞0.05）.此外，Kaplan-Meier生存曲线显示Delta-catenin和Racl共表达患者的生存时间显著短于非共表达的患者（Log-Rank检验p＜0.05，图2）.

表2 Delta-catenin和Racl的共表达与患者临床病理因素的关系

图2 Kaplan-Meier生存曲线显示Delta-catenin和Racl共表达（co-expression）患者的生存时间显著短于非共表达（Non co-expression）的患者（Log-Rank检验，p<0.05）

3 讨论

新近的文献报道Delta-catenin可通过调节小GTP酶活性而促进肺癌细胞的恶性表型[6]，但在肺癌组织中Delta-catenin和小GTP酶的表达是否具有相关性，以及它们的共表达与患者的预后是否有关等问题并不清楚.本研究运用免疫组化方法发现Delta-catenin和Racl在肺癌组织中的表达均比正常肺组织明显增高，并且Delta-catenin的阳性表达和Racl的过表达具有显著的相关性.此外，Delta-catenin和Racl的共表达与肺癌组织的低分化、高pTNM分期以及淋巴结转移密切相关，而且生存分析显示Delta-catenin和Racl共表达的肺癌患者的术后平均生存时间也显著缩短.

众所周知，小GTP酶家族蛋白是细胞骨架重构、信号转导和基因表达通路的重要调节因子[4-5].目前研究最为深入的有Rac1、Cdc42和RhoA这三个成员，其中Rac1的活性增高可以促进细胞伪足的形成，有利于细胞的运动和游走[10-11].本研究显示Delta-catenin和Racl在肺癌组织中存在共表达并与患者的不良预后密切相关，这与Delta-catenin与包括Racl在内的小GTP酶相互作用而促进肺癌细胞侵袭转移的实验结果相辅相成，进一步完善了Delta-catenin与小GTP酶家族成员在促进肺癌侵袭转移中的相互作用关系，也为下一步深入探讨Delta-catenin在肺癌中的表达调控机制奠定了基础.

总之，肺癌组织中不仅存在着Delta-catenin的高表达，而且它的表达与Racl的过表达存在着显著的相关性.Delta-catenin和Racl的共表达不仅与肺癌组织的低分化、高分期和淋巴结转移有关，还与患者术后显著降低的生存时间密切相关，因此把Delta-catenin和Racl的表达作为判断肺癌患者预后的因子具有重要的临床意义.

〔1〕Lu Q,Dobbs LJ,Gregory CW,et al:Increased expression ofDelta-catenin/neural plakophilin-related armadillo protein is associated with the down-regulation and redistribution of E-cadherin and p120ctn in human prostate cancer [J].Hum Pathol,2005,36(10):1037-1048.

〔2〕Kim H,Han JR,Park J,et al.Delta-catenin induced dendritic morphogenesis:An essential role of p190RhoGEF interaction through Akt1-mediated phosphorylation [J].JBiol Chem,2008;283(2):977-987.

〔3〕Abu-Elneel K,Ochiishi T,Medina M,et al.A Delta-catenin signaling pathway leading to dendritic protrusions [J].J Biol Chem,2008;283(47):32781-32791.

〔4〕Vega FM,Ridley AJ.Snap Shot:Rho family GTPases[J].Cell,2007;129(7):1430.

〔5〕SahaiE,MarshallCJ.Rho-GTPasesand cancer[J].Nature Rev Cancer,2002;2(2):133-142.

〔6〕Zhang JY,Wang Y,Zhang D,et al.Deltacatenin promotes malignant phenotype of nonsmallcelllung cancerby non-competitive binding to E-cadherin with p120ctn in cytoplasm[J].J Pathol,2010;222(1):76-78.

〔7〕Sobin LH,Wittekind C.Lung and pleural mesothelioma.In TNM Classification of Malignant Tumors [M].John Wiley&Sons:New York,2002;97-104.

〔8〕Travis WD,Brambilla E,Muller-Hermelink HK,et al.Tumors of the Lung.In Tumours of theLung,Pleura,Thymusand Heart[M].IARC Press:Lyon,2004;44.

〔9〕HoriuchiA，ImaiT，Wang C，etal.UP-regulation of small GTPases，RhoA and RhoC,is associated with tumor progression in ovarian carcinoma[J].Lab Invest,2003;83(6):861-870.

〔10〕KurokawaK，NakamuraT，AokiK，Matsuda M.Mechanism and role of localized activation of Rho-family GTPases in growth factorstimulated fibroblastsand neuronalcells[J].Biochem Soc Trans,2005;33(Pt4):631-634.

〔11〕Pula G，Poole AW.Critical roles for the actin cytoskeleton and cdc42 in regulating platelet integrin α2β1 [J].Platelets,2008;19(3):199-210.

R361+.3

A

1673-260X（2014）07-0016-03

国家自然科学基金（81201844）；内蒙古自然科学基金（2012MS1109）