宋小亚 刘 昆 曾凡清 郑巧平



一起香菇菌棒品种混杂事故的鉴定分析

宋小亚 刘 昆 曾凡清 郑巧平

（丽水市农业科学研究院，浙江 丽水 323000）

菌种质量；拮抗试验；分子标记；成因

香菇是丽水市食用菌产业的主导产品，菌种质量的好坏直接关系到香菇产业的是否可持续健康发展。近年来由菌种质量问题引发的生产事故时有发生。由于菌种无性繁殖的特点，食用菌产业有“一支母种影响一个食用菌产业”的说法，种源的重要性不言而喻。

2012年5月，丽水市某香菇产区菇农在生产过程中发现菌棒有易断的现象，与往年有明显的不同。经调研发现，部分香菇菌棒有一两条甚至三条拮抗线，菌棒在拮抗线部位容易断裂，疑似有不同品种的香菇菌种混杂。笔者选取了典型的有三条拮抗线的菌棒进行试验研究，探究其成因，为有针对性地开展后期栽培管理提供技术支撑，以期在今后生产中避免或减少出现类似的生产事故。

1 试验材料和方法

1.1 试验材料 选取有4个接种孔、3条拮抗线的香菇菌棒。以拮抗线为界划分为4个样品，取各样品中间部位进行菌株分离。自袋口开始，4个分离菌株依次编号为A、B、C、D。菌棒、拮抗线及分离部位如图1所示。依据调研情况，以事故发生地菇农主栽的高温品种香菇931和香菇9319为对照菌株。

图1 菌株分离示意图

1.2 试验方法

（1）拮抗试验。①在PDA平板培养基上接种菌株A、B、C、D，进行培养，观察各菌株菌落交界处是否产生拮抗反应。各菌株交换位置重复验证。②在PDA平板培养基上接种菌株A、B、C、D于对照菌株周围进行培养，观察各菌株与对照菌株菌落交界处是否产生拮抗反应。培养条件、拮抗反应的观察和判断方法参照国家农业行业标准NY/T 1845-2010 食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应［1］。

（2）菌种真实性鉴定。通过ISSR和RAPD两种分子标记对菌株A、B、C、D及对照菌株香菇931和9319进行遗传分析，作出菌株真实性鉴定。鉴别4个分离菌株是否一致，以及与对照菌株之间的关系。菌丝体培养、DNA模板制备、引物、反应体系、反应条件、PCR产物的电泳检测、数据记录及结果分析方法，分别参照国家农业行业标准NY/T 1730-2009 食用菌菌种真实性鉴定 ISSR法［2］和NY/T 1743-2009 食用菌菌种真实性鉴定 RAPD法［3］。

2 试验结果

2.1 拮抗试验 如图2所示，分离菌株A与C、B与D菌落两两之间无拮抗线；A与B、B与C、C与D、D与A菌落交界处菌丝隆起，表现出典型的拮抗反应，说明菌株A与B、C与D两两之间应为不同品种。A与C、B与D两两之间可能为同一品种。

图2 拮抗试验1

图3 拮抗试验2

如图3所示，分离菌株A、C与对照菌株香菇931之间无拮抗反应，而与对照菌株香菇9319之间有明显的拮抗反应；分离菌株B、D与对照菌株香菇9319之间无拮抗反应，而与对照菌株香菇931之间有明显的拮抗反应。由此可知，菌株A、C和香菇931可能为同一品种，而菌株B、D和香菇9319可能为同一品种。

2.2 菌株真实性鉴定 从ISSR标记对各菌株的扩增结果（图4）可以发现，菌株A、C与香菇931（CK1）的DNA扩增条带高度一致，菌株B、D与香菇9319（CK2）的DNA扩增条带高度一致；菌株A、C、香菇931与菌株B、D、香菇9319的电泳谱带存在明显差异。由此说明，菌株A、C与香菇931的遗传相似性极高，而菌株B、D与香菇9319的遗传相似性极高。

图4 菌株ISSR标记图谱（CK为空白对照，CK1为香菇931，CK2为香菇9319）

从RAPD标记得到的分析结果与ISSR标记一致。

综合拮抗试验和菌株真实性鉴定试验的分析结果可以判断，分离菌株A、C与香菇931应为同一品种，菌株B、D与香菇9319应为同一品种。由此认定，该菌棒上的4个接种孔应为香菇931和9319间隔接种，发菌之后由于交界部位菌丝体互相不亲和而产生拮抗，因此出现了3条拮抗线。

3 小结与讨论

试验表明，问题菌棒混杂了香菇931和9319两个品种。对同批次菌棒的抽样试验发现两种情况，一种为同一菌棒接种同一个品种，结果表现为没有拮抗线，另一种为同一菌棒四个接种孔接种了上述两个品种，结果表现为菌丝交界处出现一到三条拮抗线，且部位不一。经调研发现，菇农在开放式接种过程中普遍采用一人打穴两人接种的协作模式，如果两人所拿菌种为同一品种，则菌棒不表现拮抗，如果非同一品种，则视两人接种速度以及交叉或顺序接入种穴情况，菌棒培养后出现一到三条拮抗线。

一般来说，因错种引发的香菇生产问题不会导致毫无收益，一旦出现，应根据菌棒表现进行初步甄别筛选，技术人员加强后期栽培技术指导，依据不同品种的特性进行分类出菇管理，尽量提高香菇产量和收益，将损失降到最低限度。

目前，丽水市部分香菇主栽品种名称较为相似，如931、939和9319，808和868等，一不小心，菌种标记就很容易混淆，建议育种单位在品种命名时予以区分；同时，菌种企业在菌种保藏和生产过程中做好标记、分类存放，并开展菌种预检送检工作，在生产季节前对食用菌菌种质量进行检测鉴别，以保证所用种源的质量，尽量规避可控风险，预防菌种事故的发生，为食用菌产业健康发展提供保障。

[1] NY/T 1845-2010 食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应. 中国农业出版社：中华人民共和国农业行业标准.

[2] NY/T 1730-2009 食用菌菌种真实性鉴定 ISSR法. 中国农业出版社：中华人民共和国农业行业标准.

[3] NY/T 1743-2009 食用菌菌种真实性鉴定 RAPD法. 中国农业出版社：中华人民共和国农业行业标准.

S646.1

B

2095-0934（2014）01-043-02