吕维，吴恋，叶娜，罗红丽，王春艳，万丽

·品种品质·

HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸和藁本内酯的含量

吕维，吴恋，叶娜，罗红丽，王春艳，万丽

目的：建立高效液相色谱法同时测定川芎药材中阿魏酸和藁本内酯的方法。方法：采用Dikma Kromasil C18(250 nm×4.6 mm,5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-0.1%冰醋酸水溶液（65∶35）；流速1.0 mL．min-1；检测波长：320 nm；柱温30℃。结果：川芎药材中2种成分得到良好的分离，阿魏酸在0.032～0.3179μg范围内，藁本内酯在0.244～2.44 μg范围内线性关系良好，平均回收率分别为98.4%和98.8%。结论：本方法简便，准确，重复性好，为多组分评价川芎药材质量提供了可靠的分析方法。

]HPLC；阿魏酸；藁本内酯；川芎

川芎为伞形科藁本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎，始载于《神农本草经》，列为上品，应用非常广泛。其性温，味辛、微苦，具有活血行气、祛风止痛之功效。主治血瘀气滞致月经不调，肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛、头痛、风寒湿痹等疾病[1]，现代药理研究表明川芎具有保护内皮细胞、抑制脂质过氧化、抗血栓、抗心肌缺血、舒张血管、抑制神经元变性等药理作用[2～5]。川芎主要活性成分是藁本内酯、川芎嗪、阿魏酸等[6～8]，因川芎嗪约占生药的0.001%～0.002%[9]，含量甚微，故本实验采用高效液相色谱法，建立了同时测定川芎药材中阿魏酸和藁本内酯含量的方法，为组分评价川芎药材质量提供了一定科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪：Agilent 1200 series，包括四元泵（G1311A）带真空脱气机（G1322A）,柱温箱（G1316A），DAD紫外检测器（G1315D），Agilent Technologies 色谱工作站（美国Agilent 公司）；KQ3200E型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发器（RE-5203，上海亚荣生化仪器厂）；恒温水浴锅（北京国华医疗器械厂）；BS124S（万分之一）、BP211D（十万分之一）型电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 试药

藁本内酯（批号：MUST-12082702，纯度≥98%（HPLC），成都曼斯特生物科技有限公司）；阿魏酸（批号：MUST-12112204，纯度≥99.32%（HPLC），成都曼斯特生物科技有限公司）；川芎药材（购自成都市国际商贸城药材市场，经成都中医药大学标本馆卢先明教授鉴定为伞形科藁本属植物川芎）。所用水为超纯水，高效液相用甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Dikma Kromasil C18(250 nm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.1%冰醋酸（65∶35）；检测波长：320 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL．min-1；进样量：10μl。

2.2 方法的专属性

在上述色谱条件下，分别取对照品溶液和供试品溶液进样分析，在供试品色谱图中，各色谱峰得到良好的分离，无干扰。色谱图见图1。

图1 对照品和川芎药材色谱图

2.3 供试品溶液的制备

取川芎药材粉末（过3号筛）0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL。称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密称取阿魏酸对照品和藁本内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含阿魏酸15.984 μg、含藁本内酯0.122 mg的混合对照品溶液。按“2.1.1”色谱条件，分别进样2、5、10、15、20 μl，测定，记录各自峰面积，以对照品质量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得阿魏酸回归方程：Y=4963.6X+20.246(r=0.9994)，藁本内酯回归方程：Y=2047.8X+41.195（r=0.9994)。阿魏酸在0.0320～0.3179 μg范围内，藁本内酯在0.244～2.44 μg范围内呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

同一混合对照品溶液重复测定6次，计算阿魏酸、藁本内酯的RSD分别为1.96%、1.38%，说明精密度良好。

2. 6 稳定性试验

取“2.3”项下的同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，12，24 h，照“2.1”色谱条件，进样分析，分别求得阿魏酸、藁本内酯峰面积的RSD分别为1.73%、1.91%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2. 7 重复性试验

分别取同一批川芎药材粉末约0.5 g，6份，精密称定，按“2.3”项下制备供试品溶液，照“2.1”色谱条件，进样分析，分别求得阿魏酸、藁本内酯含量平均值分别为1.569 mg．g-1、12.232 mg．g-1；RSD分别为1.87%、1.16%。

2. 8 加样回收率试验

取已知含量的同一批川芎药材粉末6份，每份约0.25 g，精密称定，分别加入混合对照品适量，按“2.3”项下制备供试品溶液，照“2.1”色谱条件，进样分析，计算回收率，结果见表1。阿魏酸、藁本内酯平均回收率分别为98.4%、98.8%；RSD分别为1.41%、1.23%。

表1 回收率试验结果（n=6）

2.9 样品测定

取不同批次川芎药材粉末约0.5 g，精密称定，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件，进样分析，分别计算其2种成分的含量，结果见表2。

表2 川芎药材中阿魏酸和藁苯内酯测定结果（n=2）

3 四川敖平 2012 1.436 12.751 4 四川敖平 2012 1.311 11.427 5 四川敖平 2013 1.564 12.268 6 四川敖平 2013 1.378 13.546 7 四川敖平 2013 1.452 12.039 8 四川都江堰 2012 1.699 13.778 9 四川都江堰石羊镇 2013 1.546 18.62 10 四川都江堰石羊镇 2013 1.772 13.573

3 讨论

3.1 色谱条件的选取与优化

本实验中有机相选择甲醇，水相考察了冰醋酸、磷酸、甲酸。结果，以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液能达到较好的分离效果，并且用等度洗脱的方法实现了阿魏酸和藁本内酯的同时测定。

3.2 供试品溶液的制备方法考察

根据川芎化学成分，总结2010年版《中国药典》川芎制剂中川芎提取溶剂，考察了甲醇、乙醇，结果两种溶剂提取的阿魏酸和藁本内酯含量差别不大，又考虑甲醇毒性，所以选择了乙醇作为提取溶剂。另外，同时比较了超声和回流的提取方法，结果回流方法提取的量高于超声提取。因此，采用以乙醇回流提取1小时作为供试品溶液的制备方法。

3.3 川芎药材的贮存

在本实验过程中，作者发现随着时间的延长，贮存川芎药材粉末的封口袋上有粘滞的手感，而川芎药材中的藁本内酯的量有所降低。刘毅[10]等也发现川芎药材以粉末状态放置，藁本内酯的量降低非常明显，表面“泛油”现象严重。从不同批次川芎药材测定结果中也可看出，2013年收集的川芎药材中阿魏酸和藁本内酯含量均较2012年的高。因此，建议川芎药材贮存时间不宜过长，不要以粉末状态贮存，应以原药材保存为佳。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [S].北京:中国医药科技出版社,2010:38.

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[8] 张玲,刘友平,李旻,等.川芎化学成分分离鉴定与藁苯内酯的含量测定[J].中国药房,2010,21(15):1381.

[9] 陈立娜,金哲雄,蒋竟,等.川芎嗪提取工艺的研究[J].黑龙江医药,2000,13(5):278.

[10] 刘毅,刘素香,张铁军,等.HPLC法测定川芎中阿魏酸和藁本内酯[J].药物评价研究,2010,33(3):210.

（责任编辑: 胡慧玲）

Simultaneous determination of the content of ferulic acid and ligustilide in Chuanxiong by HPLC/

LV Wei, WU Lian,YE Na, LUO Hong-li, WANG Chun-yan, WAN Li//( Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective: To develop a HPLC method for simultaneous determination of the content of ferulic acid and ligustilide in Chuanxiong. Method: The analysis was performed an a Kromasil C18(250 nm×4.6 mm,5μm) column. The mobile phase consisted of methanol-0.1%glacial acetic acid(65:35).The fow rate was 1.0 mL．min-1. The detection wavelength was 320 nm and column temperature was 30℃. Result: The ferulic acid and ligustilide was separated perfectively. The standard curve was liner within the concentration range of 0.032 μg ～0.3179 μg for ferulic acid and 0.244 μg ～2.4 μg for ligustilide. The recovery was 98.4% for ferulic acid and 98.8% for ligustilide, respectively. Conclusion: The method is simple, accurate and reproducible, which can be used for the quality control of Chuanxiong.

HPLC; ferulic acid; ligustilide;Chuanxiong

R 284

A

1674-926X(2014)02-003-03

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

吕维（1989-），女，四川绵阳人，在读硕士研究生，从事中药有效成分及质量标准研究

Tel:13618082932 Email:lvwei2007@126.com

万丽，女，教授，从事中药有效成分及质量标准研究 Tel:15982418713 Email:wanli8801@163.com

2013-08-19