朱美芹，王莉莉（江苏省南京鼓楼医院集团宿迁市人民医院检验科 223800）

随着医学科技的不断发展，临床标本的检测均采用自动化、程序化，为适应检测大量标本的需要，本院2013年3月购进了瑞士TECAN公司的FREEDOM EVOLYZER－2200型全自动酶联免疫仪。该仪器加样系统采用的是非一次性的Teflon涂层钢针，容易造成拖带污染[1－2]，为了保证检测结果的准确性，经厂家校验稳定后，对钢针加样系统及洗板机进行拖带污染检测，同时应用TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200全自动酶联免疫仪检测临床血清标本，并与手工方法操作比对，以便能够建立该检测仪与所用试剂构成的新系统的性能数据[3]。具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 1IU／mL的HBsAg质控血清购自北京金豪药业有限公司，批号20120705；乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性混合血清及高浓度的HBsAg阳性混合血清各24份（分3组，每组8份）和随机抽取50份血清标本均来自宿迁市人民医院临床患者。

1.1.2 仪器 TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200型全自动酶联免疫仪，瑞士TECAN公司生产；美国BIO－RAD680酶标仪及KHB ST－36W洗板机。

1.1.3 试剂 乙型肝炎病毒5项检测试剂盒，北京万泰药业有限公司生产。

1.2 测定方法

1.2.1 交叉污染测定[4]将HBsAg阳、阴性混合血清各分为3组，每组均为8管，以H表示阳性标本（阳性混合血清测定的吸光度在3.0以上），以L表示阴性标本，使每根加样针按H1、H2、H3、L1、L2、L3的顺序加样。实验结果以公式[（L1－L3）／H×100%]计算污染率[5]。

1.2.2 两种方法比对检测[6]手工操作严格按试剂说明书进行；全自动酶联免疫仪操作程序严格按试剂盒说明书设置。全自动酶联免疫分析仪与手工操作的测定结果进行对比，50份临床标本酶联免疫分析仪与手工操作同时进行。孔间重复性的检测和板间重复性的检测均采用1IU／mL的HBsAg质控血清进行试验。孔间重复性的检测用连续20孔质控血清的S／CO值；板间重复性的检测观察连续20板的S／CO值，计算CV值。

1.2.3 拖带污染的判断标准[7]拖带假阳性（NP）：板条按A1～A12顺序同一横排连续有2孔以上OD值大于临界值（经过复试只有一个是阳性的）。

2 结 果

2.1 全自动酶联免疫仪各通道交叉污染情况 见表1。

2.2 50份临床标本手工操作与全自动酶联免疫仪检测结果比较 见表2。

表1 HBsAg8个通道的交叉污染率（%）

2.3 用1IU／mL的HBsAg质控对孔间重复性和板间重复性的检测 见表3。

表2 50份标本全自动酶联免疫仪与手工操作测定结果符合率

表3 全自动酶联免疫仪与手工损伤检测重复性评价

3 讨 论

本次实验中的交叉污染实验根据陈亚军等报道[5]的方法设计，HBsAg阳性标本混合血清、HBsAg阴性标本混合血清各3组，每组8管，使仪器的8根加样针均能连续3次加高浓度样品（HBsAg阳性标本混合血清的吸光度平均值为3.712）后，连续3次加低浓度样品（HBsAg阴性标本混合血清的吸光度平均值小于0.020），同时保证了每根加样针加在同一排，洗板的顺序也同样由高浓度向低浓度。如此设计使实验不仅反映加样针所携带的标本和试剂交叉污染情况，也能反映洗板机探针引起的污染误差。通过本实验该仪器的交叉污染率在0.18%～0.92%，比陈亚军等[5]报道还要略高。将此酶联免疫仪与手工操作对照实验，同时测定了50例临床标本的乙肝5项指标，总的符合率为96.4%，其中，HBsAg有一个标本酶联免疫仪测定为阳性而手工测定为阴性，经双孔复测为阴性，因其前一孔为阳性标本，按拖带污染的判断标准此标本属于拖带假阳性。由于酶联免疫吸附测定（ELISA）灵敏度极高（HBsAg仅为1ng／mL），健康人群乙型肝炎感染人群达10%，作者对在本院就诊检查乙肝标志物患者作统计显示每日HBsAg阳性率在12.0%～53.3%，平均阳性率在28.2%。如此高的HB－sAg阳性率，试剂原因如HBsAg加样量为100mL，一次性洗板，以及加样系统采用的是非一次性的Teflon涂层钢针等都容易造成携带污染。因此，要优化程序以进一步降低由于试剂原因及携带污染产生假阳性的因素，比如加样后应增加冲洗探针的次数，同时增加每次洗板的洗液量和次数，精确探针的加样量，调整加样针对酶标板的分配速度和深度等。抗－HBs有一个标本手工操作测定为阳性而全自动酶联免疫仪器测定为阴性，但测定值均与CO值（0.105）相近，分别为0.144和0.091，在预期误差范围内。抗－HBe有4个标本手工操作测定为阳性而本仪器测定为阴性，后经双孔复测均可判断为阴性。原因分析，在ELISA乙肝标志物检测中抗－HBe检测与抗－HBc的检测方法一样，都是酶联免疫一步竞争法，操作时差较长，使先加样的标本阳性率增加[8]。本次研究中，抗－HBc结果不相符的3个标本及抗－HBe结果不相符的4个标本都在前20个标本中，再次手工双孔复测均为阴性或弱阴性结果，这说明本仪器自动加样时间短，缩短了加样时差，弥补手工加样时差对抗－HBe和抗－HBc一步竞争法结果的影响，在这点上全自动酶联免疫仪优于手工操作。用1IU／mL的HBsAg质控血清进行孔间、板间重复性试验，CV%值均低于手工操作测定值，说明该全自动酶联免疫仪与手工相比重复性有一定程度的提高。

ELISA测定不同于一般的临床化学或临床血液学检验，其某一特定的测定批次中不同反应孔因标本和试剂分配时间或分配量的不一致，会造成明显的检测误差[9－10]。中国临床免疫检测仪器不断发展进步，从以前的半自动酶标仪到现在的全自动酶联免疫仪[11]。目前许多检验科免疫室都拥有这两种仪器，在同时使用。但是由于检测系统的不同，结果是否具有可比性关系到检验科免疫室的检测质量，所以每年都应进行仪器之间的比对。本研究通过比对实验对TECAN FREEDOM EVOLYZER－2200全自动酶联免疫仪的性能进行评价，实验结果表明该仪器可以满足临床工作需要。但手工操作方法与全自动酶联免疫分析系统操作方法存在一定的预期偏差[12]，特别是处于CO值附近临床意义可疑的——称之为“灰区”的检测结果，不易判定时，需要考虑两种操作方法间的预期偏差，使同一份标本在不同操作系统的检测结果保持一致，保证检测结果的准确稳定。本实验室刚引进此仪器，要求操作人员严格按照仪器和试剂盒说明书进行相关操作，在使用过程中对本仪器将进行更多的性能检测，加强仪器的保养与维护，确保给临床提供更准确的检测报告。

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