胡瑞鸿 丛秋实 史玉梅

（哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）

鸡新城疫活疫苗（CS2株）稳定性试验

胡瑞鸿 丛秋实 史玉梅

（哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的禽类高度接触性传染病，目前主要采用疫苗的免疫接种以达到良好的预防作用。而在当今疫苗大规模的现代化生产中，疫苗的稳定性成为免疫预防的关键。本试验采用红细胞凝集试验（HA）测定疫苗的EID50，探索疫苗贮存的稳定性，为疫苗质量的提升提供有力的技术支持。

新城疫；稳定性；EID50

新城疫（Newcastle Disease，ND），也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由病毒引起的鸡和火鸡急性高度接触性传染病，常呈败血症经过，主要特征是呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。本病1926年首次发现于印尼，同年发现于英国新城，根据发现地名而命名为新城疫。本病分布于世界各地我国于1935年已有本病流行的报告，但当时被认为是真性鸡瘟，直到1947～1948年才被确证为新城疫，病原属于1927年分离的强毒株，国内攻毒使用的北京强毒株，也属于此种类型。NDV的主要特征是不同病毒株致病力差异较大。当前我国国内NDV的毒力呈现不断增强的趋势，本病死亡率高，是严重危害养鸡业的重要疾病之一，造成很大经济损失，疫苗的质量就显得尤为重要。

疫苗的生产以及质量检验均按照兽药生产质量管理规范（简称兽药GMP）进行，但GMP中针对产品留样进行了进一步的说明：在适宜条件下保留的疫苗样品，应在不同时间段定期监测其效力，看能否达到国家标准。2010年版《中华人民共和国兽药典》三部规定：鸡新城疫活疫苗在-15℃保存，有效期为24个月。试验意在证明疫苗的效力在超过有效期半年内都是稳定的，因此疫苗在效期内是安全、有效的。

1 试验材料

1.1 试验疫苗

抽取5批鸡新城疫活疫苗（CS2株），由哈药集团生物疫苗有限公司提供

名 称批 次生产日期2012012012年1月 1日2012022012年1月1日2012032012年1月2日2012042012年1月2日2012052012年1月13日鸡新城疫活疫苗（CS2株）

1.2 试验SPF鸡胚

10日龄SPF鸡胚 由山东济南斯帕法斯家禽有限公司提供SPF种蛋，哈药集团生物疫苗有限公司孵化

1.3 主要试剂

（1）1%鸡红细胞悬液及制备

采取3只3月龄SPF鸡的血液，与等量阿氏液混合，然后用PBS（1/15moLL-1；pH7.2）洗涤3次，每次以1500rpm离心5min，吸弃上清液，注意吸弃红细胞表面的白细胞层，并尽量吸净上清液，将沉积的红细胞用PBS配制成1%鸡红细胞悬液。

（2）0.85%生理盐水及制备

取0.85gNaCl加注射用水至100mL，121℃高压灭菌35min，4℃储存

1.4 主要设备

干热灭菌箱、八道数字式可调微量移液器、超净工作台、微量血凝板、微量振荡器、Tip头、吸管（1mL、10mL）

2 试验方法

疫苗存放于-15℃保存0月、12月、24月、30月后，分别将疫苗作10倍系列稀释，取10-5、10-6、10-7三个稀释滴度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1mL，接种后用腊封好针孔，置37℃孵育72h，测定红细胞凝集价（HA），凝集价（HA）≥1：64者判为感染，计算鸡胚感染百分率，按Reed和Muench法计算鸡胚半数感染量（EID50）。

logEID50=高于50%的病毒稀释的对数+距离比例×稀释系数的对数

3 结果与分析

组 别保存不同月份结果（EID50）0月12月24月30月201201105.5105.5105.32105.32201202105.5105.5105.32105.32201203105.63105.63105.5105.32201204105.5105.5105.32105.32201205105.63105.63105.5105.32

通过上表可以看出鸡新城疫活疫苗（CS2株）在30个月的稳定性试验中疫苗的效价（EID50）虽然有所降低，但仍在国标范围内，符合《中华人民共和国兽药典》的要求，证明我们公司生产的鸡新城疫活疫苗（CS2株）是稳定、有效的。