罗方利，郭力，许莉，贝圆

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延龄草中总皂苷的含量测定

罗方利，郭力，许莉，贝圆

目的：建立延龄草总皂苷的含量测定方法。方法：以薯蓣皂苷元为对照品，采用分光光度法，高氯酸显色，在408nm处测定吸光度，计算延龄草中总皂苷的含量。结果：薯蓣皂苷元在0.01～0.06mg．mL-1的浓度范围内与吸光度值呈良好线性关系（R2=0.9996），方法的平均回收率为99.43%，RSD为2.64% 。结论：建立了延龄草中总皂苷含量测定方法，该方法操作简便、准确、灵敏、重现性好，可用于延龄草的质量控制。

]延龄草；总皂苷；薯蓣皂苷元；分光光度法

延龄草（Trillium tschonoskii Maxim.）为百合科植物，又名头顶一颗珠，主产于西藏、云南、四川、陕西、甘肃、湖北、河南、安徽、浙江、福建，生于海拔1000～3200米阴湿处。味甘，性平，有小毒，是传统的名贵中药，也是土家族著名民族药之一[1]。从延龄草属植物中分离得到的次生代谢产物包括甾体皂苷、黄酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷等类型的化合物。其中以甾体皂苷为主，具有镇静安神、祛风活血、延年益寿等功效，主治头晕目眩、失眠、跌打损伤、外伤出血、神经衰弱、高血压、脑震荡后遗症等[2,3]。目前，对延龄草的化学成分分离和药理活性的研究较多，而对其含量测定尚无系统性研究，因此本实验旨在对延龄草总皂苷进行含量测定，为延龄草药材的规范化和进一步的开发利用提供科学依据。

1 仪器与试药

紫外-可见分光光度仪（UV-1100，上海天美科学仪器有限公司），Sartorius系列电子分析天平（BP211D，德国赛多利斯有限公司），超声波清洗器（KQ3200E，昆山市超声仪器有限公司），优普系列超纯水器（UPH-I，成都超纯科技有限公司）。

薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1539-200001，供含量测定用）；实验所用试剂均为分析纯；延龄草药材采自四川省南江县，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定确认为百合科延龄草属植物延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.）的干燥根茎。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制得0.1mg/mL的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取延龄草药材粉末0.1g，加60%乙醇提取2次，每次50mL，每次1h，合并滤液，挥至无醇味，用水饱和正丁醇萃取3次，每次40mL，合并正丁醇液，挥干，残渣加甲醇溶解并定容至10mL，作为供试品溶液。

2.3 测定波长的选择

分别取对照品溶液、供试品溶液0.3mL，置于10mL的具塞刻度试管中，挥干溶剂，精密加入高氯酸5mL，置25℃水浴中加热25min，取出冷却至室温。以高氯酸为空白对照，在紫外-可见分光光度计上于300～ 600nm范围内扫描测定紫外可见吸收光谱。结果对照品与供试品溶液的最大吸收波长均为408nm。

2.4 标准曲线的绘制

精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6mL，置于10mL的具塞刻度管中，挥干溶剂，精密加入高氯酸5mL，密塞摇匀，置25℃恒温水浴锅中保温25min，取出冷却至室温。以高氯酸为空白对照, 在408nm波长处测定吸收，绘制标准曲线。以含量（C）与吸光度（A）绘制标准曲线，结果表明，薯蓣皂苷元在0.01～ 0.06mg．mL-1范围内呈良好的线性关系，其回归方程为：A =10.500C-0.0420，R2= 0.9996。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液0.2 mL，按“2.4”项下方法测定吸光度，测定结果并计算RSD为0.74%( n = 5)，表明精密度良好 。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按“2.4”项下方法测定吸光度，测定其在不同时间的吸光度，结果表明，吸光度值在0～2h内RSD为0.92%，因此测定应控制在60 min内完成。

2.7 重复性试验

称取同一批样品粉末，按“2.2”项下方法依法制备供试品溶液，按“2.4”项下方法测定吸光度，测定结果并计算RSD为1.05%。

2.8 加样回收率试验

称取已知含量的延龄草粉末0.05g，共9份，分别精密加入1.02mg/mL的薯蓣皂苷元对照品1.0，1.2，1.4mL，按“2.2”项下方法处理样品，按“2.4”项下方法测定吸光度，回收率99.43%，RSD为2.64%，结果表明，加样回收率及相对标准偏差均符合要求。

表1 薯蓣皂苷元加样回收率试验结果表

2.9 样品含量测定

按照“2.2”项下操作方法，制备5批供试品溶液，按“2.4”项下方法测定吸光度，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

本文运用高氯酸、浓硫酸∶甲醇（4∶1）、5%香草醛-冰醋酸∶高氯酸（2∶8）分别对供试品溶液进行显色，在200～700nm波长测定吸收光谱。结果显示以高氯酸为显色剂重现性好。由于比色法所显颜色随显色温度和时间变化而变化，因此，必须严格控制条件，尽量排除干扰。延龄草中所含化学成分除皂苷类外，尚有大量糖类、甾酮等物质，提取物直接进行比色测定干扰较大，误差较大，因此我们对延龄草药材进行萃取以除去部分对显色反应有干扰的物质。

[1] 谢宗万.全国中草药汇编(上册)[M].第二版.北京:人民卫生出版社, 2000: 225.

[2] 喻玲玲,邹坤.延龄草属植物的化学成分及药理活性研究进展[J].中成药,2008,30 (9):1350.

[3] 喻玲玲,邹坤.延龄草总皂苷体内外抗肿瘤作用研究[J].2008,31(5):733.

（责任编辑: 胡慧玲）

Content determination of total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. /LUO Fang-li,

GUO Li, XU Li, BEI Yuan //(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China )

s] Objective: To establish the assay method of total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. Method: The total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. was calculated with diosgenin as reference. The medicine was in coloration with perchloric acid, and absorbability was detected at 408 nm by adopting spectrophotometric method. Result: The calibration curve was linear in the range of 0.01 mg．mL-1～ 0.06 mg．mL-1（R2= 0.9996）. The average recovery of diosgenin was 99.43% and RSD was 2.64%. Conclusion: The method is simple, accurate, sensitive and reproducible. It can be applied in the quality control of Trillium tschonoskii Maxim..

Trillium tschonoskii Maxim.; total saponins; diosgenin; spectrophotometric method

R 282.6

A

1674-926X(2014)02-006-02

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

罗方利，硕士在读，主要从事中药有效成分分析研究 Email:870905012@qq.com

郭力，教授，博士生导师，主要从事中药药效物质基础及质量标准化研究 Email:gli64@sina.com

2013-06-08