张金龙，项春生，刘芙蓉，黄志刚，莫国生，揭中华，陈锦阳

论著

宫内膜干细胞治疗失代偿期肝硬化疗效观察

张金龙1，项春生2，刘芙蓉1，黄志刚1，莫国生1，揭中华1，陈锦阳3

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择肝硬化失代偿期患者23例，宫内膜干细胞经静脉输注方法移植入肝脏,分别在治疗后第1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月复查肝脏功能(TBIL、ALT、AST)、甲胎蛋白(AFP)、胆碱酯酶(CHE)、肝纤维化等实验室指标，分析临床症状及不良反应情况。结果治疗后23例临床症状及体征明显改善。移植治疗后，在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低，但差异无统计学意义；ALB(34.8 g/L)和CHE(4386 U/L)较治疗前显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ较治疗前均减少，差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内膜干细胞移植治疗可明显改善肝硬化失代偿期患者肝脏功能及临床症状，短期结果安全可靠，不良反应少，值得临床进一步研究。

宫内膜干细胞;移植;肝硬化

从生命的开始干细胞就发挥着重要的作用，它具有细胞全能性，存在于早期胚胎、骨髓、脐带血和胎盘组织中。最近，间充质干细胞已经被发现存在于子宫内膜组织内。大量研究发现，宫内膜干细胞的高度增殖活性及自我再生能力，使其在细胞治疗和再生医学中有着重要的临床医学价值[1]。失代偿期肝硬化是一类慢性难治性疾病，对其治疗方法的研究一直处于探索之中。肝移植由于肝源有限及治疗费用昂贵，很大程度上限制了其临床应用[2-4]。基础研究证明，宫内膜干细胞能够诱导分化为肝细胞，并能修复病损的肝脏组织[5]。武警浙江总队医院从2010-09至2011-11已成功开展宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化23例，旨在改善患者肝脏功能及临床症状。

1 对象与方法

1.1 对象 23例中，男16例，女7例，年龄38～68岁，平均45.8岁,慢性肝病面容。慢性乙型肝炎性8例，血吸虫性 7例，酒精性 2例，胆汁淤积性 2例，心源性 1例，混合性 3例(慢性乙型肝炎合并血吸虫性肝硬化1例，慢性乙型肝炎、丙型肝炎混合性肝硬化2例)；其中2例合并糖尿病(慢性乙型肝炎后、血吸虫性肝硬化各1例)。根据肝硬化Child -Pugh计分及评级标准[6,7]，分级为B级14例，C级9例，所有肝硬化患者诊断符合相关标准。临床症状均表现为乏力、食欲缺乏、腹胀，其中有尿黄5例，黑便、腹痛、皮肤瘙痒、发热各3例。其中肝区叩击痛阳性、脾大、颜部毛细血管扩张各6例，皮肤巩膜黄染、下肢水肿、腹膨隆和移动性浊音阳性各5例。腹部超声或CT等检查提示肝硬化、脾增大、门脉高压等。入院后根据病情分别给予基础治疗、护肝、抗肝纤维化，以及相应止血、利尿等对症处理，有肝昏迷、感染者等症状控制后，行宫内膜干细胞移植。所有患者无明显宫内膜干细胞移植禁忌证。本研究通过医院伦理委员会审查，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 宫内膜干细胞的准备 宫内膜干细胞的采集、分离、培养、鉴定均由杭州易文赛生物技术有限公司按照质控标准提供并完成[8]。

1.2.2 治疗方法 嘱患者仰卧位，通过静脉输注途径回输宫内膜干细胞5×107个，再予20 ml生理盐水冲管后，监测血压、脉搏等。1次/周,4次为一疗程，间隔4周进行第2个疗程。常规治疗2个疗程后观察其疗效，注意有无发热，变态反应及其他不适。

1.3 观察指标 观察患者治疗后乏力、食欲缺乏、腹胀、尿黄、尿少等症状，以及腹水、下肢水肿等体征的改善情况和不良反应发生情况。于治疗前，治疗后1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月，复查肝功能、胆碱酯酶(CHE)、甲胎蛋白(AFP)、肝纤维化指标(LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ)，特别是谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、CHE等变化情况。

2 结 果

2.1 血清生化指标变化 宫内膜干细胞移植治疗后，在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低，但差异无统计学意义；ALB和CHE较治疗前显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ较治疗前均减少，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 宫内膜干细胞移植前后患者血清学指标变化情况 ±s；n=23)

注：与治疗前相比，①P<0.05

2.2 各类型肝硬化的血清生化指标变化 不同发病原因的肝硬化失代偿期患者中，对慢性乙型肝炎后肝硬化(8例)、血吸虫性肝硬化(7例)、酒精性肝硬化(2例)给予宫内膜干细胞移植治疗后，从各观察点血清生化的指标变化来看，肝功能指标ALB、CHE较治疗前显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ(尤其HA)较治疗前均明显减少(P<0.05，表2)。

表2 失代偿期肝硬化宫内膜干细胞治疗前后血清生化指标比较 ±s；n=17)

注：与治疗前相比，①P<0.05

2.3 肝硬化合并糖尿病患者血糖指标变化 慢性乙型肝炎后肝硬化、血吸虫性肝硬化合并糖尿病各1例在宫内膜干细胞移植后12个月内，在未使用胰岛素、降糖药物的影响下，血糖控制均良好，且未发现糖尿病并发症。

2.4 临床症状及体征 宫内膜干细胞移植后第1个月时大多数患者临床症状及体征开始改善，第3个月时改善明显，表现为乏力、腹胀、纳差等症状缓解，腹水减少、下肢浮肿减轻、尿黄减轻，毛细血管扩张改善，皮肤恢复弹性，头发由白变黑，见表3。

表3 失代偿期肝硬化宫内膜干细胞治疗前后临床症状、体征改善情况比较 (n=23)

3 讨 论

肝硬化是一种以肝组织弥漫性纤维化、假小叶形成为特征的慢性肝病，当肝硬化进入到失代偿期后则病情难以逆转，肝脏不再有任何再生能力。肝移植是失代偿期肝硬化最理想的治疗选择。但是，由于供体缺乏、移植后免疫排斥反应，以及高额的治疗费用，限制了肝移植治疗临床应用，因而迫切需要寻找一种简便、安全、有效的治疗方法。

干细胞是一类存在于成体组织和器官中的未分化细胞，具有高度增殖、自我更新和分化能力，在成体组织中调控成体细胞增殖、分化和凋亡及保持细胞数目的平衡中有非常重要的作用[9]。在干细胞的早期研究中，胚胎干细胞(mbryonic sesem cells, ESCs)占据着主导地位，它具有细胞全能性，可分化成全部3层胚层细胞层的多种细胞类型[10,11]。但是，胚胎干细胞成畸胎瘤的潜在性及其在大型临床应用方面的局限性限制了它在科学研究中的应用。随着患有各种病症者增加，寻找具有临床使用价值的其他干细胞来源迫在眉睫。研究表明，间充质干细胞可以分化成外胚层和中胚层细胞系，并可进一步进行多潜能性分化。最近，间充质干细胞已经被发现存在于子宫内膜组织内。宫内膜干细胞系具有很强的自我更新能力。在每个月经周期都会有组织和血管的大量增长，这一增长过程会随着月经周期的结束而停止。经血及这些组织中含有一些具有可再生能力的细胞的异质群体。宫内膜干细胞含有的多分化潜能性标志物与骨髓间充质干细胞中的相似。

为探讨宫内膜干细胞对肝硬化失代偿期患者的治疗作用，本研究开展了宫内膜干细胞经静脉治疗失代偿期肝硬化的研究，发现宫内膜干细胞移植后第1个月时大多数患者临床症状及体征开始改善，3个月时改善明显， 23例均有明显乏力好转。宫内膜干细胞移植治疗后，在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低， ALB和CHE较治疗前显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ较治疗前均减少，差异有统计学意义(P<0.05)。宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化是一种全新而有效的新方法，其虽不能给肝病患者带来治愈性的效果，但可在很大程度上延缓肝硬化的进展速度，提高肝硬化患者的生存质量。本研究发现，慢性乙型肝炎后肝硬化的ALB与CHE升高显著，且其肝纤维化指标下降明显，考虑可能与宫内膜干细胞治疗能够激活乙型肝炎病毒免疫应答有关，心源性肝硬化患者和1例血吸虫性肝硬化患者的皮肤恢复弹性、头发由白变黑，肝昏迷也得到缓解，并能做日常家务劳动，可能与患者组织修复，肝组织改善有关。慢性乙型肝炎后肝硬化、血吸虫性肝硬化合并糖尿病各1例在宫内膜干细胞移植后12个月内，在未使用胰岛素、降糖药物的情况下，血糖控制均良好，且未发现糖尿病并发症。说明宫内膜干细胞应用广泛，宫内膜干细胞在体外诱导能产生胰岛素的细胞，并将其用于治疗糖尿病，已经取得了很好的效果[11]。

骨髓干细胞移植一般由于配型关系，都采用自体细胞，使用也受到局限，而且，相当一部分肝硬化失代偿期患者年龄较大，骨髓再生能力相对较弱。宫内膜干细胞治疗失代偿期肝硬化的优势在于：(1)可以异体采集，避免了其他方式移植可能出现的排斥反应；移植过程简便易行、治疗费用低廉；(2)不涉及伦理道德等问题，在理论上具有可行性；(3)技术风险小，治疗本身过程并不复杂。从本研究使用的情况来看，标本采自同种异体，没有发生肝移植产生的排异反应，可以批量应用临床。

从短期来看，宫内膜干细胞移植的安全性有一定的保障，治疗失代偿期肝硬化有一定疗效。但是间充质干细胞治疗作为一种新技术，在临床应用中还需要更多的时间来评估它的安全性和有效性。(1)宫内膜干细胞移植入人体后，缺乏一个特异性监测指标。(2)细胞取材后体外扩增数量达到多少有利于再生，干细胞的数量及移植次数对临床疗效有何影响。(3)干细胞进入人体后可以分化为相应的组织细胞，这分化来的细胞是否可以完全表达原来细胞的所有功能。对反复发生肝昏迷的患者，经宫内膜干细胞治疗后缓解，是否与肝组织的再生有关。(4)体外和动物实验证明宫内膜干细胞不会导致肿瘤发生[12]。本研究例数尚少，需要进一步增加病例数，这些都是下一步研究中需要进一步观察和解决的问题。笔者相信，随着宫内膜干细胞研究的不断深入，在不久的将来，会给更多的慢性肝病患者带来益处。

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(2013-07-27收稿 2014-03-19修回)

(责任编辑 郭 青)

Endometrialstemcelltreatmentofdecompensatedlivercirrhosis

ZHANG Jinglong1, XIANG Chunsheng2, LIU Furong1, HUANG Zhigang1, MO Guosheng1, JIE Zhonghua1, and CHEN Jinyang3. 1. Zhejiang Provincial Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Jiaxing 314000, China; 2. Department of Infections Disease, The First Affiliated Hospital of Zhejiang University Medical College, Hangzhou 310003，China; 3. Hangzhou Yi Wen Sai Biological Technology Co Ltd, Hangzhou 311121, China

ObjectiveTo study the efficacy of endometrial stem cell transplantation for patients with decompensated liver cirrhosis.MethodsPatients with decompensated liver cirrhosis (n=23) were recruited. Endometrial stem cells were transplanted into the liver by intravenous infusion. Some indexes were checked in one week after the treatment, 2 weeks, 1 month, 3 months, 6 months, 12 months, respectively; these indexes included liver function, AFP, cholinesterase, liver fibrosis index of laboratory, clinical symptoms and adverse reaction condition.ResultsThe clinical symptoms and signs in most patients were improved significantly after treatment. Endometrial stem cell transplantation treatment decreased the liver function TBIL, ALT, AST, AFP compared with those before treatment, but the difference was not statistically significant; ALB and CHE were significantly higher than those before treatment, the difference was statistically significant (P<0.05). Liver fibrosis indexes LN, HA, PC- Ⅲ, Ⅳ (especially HA) were lower than before treatment, the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionsFor endometrial stem cell transplantation in the treatment of patients with decompensated liver cirrhosis, their clinical symptoms were significantly improved, according to short-term observation, the therapy is safe and reliable, with less adverse reactions, it is worthy of further clinical research.

endometrial stem cells；transplantation; liver cirrhosis

嘉兴市科技局科技项目(2011AY10534)；浙江省重大科技计划项目(2012C03SA170003)；国家863项目(2012AA020905)

张金龙，本科学历，主任医师，E-mail:wjyyzjl@126.com

1.314000嘉兴，武警浙江总队医院；2.310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院传染科；3.311121，杭州易文赛生物技术有限公司

刘芙蓉，E-mail: rongrong1369@163.com

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