申惠敏 杜 娟 （山西省长治市畜牧兽医局 046000）贾秀珍 （山西省长治市城区农林委）

动物性食品中B-受体激动剂类残留检测方法研究进展

申惠敏 杜 娟 （山西省长治市畜牧兽医局 046000）贾秀珍 （山西省长治市城区农林委）

食品安全是当今中国乃至世界普遍关注的问题，食品安全尤其以农产品中动物性食品最为引人注目。“瘦肉精”时间的影响，已引起足够的重视。畜产品质量安全检测，在畜产品安全中起无可替代的重要作用，是保障人们吃的放心的一项强有力手段。B-受体激动剂类残留检测，现已提到了相当高度，在畜产品残留检测占较大份额，检测方法发展也很快，相应快速检测卡、试剂盒产品开发也能基本满足检测需求，B-受体激动剂确证方法也已建立，基本上形成了现场快速检测、大批量筛查、实验室仪器确证的完整体系，但B-兴奋剂类残留检测不能避免地还存在这样那样的不足，方法有待改进、体系有待完善。本文就B-受体激动剂类残留检测方法进行了深入、细致研究，对各种方法的优缺点、应用情况进行了论述，对其存在的问题进行了探讨，希望在未来的工作中，进一步完善相关方法规程、制度体系、法律法规，为确保畜禽产品安全、保证畜牧业健康发展、保护广大人民群众身体健康和生命安全作出更大的贡献。

我国是一个畜牧业生产大国，畜产品质量安全关系着人民身体健康、社会稳定，近年频发的食品安全事件，大部分是肉蛋奶等与人们生活息息相关的畜产品。畜产品安全形势紧迫，畜产品检测能提高畜产品质量，保护广大消费者身体健康，促进畜产品出口等[1]。

1 畜产品质量检测存在的问题

畜产品质量安全检测，通过例行监测、监督抽查、风险评估、监测预警和日常检测等，在畜产品质量安全中具有举足轻重的作用。为努力确保不发生重大畜产品质量安全事件，必须建立健全畜产品质量安全检验检测体系。但是，我国的畜牧兽医产品质量检测机构还普遍存在体系不健全、技术人员不足等问题，难以适应农产品国内外贸易对质量安全检验检测工作的需要，影响畜牧兽医产品质量安全水平的提高和扩大出口，还远远不能适应农业和农村经济发展鸡国际贸易的需要。存在的主要问题：（1）部分大型仪器设备型号比较老化和陈旧，缺乏国际上通用的确证法所必须的仪器设备(如气相色谱质谱联用仪、液相色谱质谱联用仪等)；（2）样品前处理所需要的中小型仪器设备不够完善，缺乏快速、全面、安全可靠的提取和净化手段和设备，工作效率低下，检测范围有限。（3）实验室环境设施不够完善，环境保护、人员保护设施相对缺乏或落后[2]。

2 检测B兴奋剂的方法

B兴奋剂类，是指能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的一类药物，也叫“瘦肉精”，瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、使肉品提早上市、降低成本等。但因其对人体的各种毒副作用，各种已禁止使用，属于违禁添加物。目前，检测动物性食品中B兴奋剂类残留的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)、毛细管区带电泳法(CZE)和免疫分析技术(IA)五大类。 其中20世纪80年代开始应用于兽药残留分析的免疫分析技术，类别最多，包括酶联免疫吸附分析法(ELISA)、量子点荧光免疫分析法(cFLISA)、放射免疫分析法(RIA)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)、荧光免疫分析法(FIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、胶体金免疫层析法(GICA)及蛋白质芯片技术等。广泛应用于检测实践的方法有胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、气质联用法、液质联用法。胶体金免疫层析法广泛应用于快速检测，酶联免疫法多用于现场监控和大批量样本筛查，高效液相色谱法用于半确证，液质、气质用于定量、确证、仲裁等[3]。

2.1 胶体金免疫层析法 胶体金免疫层析法，为竞争性抑制法。氯金酸还原制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。利用硝酸纤维素微孔膜载体的毛细管作用，吸附液体向另一端渗移。移动过程中，样本中的B受体激动剂与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上B受体激动剂-BSA偶联物的结合，检测线不显色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。主要用于快速检测动物尿液中B受体激动剂。NY/T 933-2005规定了动物尿液中克伦特罗的测定，判定标准为不出现红色条带为阳性(≥3ng/ml)，阳性样品应用质谱方法进行确认。

2.2 酶联免疫吸附法 目前大部分B受体激动剂类均可采用酶联免疫吸附(ELISA)法进行测定(GB/T 5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定)。ELISA法具有灵敏度高、快速、特异性强的特点，所需仪器化程度低，样品前处理相对简单。可定性、定量检测动物组织(肌肉、肝脏)尿液等样品中B受体激动剂类的残留，适合基层大批量样本筛查，ELISA法是快速筛选方法，会受到坏境温度、样品前处理误差、样品溶液与标准溶液的一致性、测定波长、试剂有效期、操作不当等影响，有可能引起假阳性出现，因此对于用该方法检测到的阳性样品一定要用其他方法进行确证，以排除假阳性结果[4]。

2.3 高效液相色谱法 高效液相色谱(HPLC)法，分离度好、专属性强，应用成本相对较低，但需要专门仪器和熟练技术的分析人员，而且需要样品前处理和高纯度的化学试剂。样品前处理及测定操作繁琐、费用高，推广普及受限制，较难检测大批量样品，同样存在假阳性率偏高等问题。HPLC法为B受体激动剂类的半确证方法(GB/T 5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定)[5]。

2.4 气质联用法 气相色谱(GC—MS)法把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。但GC-MS多用于挥发性成分检测，前处理需要衍生化，步骤繁琐、样品回收率得不到保证，检测耗时较多，现已很少用于B受体激动剂类确证(GB/T 5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定)。

2.5 液质联用法 GB/T 21313-2007动物源性食品中B-受体激动剂残留检测方法，规定了B-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和液相色谱-质谱/质谱确证方法，该方法因具有快速、准确、灵敏度高、分析周期短、适用范围广等优点而被普遍使用，液质联用法被越来越多地用作动物源性食品中B-受体激动剂类残留的确证方法。

3 总结

近年来，畜产品安全检测方法、相关标准不断完善，为检测工作带来了极大方便，也更有利于保障畜产品质量安全，现场快速检测(快检卡法)及基层筛查检测(试剂盒法) 优点是操作简单、时间短、成本低，适合在现场进行大量样品的快速筛查，但结果受外在因素影响大，容易出现“假阳性”，不能作为确证、执法依据，快速筛查法缺乏统一标准，试剂盒厂家所生产试剂盒灵敏度、检测限、定量限等无统一规范，试剂盒批内、批间变异较大，导致检测结果稳定性、重复性不好，检测标准老旧、不完善等。没有建立金标卡现场检测、酶联免疫法大批量筛查、液质确证的检测体系、机制，相关方法标准不健全。例行监测、监督抽查等检测计划制定不合理，不能很好地覆盖广大畜产品消费市场，起到风险评估、预警作用。

今后，相关部门需加快制定相应检测方法、操作规程，完善相关法律法规，各级检测机构科学分配监测任务、合理分工配合、各负其责，共同为确保畜禽产品安全添砖加瓦，为保证畜牧业健康发展保驾护航，为保护广大人民群众身体健康和生命安全贡献力量。

[1] 邢应寿等. ELISA技术在畜产品安全检测中的应用[J]. 动物医学进展, 2004,25(3): 19-22.

[2] 申惠敏. 影响畜产品质量安全的因素及对策[J]. 中国动物保健. 2013(1): 1-3.

[3] 吕珍珍. 免疫分析技术在兽药残留检测中的应用[J]. 农产品质量与安全, 2012, 76-78.

[4] 万美梅. ELISA法在畜产品安全检测中的应用及其注意事项[J]. 广东饲料. 2008, 1(17): 34-35.

[5] 刘平年. HPLC-DAD法测定猪肝中的盐酸克伦特罗[J]. 化学分析计量. 2005,5(14): 33-35.

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