程 松，郭婧澜，丁银环，王开正（泸州医学院附属医院检验科，四川泸州 646000）

精神分裂症是一种精神活动与周围环境不协调的常见精神疾病[1]，虽然做了大量研究，该疾病的分子机制仍未阐明。目前芯片技术和蛋白质组学技术具有高通量的特点，故可用于大规模筛选相关的基因与蛋白质[2]。表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI－TOF－MS）技术是一项蛋白质组学技术，国内外研究报道了该技术检测心血管疾病、肿瘤、感染、器官移植的蛋白质标志物并用于早期诊断的可行性[3－4]，但对精神分裂症研究却未见报道。本研究前期利用该技术，筛选出差异具有统计学意义（P＜0.05）的血清蛋白质标志物[5]，通过查询蛋白质数据库找出对应的血清多肽，再利用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其验证，探索该疾病实验室诊断的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 精神分裂症组来自2007年11月至2008年10月泸州医学院附属医院精神科的住院患者，共计28例，其中男13例，女15例；年龄19～48岁，平均（33.11±8.14）岁；纳入标准：符合国际疾病分类与诊断标准第10版（ICD－10）的精神分裂症诊断标准，首次发病，入院后未接受抗精神病药物治疗，并排除脑器质性和躯体疾病所致的精神障碍。其他精神疾病对照组为同期收治的26例患者，其中，抑郁症患者12例，焦虑症患者7例，颅脑外伤所致的精神障碍者7例；男14例，女12例；年龄19～53岁，平均（36.29±10.54）岁；纳入标准：符合中华医学会精神科分会2001年制定的中国精神障碍诊断与分类标准第3版（CCMD3）的相应精神疾病诊断标准，入院后未接受抗抑郁治疗，并排除精神分裂症。健康对照组为同期到该院体检的健康体检者24例，其中男12例，女12例；年龄21～50岁，平均（34.10±9.12）岁。

1.2 主要试剂与仪器 人神经肽2（NP－2）、内皮素－3（ET－3）、胰岛素样肽A链（INS－A）、Glicentin相关肽（GIP）ELISA试剂盒均购自上海丰翔生物科技公司。Diatek DR－200Bs自动酶标仪由无锡华卫德朗仪器提供。

1.3 方法

1.3.1 制备样品 从医用超低温冷冻冰箱（－80℃）中取出所选中的标本并编号，冰上溶解后4℃10 000r／min离心2min，待用。

1.3.2 ELISA检测 神经肽2、内皮素－3、胰岛素样肽A链、Glicentin相关肽的ELISA操作步骤参考文献[5]。采用Diatek DR－200Bs自动酶标仪检测3组标本中人神经肽2、内皮素－3、胰岛素样肽A链、Glicentin相关肽的吸光度（OD）值。

1.4 统计学处理 对精神分裂症组、其他精神疾病对照组和健康对照组采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析，首先对这3组样本进行方差齐性检验，然后进行方差分析和多重比较。若有方差齐性不相等，假设总体分布未知的情况下，使用非参数检验中的多独立样本检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组标本中人神经肽2、内皮素－3、胰岛素样肽A链、Glicentin相关肽的OD值见表1。

表1 各组神经肽2、内皮素－3、胰岛素样肽A、Glicentin相关肽OD值的比较（x±s）

2.2 3组标本的方差齐性检验 从表2可见，除Glicentin相关肽外，其余所有数值均大于0.05，因此，内皮素－3、胰岛素样肽A链、神经肽2的总体方差相等，方差是齐次的。而Glicentin相关肽的方差是不齐次的。

表2 精神分裂症、其他精神疾病患者和健康人多肽水平方差齐次性检验

2.3 3组标本多肽水平方差分析 从表3中可以看出神经肽2的方差检验F＝4.010，对应的显著性为0.022，小于显著性水平0.05，因此认为神经肽2中至少有一个组与另外一个组差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 精神分裂症、其他精神疾病患者和健康人多肽水平方差分析

表4 精神分裂症、其他精神疾病患者和健康人多肽水平多重比较表（P值）

2.4 多重比较法 用多重比较法统计精神分裂症组、其他精神疾病对照组和健康对照组的多肽水平，发现神经肽2在精神分裂症组、其他精神疾病对照组与健康对照组的比较中差异均有统计学意义（P＜0.05），认为神经肽2在健康人和精神分裂症患者之间存在差异表达。具体数值见表4。

2.5 多独立样本检验 鉴于Glicentin相关肽的方差齐性不相等，假设总体分布未知的情况下，使用多独立样本检验多个样本是否来自于相同分布的总体。结果见表5，从表中可见神经肽2的渐近显著性水平为0.031，小于0.05，因此，只有神经肽2在各组之间的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。

表5 Kruskal Wallis H检验

3 讨 论

精神分裂症影响约世界1%的人口，治疗这种疾病的大多数药物是针对影响单胺能传递的受体。然而，有大量的证据表明，单胺类神经递质常常释放多种类型的神经肽；并且，配体作用于相应的神经肽受体，以调节单胺能的传递。这种神经肽系统包括神经降压肽、缩胆囊素、神经肽Y、阿片肽、速激肽和食欲素等[6]。因此，对精神分裂症神经肽的研究，有可能揭示该疾病的分子机制，并选取特定的生物标志物作为诊断的客观依据[7]。

本研究前期筛选出差异具有统计学意义（P＜0.05）的血清蛋白质标志物。通过查询蛋白质数据库，它们对应的蛋白质名称分别是神经肽2、内皮素－3、胰岛素样肽A链、Glicentin相关肽。从表4可以看出，神经肽2在精神分裂症组VS健康对照组显著性水平为0.040，其他精神疾病对照组VS健康对照组显著性水平为0.008，说明神经肽2在这两组比较中差异有统计学意义（P＜0.05）。而精神分裂症组VS其他精神疾病对照组的显著水平为0.487，大于0.05，故推测神经肽2可能与精神疾病的发生、发展有关。

众所周知，神经系统的功能是由多种神经肽共同参与调节的，精神疾病的发病机制是复杂的，血清中神经肽2仅仅是共同参与并调节神经系统功能的多种神经肽中的一员。目前对精神分裂症患者中枢神经肽2功能的研究很少，结果也很不一致。但可以肯定的是神经肽类进化上保守，并已证明其可调节众多的行为。已经证实它们与一些精神疾病有关，包括精神分裂症。尽管人类对精神疾病的研究存在着一些固有的困难（包括标本量小，病程多变，用药状况影响，伴发的精神障碍的存在，诊断异质性），但是一些研究结果仍然值得注意。有尸检研究认为在额叶和颞皮层的神经肽系统发生了相关改变。来自遗传学的强有力的证据也认为神经肽在精神分裂症中把Neuregulin－1（NRG1）和缩胆囊素受体的研究联系了起来[8]。

本研究初步研究结果显示了神经肽2在精神分裂症患者中表达的差异性，该实验诊断方法为精神分裂症的诊断提供了一种可行的方法。进一步研究宜把芯片技术和蛋白质组学技术结合起来，通过靶基因数据库筛选出相关蛋白质，与已知的蛋白质进行比对分析，以此来阐述该疾病的分子作用机制，并对筛选的蛋白质标志物进行提取、测序和鉴定。

[1]韩柏.精神分裂症的现代研究[M].北京：中国科学技术出版社，2003：2－12.

[2]韩闯，杨盛昌.高通量筛选技术及其应用[J].生物技术通报，2005（2）：22－25.

[3]Ricolleau G，Charbonnel C，Lode L，et al.Surface－enhanced laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry protein profiling identifies ubiquitin and ferritin light chain as prognostic biomarkers in node2negative breast cancer tumors[J].Proteomics，2007，6（6）：1963－1975.

[4]Lin YW，Lin CY，Lai HC，et al.Plasma proteomic pattern as biomarkers for ovarian cancer[J].Gynecol Cancer，2007，16（1）：139－146.

[5]程松.精神分裂症血清多肽和MicroRNA表达差异研究[D].泸州：泸州医学院，2012.

[6]Lacrosse AL，Olive MF.Neuropeptide Systems and Schizophrenia[J].CNS Neurol Disord Drug Targets，2013，12（5）：619－632.

[7]Riley B，Kendler KS.Molecular genetic studies of schizophrenia[J].Eur J Hum Genet，2011，14（6）：669－680.

[8]Cáceda R，Kinkead B，Nemeroff CB.Involvement of neuropeptide systems in schizophrenia：human studies[J].Int Rev Neurobiol，2007，78：327－376.