李 乾 ，李 强 ，丁永忠，任 军，张海林

（1.会宁县人民医院，甘肃 会宁 743200；2.兰州大学第二医院，甘肃 兰州 730000）

垂体腺瘤属内分泌肿瘤，占颅内肿瘤的10%～20%，仅次于脑胶质瘤和脑膜瘤，绝大部分属良性肿瘤。部分向鞍区周围组织浸润生长，破坏正常结构的垂体腺瘤被称为侵袭性垂体腺瘤[1]。该类肿瘤手术完全切除困难，且术后复发率高，治疗效果差，常需综合治疗，是目前神经外科领域的一个难题。研究证实,基质细胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）可促进肿瘤的血管增殖、生长、侵袭，并对恶性肿瘤的扩散和转移有重要作用。为了解人垂体腺瘤组织中SDF-1的表达，笔者进行了如下研究。

1 材料与方法

1.1 材料

选择兰州大学第二医院神经外科2007年3月至2008年7月临床手术并经病理证实的垂体腺瘤患者共63例，其中男39例，女 24例，年龄 17～71岁，平均年龄（41.48±12.25）岁。63例垂体腺瘤患者中，微腺瘤1例，大腺瘤62例。大腺瘤中直径11～20 mm者27例，直径21～30 mm者20例，直径＞30 mm者（巨腺瘤）15例。按内分泌激素免疫组化分类：ACTH型5例，混合型10例，PRL型13例，GH型16例，无功能型19例。根据影像学表现、术中所见、术后病理及免疫组化检测结果，按Wilson改良的Hardy分类法，确定侵袭性垂体腺瘤30例，非侵袭性垂体腺瘤33例。标本均经10%的福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，行免疫组化染色。对10例侵袭性垂体腺瘤和14例非侵袭性垂体腺瘤新鲜标本进行逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）检测。

1.2 SDF-1蛋白的免疫组化检测

采用亲合素—生物素—过氧化酶复合物技术（avidin-biotinperoxidase-complex-technique，ABC）检测。兔抗人SDF-1单克隆抗体购于美国USCNLIFE公司，设阳性对照，用磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）代替一抗作阴性对照。SDF-1一抗工作浓度为1∶50。结果判定标准：SDF-1蛋白阳性染色以细胞核出现棕褐色染色为阳性细胞。光镜下取5个细胞密集的高倍视野（×400倍），计数500个肿瘤细胞，计算阳性细胞的百分率。按其阳性率分 4级：＜25%（-），25%～50%（+），51%～75%（++），76%～100%（+++）。其中，+～++为弱阳性，+++为强阳性。

1.3 SDF-1m RNA的RT-PCR检测

用Trizol提取细胞总RNA，用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA。根据基因库中CXCR 4基因序列设计引物，F：5′-AATCTTCCTGCCCACCAT-3′，R：5′-ATCCAGACGCCAACATAG-3′，扩增产物大小为367 bp。同时以人GAPDH为对照，上游：5′-CCATCACCATCTTCCAGGAG-3′，下游：5′-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3′，扩增产物为372 bp，均由上海赛百盛有限公司合成。RT-PCR产物采用Image Master图像分析仪进行灰度扫描。

1.4 统计学处理

应用SPSS 10.0软件行χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 免疫组化检测结果

（1）SDF-1在侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤中均有阳性表达，表达位于细胞核内，表现为细胞核被染成棕褐色。

（2）SDF-1在30例侵袭性垂体腺瘤中的阳性表达率为60.00%，在33例非侵袭性垂体腺瘤中的阳性表达率为24.24%。χ2检验分析表明，侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1的阳性表达率明显高于其在非侵袭性垂体腺瘤中的阳性表达率（χ2=9.042，P=0.029）（见图 1～3）。

图1 侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1的表达

图2 非侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1的表达

图3 侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1阳性表达率对比

2.2 RT-PCR检测结果

侵袭性垂体腺瘤组SDF-1mRNA的表达水平为（3.845±0.426），非侵袭性垂体腺瘤组SDF-1mRNA的表达水平为（2.281±0.235），两者相比，差异有显著性（P=0.004）。

GH型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平高于GH型非侵袭性腺瘤；PRL型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平高于PRL型非侵袭性腺瘤；混合型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA表达水平高于混合型非侵袭性腺瘤；ACTH型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平高于ACTH型非侵袭性腺瘤。同一内分泌型垂体腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平，侵袭性腺瘤高于非侵袭性腺瘤，且二者差异有显著性。GH型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平最高。无功能型侵袭性腺瘤中SDF-1mRNA的表达水平与非侵袭性腺瘤比较，差异无显著性。

3 讨论

垂体腺瘤呈膨胀性生长，有假包膜，侵袭性垂体腺瘤有向周围结构侵袭生长的特点，但其在组织学和生物学行为上仍属良性肿瘤。目前对垂体腺瘤侵袭性的诊断多依靠影像学检查其有无肿瘤破坏骨质，侵犯海绵窦、蝶窦及包绕颈内动脉等，并结合术中观察有无肿瘤组织侵犯硬脑膜、海绵窦、骨质、视神经、颈内动脉等，以及术中取硬脑膜送病理学检查。其中最常用的是用Wilson改良的Hardy分类法[2]中Ⅲ～Ⅳ级或C、D、E期的肿瘤归为侵袭性肿瘤，但这些方法存在较多的局限性。我们通过分析SDF-1在垂体腺瘤中的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系，试图找到一种判断垂体腺瘤侵袭性的有用指标，以便更好地了解肿瘤本身固有的生物学侵袭性，为术后检测与辅助治疗提供理论依据。

表1 30例侵袭性和33例非侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1mRNA的表达水平（）

表1 30例侵袭性和33例非侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1mRNA的表达水平（）

注：a表示与非侵袭组相比，P＜0.05；b表示与非侵袭组相比，P＜0.05；c表示与非侵袭组相比，P＞0.05；d表示与非侵袭组相比，P＜0.05：e表示与非侵袭组相比，P＜0.05

组别 SDF-1mRNA P值GH侵袭性腺瘤GH非侵袭性腺瘤PRL侵袭性腺瘤PRL非侵袭性腺瘤无功能型侵袭性腺瘤无功能型非侵袭性腺瘤混合型侵袭性腺瘤混合型非侵袭性腺瘤ACTH侵袭性腺瘤ACTH非侵袭性腺瘤例数797610946235.109±1.411a 2.608±0.9264.996±1.398b 2.595±0.9203.053±0.862c 3.310±0.8324.911±0.729d 2.513±0.6584.993±0.335e 2.627±0.7880.0010.0040.5180.0010.031

SDF-1是骨髓基质细胞产生的CXC类趋化蛋白，系统命名CXCL12。SDF-1是从鼠骨髓细胞表面克隆而来的一个CXC亚族，作为前体B细胞的刺激因素的一种化学刺激因子，有α、β、γ3个形式，脑组织中SDF-1α占绝大多数。人类和鼠类化学刺激因子只有一个氨基酸序列不同，现在认为这个序列起重要作用。SDF-1的作用是通过一个G蛋白偶联受体亚家族成员CXCR4起作用。CXCR4不仅表达于免疫细胞造血干细胞，还表达于神经上皮细胞、内皮细胞、成熟神经细胞、胶质细胞[3]。趋化因子通过控制白细胞的活化和趋化作用，淋巴细胞的增殖免疫作用，对免疫系统的调控起作用。Angela等[4]研究证实，SDF-1在促进人类肝癌细胞的生长、扩散和转移中有重要作用。Michelle等[5]的研究认为，SDF-1通过血红蛋白加氧酶依赖机制促进血管增殖，在血管损伤局部的血管增殖和免疫细胞活化反应中起重要作用。陈琼等[6]研究认为，SDF-1α通过其受体CXCR4介导信号通路影响细胞生物学行为，主要包括生长、迁移、形态学改变。SDF-1α和CXCR4的相互作用与肿瘤细胞迁移、侵袭等有关，对一些肿瘤向特定器官特定方向转移起密切相关的作用[7]。Kato等[8]发现，乳腺癌淋巴转移中伴随着CXCR4局灶性高表达。Brand等[9]发现，在临床前列腺癌标本中CXCR4mRNA呈高表达。

本研究分别用免疫组化法和RT-PCR分析检测SDF-1在垂体腺瘤中的表达。结果表明，SDF-1在垂体腺瘤中均有阳性表达，表达位于细胞核内，阳性着色表现为细胞核被染成棕褐色。侵袭性垂体腺瘤组织中SDF-1蛋白质和mRNA表达水平较非侵袭性垂体腺瘤明显增高。进一步分析显示，除无功能型垂体腺瘤外，GH、ACTH、混合型垂体腺瘤中，侵袭性腺瘤的SDF-1mRNA表达水平均较非侵袭性腺瘤显著增高。其机制可能因SDF-1生物学轴与多种肿瘤的生长、侵袭都有密切关系。故SDF-1是判断垂体腺瘤是否有侵袭性的指标，对于判断垂体腺瘤的侵袭性和复发有重要意义，为术后检测与辅助治疗提供理论依据。因此，要充分利用SDF-1的这一特征，使其发挥抗肿瘤增殖、抑制肿瘤侵袭性的作用。

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